Кафедра технология и стандартизация
жүктеу/скачать 0.66 Mb.
|
| ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 7
ОПРЕДЕЛЕНИЕ АМИННОГО АЗОТА Определение содержания свободного азота аминокислот производится колориметрическим методом с нингидрином. Данный метод дает возможность определять аминокислоты, аммиак и, в дополнение, конечные α -аминогруппы пептидов и протеинов. Частично определяется и пролин (при используемой длине волны). Этот метод неспецифичен для α-аминного азота, так как β-аминобутановая (аминомасляная) кислота, присутствующая в солодовом сусле, также дает цветную реакцию с нингидрином. Метод применим ко всем солодам. Для анализа готовят лабораторное сусло так же, как для определения экстрактивности солода, но перед анализом его разбавляют до 1 см3 /100 см3 . Из реактивов готовят несколько растворов. Красящий раствор получают растворением в воде 100 г натрия фосфорнокислого двухзамещенного (Na2HPO4 12H2O), 60 г калия фосфорнокислого однозамещенного (KH2PO4), 5 г нингидрина и 3 г фруктозы с доведением объема до 1 дм3 . Раствор с рН 6,6–6,8 можно хранить до 2 недель в холодном месте в темной колбе. Раствор разведения готовят из 2 г йодата калия. KJO3 растворяют в 600 см3 воды и добавляют 400 см3 96 %-го этанола. Стандартный раствор глицина получают, растворяя 0,1072 г глицина в воде до 100 см3 , и хранят его при температуре от 0 до 4 С. Для анализов 1 см3 этого раствора глицина разводят водой до 100 см3 . Полученный раствор содержит в 1 дм3 2 мг аминного азота. Х о д р а б о т ы . Образец сусла разбавляют в воде так, чтобы в 1 дм 3 содержалось от 1 до 3 мг аминного азота. Обычно 1 см3 сусла раз- 15 водят до 100 см3 водой, берут 2 см3 разведенного раствора в пробирку и добавляют 1 см3 красящего раствора. Пробирку закрывают стеклянной пробкой, помещают в кипящую водяную баню точно на 16 мин и охлаждают в воде температурой 20 С в течение 20 мин. Затем добавляют 5 см3 раствора разведения, перемешивают и измеряют оптическую плотность при длине волны 570 нм в 10 мм кювете (в нулевой кювете используют раствор, в котором вместо сусла отмерено 2 см3 воды, а остальные реактивы присутствуют). Для каждого определения необходимо сделать три повторных опыта со стандартным глициновым раствором, используя 2 см3 разбавленного раствора глицина. Для сусла из темного солода устанавливают поправку, набирая в пробирку 2 см3 разведенной пробы образца, добавляют 1 см3 воды и 6 см3 раствора разведения. Измеряют оптическую плотность при длине волны 570 нм и вычитают это значение из оптической плотности, полученной в опыте. Рассчитывают содержание свободного - аминного азота (FAN, мг/дм3 ) по формуле FAN = A 1x 2 d / A2, где А1 – оптическая плотность опытного раствора при длине волны 570 нм в кювете толщиной 10 мм; А2 – оптическая плотность стандартного раствора в тех же условиях; d – коэффициент разведения (например, при разведении раствора объемом от 1 до 50 см3 коэффициент разведения равен 50). В лабораторном сусле содержание свободного -аминного азота составляет от 110 до 180 мг/дм3 , в пересчете на сухое вещество – от 0,11 до 0,16 %. П р и м е ч а н и е . Все растворы необходимо переносить только пипеткой с грушей. жүктеу/скачать 0.66 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|