- Пиросеквенирлеу әдісі ДНҚ-ның қосымша тізбегін синтездеу кезінде пайда болатын пирофосфатты анықтауға негізделген.1988 жылы E. Hyman алғаш рет бұл әдісті жүйелеу үшін қолдануды ұсынды. 1996 жылы P. Nyrén және M. Ronaghi осы әдісті егжей-тегжейлі әзірлеуді аяқтады
- Осы технологияға сәйкес нуклеотидтердің төрт түрінің ерітінділері ДНҚ фрагменттерін ретке келтіру процесінде қатарға қосылып, әр реакциядан кейін жуылады. Келесі нуклеотид синтезделген қосымша тізбекке қосылған кезде, шығарылған пирофосфат дайындалған бір ішекті ДНҚ матрицасында люцифераза ақуызымен байланысып, нәтижесінде жарық сигналын алу арқылы анықталады. Реакция кезінде қосымша тізбекДНҚ аяқталады, ал нуклеотидтер тізбегі жарық сигналдары арқылы пиро-бағдарламадағы шыңдар түрінде анықталады, олардың қарқындылығы ДНҚ тізбегіне келесі реакция қоспасынан бір типтегі нуклеотидтер санына пропорционалды Қарапайым химиялық реакциялар және сенімді детекция жүйесі гельдерді, электрофорезді және нақты флуоресцентті белгілерді осы әдіспен қолдану қажеттілігін жояды.
- Осы бағыттағы көшбасшы "Biotage AB" корпорациясы бірқатар жүйелерді, атап айтқанда 99% дәлдікпен ДНҚ тізбегін (1 сағат ішінде 96 үлгі) анықтаудың жоғары жылдамдығына ие "PyroMark Q96 ID"әзірледі. Пиросеквенирлеу кезінде құрылғыда реактивтер сиялы принтердің басымен үлгілері бар планшеттің тесіктеріне енгізіледі, содан кейін олар алынып тасталмайды, бірақ арнайы фермент – апираза арқылы бөлінеді, бірақ бұл әдіс ДНҚ-ның реттелген фрагменттерінің ұзындығын сапалы анықтауға мүмкіндік бермейді200 б.з. д., сонымен қатар ДНҚ тізбегінде бірдей нуклеотидтердің саны қатарынан 6-дан асады. Осылайша, бұл әдіс ДНҚ мен РНҚ-ның көптеген қысқа тізбегін (маркерлік аймақтарды) тез анықтауға, нуклеотидтердің бір мутациясын анықтауға, қайта реттеуге және т.б. тиімді, бұл капиллярлық электрофорезге қарағанда зерттеу уақыты мен құнын едәуір төмендетеді
Достарыңызбен бөлісу: |
