Катлинский, Сазыкин. Курс лекций по биотехнологии
клеток, соблюдая определенную плотность популяции (
жүктеу/скачать 2.51 Mb. Pdf көрінісі
|
| клеток, соблюдая определенную плотность популяции ( часть клеток
консервируют). В качестве материала для культивирования можно использовать почки обезьян, почки собак, почки кроликов, куриный эмбрион (возраст -14 дней), клетки легких эмбриона человека (возраст -16 недель). Понятно, что чем моложе материал, тем дольше культивируется клетка. Весьма важным является и процесс консервирования, как средство сохранения нужного генома и посевного материала клеток с определенным временем роста (сохраняют молодые клетки, являющиеся резервным фондом популяции). Особенностью животных клеток является то, что они не способны выдерживать лиофилизации и их консервируют только в жидком азоте при температуре минус 196 0 С. При такой температуре клетки полностью стабильны. Для замораживания используют стеклянные ампулы определенных размеров, например, на 1 миллилитр (мл). Однако в процессе замораживания могут происходить вредные процессы. Это: 1. образование кристаллического льда в клетке 2. обезвоживание 3. повышение концентрации растворенных веществ. Возникновение этих вредных процессов во многом зависит от скорости замораживания. Существуют определенные правила замораживания, которые сводятся к следующему: - нужно использовать ампулы только небольших размеров (на 1 мл), - необходимо внесение криопротекторов (такие, как полиэтиленгликоль (ПЭГ), поливинилпропил (ПВП), диметилсульфацил). - скорость замораживания должна быть одинаковой внутри ампулы и около ее стенки, например, лейкоциты охлаждают со скоростью 0,5 -2 0 в минуту, фибробласты – 1 -3 0 в минуту, клетки эпителия – 2 -10 0 в минуту. Восстановление жизненных функций также проводится с определенной скоростью. Очень важным является и представление о составе питательной среды для культивирования животных клеток. Прежде всего, это 13 незаменимых L- аминокислот с определенной концентрацией их содержания в среде, например, аргинин 0,6 ммоль/л, 93 цистеин 0,1 ммоль/л, изолейцин 0,4 ммоль/л, глутамин 2,0 ммоль/л и так далее. Затем обязательным является и присутствие белков, липидов (из сыворотки), углеводов, витаминов (всего 8), источников углерода (глюкоза 5,5 ммоль/л), сыворотки крови – 5-10% по объему, незаменимых жирных кислоты (линолевая, арахидоновая, линоленовая), предшественников простагландинов, неорганических ионов (натрия хлорид (NaCl), калия хлорид (KCI), кальция хлорид (CaCI 2 ) и т. д., микроэлементов (железо, медь, кобальт, цинк, селен и т д. (всего 15). И, наконец, проблемы стерилизации. • стерилизация среды осуществляется мембранным фильтрованием, среду готовят на дистиллированной, стерилизованной воде, • стерилизация оборудования происходит острым паром или химическим способом (если это пластмассовые детали). Режим культивирования осуществляется при определенной температуре, обычно при 37 0 С. жүктеу/скачать 2.51 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|