Катлинский, Сазыкин. Курс лекций по биотехнологии
неограниченных количествах называются моноклональными антителами
жүктеу/скачать 2.51 Mb. Pdf көрінісі
|
- Бұл бет үшін навигация:
- Такие клетки называются гибридомами.
| неограниченных количествах называются моноклональными антителами.
Способ получения моноклональных антител. Такой способ был предложен в 1975 году учеными Г.Келером и К. Мильштейном. Они вводили антиген в организм мыши и получали активно продуцирующие антитела β- клетки. Эти клетки могут жить только в организме хозяина, но если соединить иммунную клетку с клеткой опухолевой (эти клетки называют миеломные лимфоциты), то образуются гибридные клетки со свойствами своих предшественников, так как они способны долго жить в искусственных условиях и одновременно синтезировать антитела. Такие клетки называются гибридомами. Существуют методы отбора отдельных клеток, синтезирующих только один тип антител. Такие клетки помещают в культуральную жидкость, где они растут, образуя много родственных «клонов», синтезирующих большое количество антител под названием моноклональных. Отсюда возникает название монаклональные антитела. 96 Проведение иммунохимического пнализа. Примером проведения такого анализа может служить хорошо Вам известная реакция гемагглютинации, когда взаимодействие белковых антигенов с антителами вызывает их осаждение, то есть преципитацию. Это только качественный или полуколичественный метод. Проблема установления концентрации антигена решается на основе конкурентного связывания антителами меченного и немеченого антигена, что обусловило, (определило) широкое практическое применение этого принципа. Итак, иммуноферментный анализ применяется в том случае, если можно: 1. получать специфические антитела, 2. получить высокоочищенные антигены, 3. ввести метку, «маркер» в исследуемое вещество, 4. разделить связанные и свободные компоненты реакции, 5. выбрать метод определения концентрации «маркера», 6. оптимизировать и стандартизовать условия проведения анализа. В качестве «маркеров» применяются 1. радиоактивные метки (это радиоиммунный анализ (РИА, с использованием радиоактивных атомов – тритий, радиоактивный иод и другие). 2. ферментные метки (если ферменты стабильны, активны и действуют в минимальных концентрациях). Суть: субстрат превращается в продукт и далее обнаруживается фотометрическим методом. 3. Субстратные метки (АТФ и НАД), которые «пришиваются» к молекуле антигена через адениновый остаток и сохраняют способность взаимодействия с ферментом. Для введения ферментативной метки применяются химические, биохимические, иммунологические способы. Основные методы иммуноферментного анализа. - конкурентные на твердой фазе, суть которых заключается в том, что заданное количество антител конкурентно взаимодействует со смесью неизвестного количества измеряемого вещества и постоянного количества этого же вещества, связанного с какой-либо меткой. После завершения иммунохимической реакции измеряют количество метки, связанной с антителами, используя калибровочные графики. 97 - иммунометрические по принципу «сэндвич»-анализ, когда на твердой фазе иммобилизуют избыток антител, с которыми проводят инкубацию антигена. После удаления несвязавшихся компонентов (антигена) в систему добавляют избыток меченых антител, которые взаимодействуют с антигеном. Чувствительность и точность этого метода выше, чем конкурентных методом. Для сокращения времени анализа и повышения избирательности детекции антигена используют моноклональные антитела, так как они весьма специфичны. - кинетические, принципы те же, но делают измерения в кинетическом режиме для ускорения анализа с использованием программного управления. Это позволяет повысить чувствительность и точность анализа. жүктеу/скачать 2.51 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|