ГЛАВА 3 ЭПИЗООТОЛОГИЯ И ЭТИОЛОГИЯ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ТЕЛЯТ В ИРКУТСКОЙ ОБЛАСТИ

Мониторинговые исследования по распространению желудочно-кишечных болезней молодняка крупного рогатого скота, вызываемых возбудителями рода Escherichia показали, что эпизоотическая ситуация по колибактериозу в Иркутской области является достаточно напряженной. При исследовании образцов патологического материала с подозрением на колибактериоз в период с 2006 по 2011 гг. в ФГБУ “ИМВЛ” положительными на колибактериоз оказались 1926 проб, что составило 18,1 % от общего количества проб. При серологической диагностике был выявлен 31 серотип E. coli. По результатам бактериологического исследования патологического материала от павших телят выявлялось от 8,3 (в 2009 г.) до 22,52 % (в 2007 г.) положительных по колибактериозу проб (табл. 1).

Данные по заболеваемости молодняка желудочно-кишечными болезнями за 2009-2010 гг. представлены в таблице 2. Анализ данных свидетельствует о том, что снижения заболеваемости не наблюдалось практически по всем районам Иркутской области.
Глава 4 Эколого-биологические аспекты антимикробного воздействия препарата траметин в отношении энтерогеморрагической кишечной палочки.

Определение характера взаимоотношений T. pubescens и бактерий семейства Enterobacteriaceae

Установлено, что гриб T. pubescens оказывает антимикробное действие на бактерии семейства Enterobacteriaceae, полностью подавляя рост референтных штаммов E. coli ATCC 25992, Salmonella typhimurium ATCC 13311 Enterobacter aerogenes ATCC 13048, что свидетельствует об ярко выраженном антагонистическом характере взаимоотношений продуцента и исследуемых тест-культур, что позволило предположить о наличии антимикробной активности гриба-ксилотрофа в отношении клинических штаммов семейства Enterobacteriaceae, в том числе и энтерогеморрагической кишечной палочки серотипа O157:H7, выделенной из патологического материала от больных животных на молочно-товарных фермах Иркутской области.

Для определения антимикробной активности препаратов Леван-2 и траметин использовали референтные штаммы микроорганизмов (E. coli АТСС-5264; E. coli АТСС-35218; E. coli АТСС-1176; Enterococcus faecalis), патогенные штаммы микроорганизмов, выделенные из патологического материала и идентифицированные в ФГБУ «ИМВЛ» (E. coli-ТИ от теленка; E. coli-О4; E. coli-139-1; S. enteritidis, S. ngor – от птиц). Результаты представлены в таблице 3.

Высокая биологическая активность препарата Леван-2 определяется наличием в его составе веществ терпеновой природы, в частности, полипореновой кислоты и кориопубесцина ( В.А. Чхенкели, 2006). Поскольку траметин является модифицированным препаратом, необходимо было изучить его состав, чтобы выявить природу веществ, влияющих на его антимикробную активность.

Нами обнаружено более 80 компонентов, среди которых терпены, алифатические альдегиды, спирты терпенового ряд, тритерпеноиды, жирные кислоты, стеароптены. На наш взгляд, наибольший интерес представляют органические кислоты (янтарная, пропионовая, бензойная, фумаровая, фенилуксусная, олеиновая) и их эфиры.

Таблица 5 - Химический состав экстрактов

Форма	Наименование компонентов
	Экстракция гексаном	Экстракция хлороформом
1	2	3
Нативная	Бензойный альдегид 2,4 – дихлорофенилизотиоцианат 3 –хлоро -4 – метоксибензальдегид 3 –аминофенол Флорин	3,7 –декадиен- 5,6 -диол,4,7 –диме…. 2 –бутеновая кислота Гексадекан 2 -пропионовая кислота Бензойная кислота Октадекан 10 –метилнонадекан 2H–имидазо[4,5d]пиримидин -5,7 4-флоро –N – фурфурилбензамидин 3 –флоробензиламин Пирроло[1,2-a]пиразин- 1,4, -дион 1,2 –бензидиндикарбоновая кислота n –гексадекановая кислота Пентадекановая кислота Тридекановая кислота Олеиновая кислота Тетрадецил – трифлороацетат 14 –пентадекановая кислота 2(1Н) – пиримидин Эйкозан Пентакозан Этофумезат Ацетамид Бензоквинолин Октадекан 1,2,5 -Оксадиазол -3 –амин 3 –метил -1 –фенил -2 –азофлорин Хенэйкозан 1Н – индол -2 –карбоновая кислота 5- метил -2 –фенилиндолизин Эргостин 3 –Фенил -4 –азафлоренон Гексадекан Этофумезат
1	2	3
Модифициро-ванная	2,5 –диметилбензин -1,4 –диол 3 –аминопиразол 2,5 –октадиен 1,4 –бензодиоксол -5 –амин Циклопентан 9 –октадецин 1,2 –бензидиндикарбоновая кислота Норкетон 5 -метокси -5- нитробензотрифлорид 3 –аминофенол 2,4 –гептадиен 6,6 –диметилгепта -2,4 –диен 1,4 –гексадиен 1,5,9 –декатриен Этофумезат 3 -гидрокси – бета – дамаскон Бензамид 1,3 –бензиндиол 2 – гидроксипропионовая кислота N –метил -1 – адамантанацетоамид [1,2,4]триазоло [1,5 -а] пиримидин Сквален Фенилуксусная кислота	Гексадекан Оксолиновая кислота 1 –изпренил-3,5-диметил -5-… 2,5 –диметилбензил -1,4 -диол 1,2 –бензидиндикарбоновая кислота Бензоквиналин Этофумезат 2 –флорбензиловый альдегид 3 –флоробензиловый спирт 2,4 –декадиеналь Гексадекан 2,5 –Диметилбензин -1,4 –диол 2- бутил – дельта1 –пирролин 3 –октин 3,4 –гексадиеналь Нафалин Кофеин Дегидрокси – изокаламендиол Лонгифолинальдегид Пирроло[1,2а] пиразин -1,4 –дион 4 –нитро -3 –пиколин –n –оксид 1.2. –бензиндикарбонова я кислота 5 –флоро –m- ксилин 2,4 –гептадиен 3 –аминофенол Эрготаман -3,6,18 –трион Гептадекан 1,2 –бензизотиазол -3 амин 1,2 –бензоквинолин Бета-аланин 1Н – индол -2 –карбоновая кислота 2 –метил –пентановая кислота 5,5 –диметил -3 -оксо -1 –пирролин 1 –пирролидиндикарбокальдегид Тиазол Саркозин 1,2 –циклогексадикарбоновая кислота 5 –формил -4 –метилтиазол Фумаровая кислота

В составе свободных кислот обнаружены метилированные производные фенолальдегидов и фенолоксикислот (табл. 5).

Особое внимание привлекло обнаружение в хлорофорном экстракте препарата оксолиновой кислоты, которая подавляет активность ДНК-гидразы, нарушая процесс репликации ДНК, хорошо всасывается в желудочно-кишечном тракте, быстро выводится почками в неизмененном виде, действует преимущественно на грамотрицательные бактерии (Proteus, Escherichia coli и др.), а также на некоторые грамположительные кокки (St. aureus), в том числе и при наличии резистентности к другим химиотерапевтическим препаратам (за исключением хинолонов — перекрестная устойчивость). Необходимо отметить, что в настоящее время не производится ни одного препарата с оксолиновой кислотой. Обнаружение этого хинолона, обладающего антимикробным действием, в составе продуктов биосинтеза гриба-продуцента T. pubescens еще раз убедительно подтверждает уникальность свойств препарата траметин.
Усовершенствование методики индикации и диагностики энтерогеморрагической кишечной палочки (ЭГКП) в ветеринарии

Учитывая сложившуюся ситуацию по индикации и диагностике ЭГКП О157:Н7 в ветеринарной медицине, целесообразно было предложить быстрый, эффективный и недорогой способ индикации возбудителя, применимый непосредственно в животноводческих хозяйствах, и далее разработать методические указания по индикации и диагностике ЭГКП для организаций ветеринарного профиля. В качестве такого метода для экспресс-диагностики колибактериоза, этиологическим фактором которого является ЭГКП серотипа О157:Н7, на основе проведения сравнительных экспериментальных исследований нами был предложен метод иммунохроматографического анализа с использованием тест-систем «E. coli О157:Н7 Тест» производства Novamed Ltd (Израиль) .

Апробацию методики проводили на патологическом материале, полученном от крупного рогатого скота на МТФ ОАО СХ «Белореченское» и производственного отдела ГНУ ИрНИИСХ Россельхозакадемии. Всего было исследовано 198 проб, из которых положительными на присутствие ЭГКП серотипа O157:H7 оказались 37.


Рис. 1. Распределение положительных и отрицательных проб при определении ЭГКП серотипа О157:Н7 в патологическом материале от крупного рогатого скота всех возрастных групп
Анализ полученного материала показал, что от животных всех возрастных групп животных положительные пробы на ЭГКП серотипа О157:Н7 составляют 18, 68 % . При этом у молодняка животных (в возрасте от 1 сут. до 3 мес.) обнаружено 12,82 % положительных проб, у взрослых животных - 24,32 %. Необходимо отметить, что у телят, от которых были выделены изоляты ЭГКП серотипа О157:Н7, наблюдали клинические признаки острого кишечного заболевания, а взрослые животные являлись только носителями возбудителя. Чтобы убедиться в достоверности полученных результатов, параллельно проводили бактериологический анализ паталогического материала по методике, предложенной Н.А. Шкилем и В.Ю. Коптевым (2006). Для подтверждения результатов был также использован метод биологических проб на лабораторных животных (В.А. Чхенкели, 2013).

а	б

Рис. 2. Распределение положительных и отрицательных проб при определении ЭГКП серотипа О157:Н7 в патологическом материале от крупного рогатого скота различных возрастных групп: а – от телят; б – от взрослых животных

Учитывая сходимость результатов по всем трем методикам, а также проведённые экономические расчёты эффективности применения тест-систем, был сделан однозначный вывод о возможности и целесообразности использования тест-систем «E. coli О157:Н7 Тест» для индикации и диагностики ЭГКП серотипа O157:H7 в ветеринарной практике, а именно: для проведения мониторинговых исследований непосредственно в животноводческих хозяйствах.

Для сравнительного определения чувствительности/устойчивости изолятов ЭГКП серотипа О157:Н7 к антимикробным препаратам был выбран 21 препарат, среди которых особый интерес представлял траметин. Установлено, что наибольшей чувствительностью штаммы обладают к фурадонину — 60 %, а также ампициллину, цефалексину, тетрациклину — более 40 %. Очевидно (рис. 3), что, антибиотики группы нитрофуранов (фурадонин) проявляют наиболее высокую антимикробную активность, менее эффективны антибиотики пенициллинового (ампициллин), тетрациклинового (тетрациклин), цефалоспоринового (цефалексин, цефтриаксон, цефалотин, цефтазидим, цефотаксим, цефазолин) рядов. Экспериментально установлено, что чувствительными к траметину являются 22 выделенных из патологического материала крупного рогатого скота штамма ЭГКП серотипа О157:Н7 (62,9 %), что в дальнейшем, после определения лечебно-профилактической эффективности препарата, даст возможность его использования в системе борьбы с колибактериозом, этиологическим фактором которого является данный возбудитель.

Для определения морфологии клеток E.coli серотипа O157:H7 была проведена трансмиссионная электронная микроскопия (ТЭМ) изолятов фотографии представлены на рис. 4.

а	б
в	г