Выделение суммарной ДНК с использованием детергента СТАВ

Данную методику наиболее часто применяют для выделения ДНК из растений различных семейств. Как уже отмечалось, использование детергента СТАВ в методиках по выделению нуклеиновых {сислот основано на том, что ДНК и РНК в присутствии 0,7 М 1ЧаС1 образуют со СТАВ стабильные, но растворимые комплексы. При снижении концентрации соли до 0,4 М комплексы СТАВ-ДНК и СТАВРНК выпадают в осадок, в то время как белки и полисахариды остаются в растворе. Затем, снова повышая концентрацию соли, осадок СТАВнуклеиновые кислоты растворяют, и с помощью добавления этанола или изопропанола разрушают комплекс, осаждая только нуклеиновые кислоты. Так как константы выпадения в осадок у комплекса СТАВДНК несколько выше, чем у СТАВ-РНК, то можно подобрать такие условия, при которых СТАВ-ДНК комплекс будет преципитировать, в то время как СТАВ-РНК еще находится в растворе. Таким образом, можно очистить выделяемую ДНК от РНК. При этом надо отметить, что у различных растений константы выпадения в осадок СТАВ-комплексов могут несколько различаться. Так, например, в случае выделения ДНК из проростков злаков комплексы СТАВ-нуклеиновые кислоты начинают выпадать в осадок только при концентрации хлорида натрия менее 0,35 М.

При использовании этого метода выделяется более 100 мкг ДНК из 1 г растительной ткани. ДНК, выделенная по этой методике, высокого молекулярна (средний размер более 25 тыс. п.н.), поэтому ее можно использовать для получения геномных библиотек. ДНК, выделенная этим методом, в подавляющем большинстве случаев легко рестрицируется под действием эндонуклеаз и пригодна для проведения КАРБи АРЬР-анализов, блоттинга по Саузерну, а также молекулярного анализа методами, основанными на полимеразной цепной реакции.