Катлинский, Сазыкин. Курс лекций по биотехнологии
жүктеу/скачать 2.51 Mb. Pdf көрінісі
|
| Рис.10
Внутри клетки есть определенный набор и последовательность генов. При протопластировании идет перегруппировка генов. Также происходит и активация молчащих генов. II-ой метод. Слияние или фузия генов. Прокариот сливают с эукариотом, образуется рекомбинант, содержащий кусок одного ДНК и другого ДНК. III-й метод: Трансформация. а) клетка с определенным набором генов в ДНК → живой протопласт без перегруппипровки генов → протопласт гибрид-рекомбинант → клетка ↑ б) выделение изолированной ДНК в пробирке - вектор (это кусок изолированной ДНК, выделенный из другого микроорганизма (фаг, плазмида) Если есть клетка и изолированная ДНК с нужным геном (вектор) – вектор может быть в виде фага, плазмиды, вируса, космиды (плазмида+ фаг), то можно включить вектор в изолированный протопласт (т.е. провести трансформацию ). 39 При этом образуются «+» продуценты с новыми качествами, но в клетке существуют системы репарации (восстановления) молекулы ДНК и постепенно эти рекомбинанты возвращаются к исходному (дикому) типу. Репарацию преодолевают следующим образом: 1. «+» варианты дополнительно обрабатывают мутагенами для преодоления действия системы репарации; 2. иммобилизация клеток «+» вариантов. Для того, чтобы прошла трансформация, необходимо сделать клетку компетентной, т.е.увеличить ее проницаемость. Это достигается следующим образом: 1. воздействовать на клетку ионами тяжелых металлов (цинк, кобальт, литий, магний) 2. воздействовать на клетку ферментами (лизоцим, комплексный фермент виноградной улитки) 3. быстрое замораживание и оттаивание. Компетентные клетки легче поглощают вектор, куски ДНК. У них обнажена цитоплазматическая мембрана, которая в некоторых местах выходит на поверхность, и в образующиеся в этих местах окошечки, легко проникает вектор в виде изолированной ДНК, а также в виде фага, вируса, космиды (космида- изолированная ДНК или плазмида+ фаг). При протопластировании и слиянии протопластов может происходить явление амплификации (увеличение) генов – при этом продукция целевого назначения (витаминов, гормонов, антибиотиков) увеличивается. Клетки с амплификацией генов есть «+» вариант. жүктеу/скачать 2.51 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|