Бақылау сұрақтары:
1 Вирустың көбею ерекшеліктері.
2.Вирустардың көбеюінің 2 фазасы мен стат.
3 Вирустық ақуыздардың синтезі.
4.Вирустардың заманауи жіктелуі
5. Жануарлар вирустарының таксономиялық белгілері.
4-ші дәріс тезисі
Дәріс тақырыбы ҚОРШАҒАН ОРТАДАҒЫ ВИРУСТАРДЫҢ
ТҰРАҚТЫЛЫҒЫ. ФИЗИКАЛЫҚ ЖӘНЕ ХИМИЯЛЫҚ ФАКТОРЛАРДЫҢ
ВИРУСТАРЫНА ӘСЕРІ
Сабақ мақсаты:
1.Қоршаған ортадағы вирустардың тұрақтылығы
2. Физикалық және химиялық факторлардың вирустарға әсері.
Физикалық және химиялық факторлардың әсері. Температураның жұқпалы
аурулардың ауырлығына әсерін Эксперименталды зерттеу пастерге (1878)
оралады, ол тауықтардың дене температурасы төмендеген кезде күйдіргіге
төзімділігін жоғалтқанын анықтады. Львов (1959) вирусологтардың назарын
температураның жасуша культурасындағы вирустардың көбеюіне және олардың
эксперименттік жануарлардың денесіндегі мінез-құлқына әсер ету проблемасына
аударды, бірақ бұл жағдайды жасушалық деңгейде және әсіресе дене деңгейінде
айтарлықтай жеңілдетті (Беннетт пен Никастри, 1960). Төмен температураның
жануардың денесіне әсері, мысалы, қалқанша безінің белсенділігінің
жоғарылауына, стресстік реакцияның жоғарылауына әкеледі, бауырдағы мета-
ауырсынуды және оның химиялық зақымдарға сезімталдығын арттырады,
аяқтардағы қан айналымы, иммундық жауап және қабыну реакциясы сияқты
әртүрлі физиологиялық процестерге әсер етеді. Жоғары температураның әсері
әртүрлі физиологиялық реакцияларды тудырады.
Львов Дюбс пен Виннердің (1957) төмен температурада жасушаларда
өсірілген поливирустың 37 С температурада көбею қабілетін жоғалтқанын
растады; сериялық пассаждар әдісімен температураға сезімтал және
температураға төзімді штамдарды таңдау мүмкін болды. Ол температураға
төзімділік пен полиовирустың нейровируленттілігі арасындағы байланыстың
болуын көрсетті (Львов және басқалар, 1959). Аттенуирленген штаммдар жоғары
температураларда әрдайым нашар өседі және төмен температуралы турларда
өсіру вакциналық штаммдарды іріктеу мен өсірудің пайдалы әдісі болып шықты.
Мұндай арақатынастың болуы тышқандардың энцефаломиокардит вирусы үшін
де анықталды (Перол-Ваучес, 1961). Дене температурасы жасанды түрде
төмендеген тышқандар үшін жойылған (температура сезімтал) штамдардың
вирустық екендігі және қарқыны жоғары тышқандар үшін аз вирулентті екендігі
анықталды (қоршаған ортаның қалыпты температурасында ұсталатын
Тышқандармен салыстырғанда).
Қоршаған орта температурасының вирустық ауруларға әсері туралы ең
алғашқы бақылаулар миксома вирусын жоюда жасалды (Томпсон, 1938; Паркер
және Томпсон, 1942). Қояндардың ішкі дене температурасы 39-дан 40 ° C-қа
дейін, ал олардың тері температурасы 33-36-дан 38-40 ° C-қа дейін көтерілген
бөлмеде жоғары температураны ұстап тұру оларды қалыпты жағдайда үнемі
емделетін вирустық миксома вирусын жұқтырған кезде өлімнен құтқарғаны
көрсетілген. Маршал (1959) мұны және әзірге-залды миксо вирусының
аттенуирленген штаммын пайдаланған кезде-біз ортаның төмен температурасы
аурудың ауырлығы мен өлім-жітімін күрт арттырғанымызды растады. Виремия
деңгейін және жоғары температурада ұсталған қояндарда антиденелер түзілу
қарқындылығын анықтау осы екі көрсеткіштің де төмен температурада ауру ауыр
және жоғары температурада жеңіл болатындай өзгергенін анықтады.
Басқа тәжірибелер тышқандар мен иттерге жүргізілді. Робертс (1964)
көрсеткендей, тышқандар эктромелия вирусына шамамен 100 есе сезімтал, егер
олар 20 С температурада ұсталса, 20 С температурада болса, тышқандардағы
метаболикалық қарқындылық жоғарылаған, бұл вирустың осы органда көбеюін
күшейтпестен бауырдың ауыр зақымдалуымен сәйкес келді. Жаңа туылған
нәрестелер иттердің герпесвирустарынан туындаған жалпыланған инфекцияларға
өте сезімтал; 4-8 аптада осы инфекцияларға төзімділік дамиды. Жұқтырған жаңа
туған күшіктерді жоғары температурада ұстау және екі жағдайда да 4-8 апталық
иттердің дене температурасының төмендеуі жағдайды керісінше өзгертті. Жаңа
туған күшіктердің герпес вирусымен таралған инфекцияға жоғары сезімталдығы
ішінара олардың дене температурасының төмендігімен және жылу реттеу
механизмдерінің дамымауымен байланысты деген қорытынды жасалды
(Кармайкель, 1969).
Осы саладағы эксперименттік жұмыстардың көпшілігі қоршаған орта
температурасының әсеріне қатысты. Алайда, жоғары сүтқоректілердегі барлық
ауыр вирустық инфекциялар, әдетте, инкубациялық кезеңнің соңында, вирустың
көбеюі аяқталып, антиген антиденелерінің пирогендік кешендері пайда болған
кезде дамиды (Рут және Вольф, 1968). Жоғары температурадан туындаған барлық
антивирустық механизмдер фебрильді күй кезінде әрекет етеді, бірақ бұл жағдай
вирустың көбеюін тоқтатуға қаншалықты себеп болатындығы туралы ақпарат
жоқ. Львов (1959, 1969) фебрильді жағдай вирустарға қарсы қорғаныс механизмі
болып табылады және вирулентті мутанттар жануарлар организмінде жоғары дене
температурасында көбейе алады және табиғи сұрыптау нәтижесінде пайда болды
деп жариялады. Температура сезімтал мутанттарды бірқатар вирустық
аурулардағы тірі вирустық вакциналардың рөліне кандидат ретінде тану
әдеттегідей.
Дене температурасының жоғарылауы вирустың көбеюін ынталандыратын бір
жағдай белгілі, атап айтқанда адамдарда қайталанатын герпес симплексі
("безгегі"деп аталады).
Осылайша, әртүрлі жағдайларда температураның жоғарылауы (немесе
дененің жеке бөліктері) вирустың көбеюін тікелей - осы процестің кез-келген
кезеңіне әсер ету арқылы немесе жанама түрде - ағзаның қорғаныс
реакцияларының тиімділігін арттыру арқылы, атап айтқанда антиденелер мен
интерферонның пайда болуымен басуы мүмкін. Дене температурасының
төмендеуі, әдетте, кері әсер береді, сонымен қатар, мақсатты органдардың
вирустың деструктивті әсеріне сезімталдығын арттыруы мүмкін
Стресс-бұл өте Жалпы сипаттағы термин, олар денеде белгілі бір дәрежеде
бірдей өзгерістерге әкелетін әртүрлі, негізінен сыртқы әсерлерді сипаттайды;
осылайша, тұрмыстық өмірге алимент, жылу, психологиялық, жұқпалы және
стресстің басқа түрлері әсер етуі мүмкін. Гипофиз-адренал жүйесі
(кортикостероидты гормондар) және автономды жүйке жүйесі (адреналин)
ағзаның стресске тиісті бейімделу реакциясына қатысады. Сондықтан стресстің
әртүрлі түрлері кортикостероидтардың секретиясын ынталандыру арқылы
вирустық инфекцияға әсер ететіні анық.
Деконтаминацияның
ең
тиімді
түрі-жоғары
температурамен
зарарсыздандыру. 160 С және одан жоғары температурада ыстық бумен және
құрғақ ыстықпен автоклавтауға арналған аспаптар инфекциялық аурулардың
қоздырғыштарымен
жұмыс
істейтін
барлық
зертханалардың
негізгі
зарарсыздандыру жабдығын құрайды. Ультракүлгін жарық ауаны және
жұқтырған беттерді деконтаминациялау үшін ыңғайлы, бірақ оны қолдану
зарарсыздандырылған объектінің тереңдігіне енудің болмауына байланысты
біршама шектеулі. Қорғаныс бокстары ультракүлгін шамдармен жабдықталуы
тиіс. Ультракүлгін сәулеленудің тиімділігі оның ұзақтығы мен жарық
қарқындылығымен анықталады. Вирустардың ультра күлгін және рентген
сәулелеріне сезімталдығы негізінен олардың геномының мөлшеріне байланысты.
Сондықтан, мысалы, осповакцинаның вирусы (мол. нуклеин қышқылының
массасы шамамен 2•108) рентгендік сәулелену кезінде шамамен 5•104 рад дозада
белсенді болмайды, ал папиломаның ұсақ вирусын жұқтыру үшін (мол.геномның
массасы 3 * 106) 4•105 рад дозасы қажет. Сублимациялық кептіру әдісі (мұздату-
кептіру), екі әдісті біріктіреді-вакуумда мұздату және кептіру – құрамында вирус
бар материалды сақтаудың ең заманауи және перспективалы әдісі. Бұл
препараттардың
стандартты
ұсынылуын
және
олардың
биологиялық
белсенділігінің ұзақ сақталуын қамтамасыз етеді.
Ірі қара малдың аденовирустары физикалық және химиялық әсерлерге,
трипсинге, эфирге, хлороформға, са-понинге, натрий дезоксихолатына және 50%
этил спиртіне өте төзімді. Абсолютті этил спирті мен формалин соңғы
концентрациясында 0,1-0,3% вирусты инактивациялайды. Хлороформмен емдеу
вирустың инфекциялық титрін 0,5 lg-ге арттырады. Аденовирустар бөлме
температурасында 3 сағат ішінде РН ортаның 3-тен 9-ға дейін өзгеруіне төзімді,
30-60 минут ішінде ультракүлгін сәулелермен толығымен белсенді емес. Ұзақ
уақыт минус 30ºС кезінде, 4ºС кезінде –6 айдан астам, бөлме температурасында-1
- 4 ай және 36ºс кезінде-15-60 күн сақталады. Қайта қатып қалуға және ерітуге
төзімді, рН 6-9 кезінде жақсы сақталады және кептіруге шыдайды.
Вирустарды сақтау және сақтау. Вирустардың штаммдарын хоодильникте
пломбасы немесе мөрі бар құлыппен сақтайды. Бөлінген изоляттар, салыстыру
және серологиялық зерттеулер үшін қажетті стандартты вирустардың штаммдары
сияқты, олардың барынша ұзақ өмір сүруін қамтамасыз ететін жағдайларда
сақталуы тиіс. РН 7,0-7,4 болғанда және оған белгілі бір қоспалар енгізілгенде,
вирус бірнеше апта бойы 4º температурада сақталуы мүмкін, ал кейбір түрлер
инфекциялық қасиеттерін жоғалтпай жыл бойына сақталады.
Көптеген заттар вирустарға қатысты консервілеу немесе қорғаныс қасиетіне
ие. Көбінесе глицерин қолданылады, ол бактериостатикалық әсерге ие, бірақ
сонымен бірге вирустарды қорғайды. Ол 10-40% мөлшерінде құрамында бар
материалға қосымша ретінде қолданылады. Фенол да кеңінен қолданылады, ол
вирустардың 0,2-0,5% концентрациясында белсенді емес (мысалы, шошқа
обасының вирустары, Ауески ауруы, аяқ-қол ауруы). Вирустарды консервілеу
үшін 5-20% naci ерітіндісін, 10% глицерин ерітіндісін, 0,15 M KCI ерітіндісін
қолдануға болады. Вирустардың тұрақтылығы 1-10% глюкоза, сахароза немесе
мальтоза, 10-50% Сарысу немесе сарысулық альбумин, 10-50% майсыз сүт, 0,1-
2,0%
желатин
қосу
нәтижесінде
айтарлықтай
артады.
Вирустың
суспензиясындағы ақуыз неғұрлым аз болса, соғұрлым оның тұрақтылығы
төмендейді. Сондықтан тазартылған ви-рус биологиялық белсенділігін тез
жоғалтады.
Вирустарды сақтау кезінде поли-шараларды қолданған жөн: 0,5-3%
метилцеллюлоза
немесе
0,1-2%
поливинил
спирті.
5%
DMSO
(диметилсульфоксид) кейбір вирустарға жақсы тұрақтандырушы әсерге ие, ол
сонымен қатар Бактерияға қарсы қасиеттерді көрсетеді. Культуралық
сұйықтықтағы вирустар қоректік ортаның компоненттерімен (Сарысу, гидролизат
және т.б.) тұрақтандырылады.
Осылайша, көптеген вирустарды жоғарыда аталған тұрақтандырғыш
компоненттерді қосқан жағдайда бірнеше апта, тіпті бірнеше жыл бойы 4ºС
температурада сақтауға болады. Алайда вирустың мұздату температурасы
неғұрлым төмен болса, оның өміршеңдігі соғұрлым ұзақ болатыны белгілі.
Вирустың аз мөлшерін минус 190ºс-қа дейін тез мұздату кезінде, содан кейін осы
температурада сақтау виру-са титрі іс жүзінде төмендемейді. Алайда бұл
температура диагностикалық жұмыста өте сирек қолданылады. Зертханаларда
вирустардың минус 70ºс температурада сақталуы жақсы нәтиже береді.
Тұрақтандырғыш заттарды қолдану вирусты сақтау кезінде ғана емес,
сонымен қатар мұздату процесінде оның жоғалуын болдырмау үшін қажет,
әсіресе қосымша эмбриональды және культуралық сұйықтықтың вирустық
үлгілері. Егер культуралық қоректік ортада 2-19% Сарысу немесе лак-талбумин
гидролизаты болса, оны тұрақтандырушы заттарды қоспай мұздатуға болады.
Вирустарды мұздату және оларды осы күйде сақтау кезінде жақсы қорғаныс әсері
құрамында 56-60ºс кезінде белсенділігі жойылған қан сарысуының 10-30%; 0,5-
1,5% желатин; 20-50% майсыз сүт; 0,1-0,5% метилцеллюлоза; 1-5% күл үні;
жануар ақуызының 5-20% гидролизаты және 10% ДМСО сияқты компоненттердің
бірін вирус бар материалға қосу арқылы қамтамасыз етіледі. Соңғысы қабығы бар
вирустарды, әсіресе гер-песа, қызылша, везикулярлы стоматит вирустарын жақсы
қорғайды. Төрт рет басып шығару және мұздату кезінде де оның тиімді қорғаныс
әсері анықталды.
Минус 20ºС-тан минус 30ºС-қа дейінгі жағдайларда сіз барлық вируссыз
вирустарды, сондай-ақ поксвирустарды ұзақ уақыт сақтай аласыз. Сонымен қатар,
липидті қабығы бар вирустарды минус 60º-тан минус 80ºс-қа дейін сақтаған дұрыс
(бұл әсіресе герпес, тога, корона және миксовирустарға қатысты). Минус 20ºС-тан
минус 30ºС-қа дейінгі температурада сақтау, консервілейтін және қорғайтын
заттардың қосылуына қарамастан, олардың титрінің төмендеуіне әкеледі. Егер
вирустардың сақталу температурасы минус 25ºС болса, олардың титрін жылына 2
рет, минус 30ºС және одан төмен температурада жылына 1 рет тексеру қажет.
Достарыңызбен бөлісу: |