Иммуно-морфологическая характеристика различныхформ атопического дерматита у детей

В.А. Клименко, А.С. Сивопляс-Романова

Харьковский национальный медицинский университет, Украина.

Атопический дерматита (АД) является актуальной проблемой педиатрии на современно этапе в связи с большой распространенностью заболевания, сложностью и неоднозначностью патогенетических механизмов, недостаточной эффективностью общепринятой терапии [1,2,3]. При АД «органом-мишенью» становится кожа ребенка. У детей разного возраста отмечается относительно большое количество лимфоидных и тучных клеток в коже по сравнению с другими органами и тканями. Подкожно-жировую клетчатку детей раннего возраста даже считают ретикулогистиоцитарным органом, который напоминает по гистогенезу и функции костный мозг [2]. Отдельно рассматривают лимфоидную ткань, ассоциированную с кожей (SALT). В исследованиях последних лет доказано, что иммунопатологический процесс при АД первично начинается в коже, где происходят процессы распознавания антигена, его захват и процессинг – а изменения в системном иммунитете имеют вторичный характер. После системного ответа на антиген опять таки в кожу возвращаются иммунокомпетентные клетки (благодаря homing-эффекту) и формируют очаги поражения при АД [4, 5].

Таким образом, для выяснения патогенеза АД, усовершенствования диагностики первоочередное значение имеет изучение иммуноморфологии кожи. Целью работы было установить иммуноморфологические различия разных клинических форм АД у детей.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Под наблюдение находилось 38 больных АД в стадии обострения в возрасте от 1,5 до 15 лет, которые находились на лечении в центре детской аллергологии ОДКБ№1 г.Харькова, Украина. При верификации диагноза использовали диагностические критерии Hanifin, Rajka (1980) и классификацию, созданную на основе рекомендаций проф. О.И. Ласицы и Российского консенсуса по АД (2000) [1]. У 12 больных диагностирована экссудативная форма АД, у 12 – эритематосквамозная, у 14 – лихеноидная. Биоптаты кожи получены из очагов поражения путем аккуратной пункционной биопсии иголками UNICUT (диаметр от 1,6 мм) фирмы ''C.R.BARD,INK''(США). Контрольное исследование проведено на 2 биоптатах кожи, полученных у детей без клинических признаков атопии. Кусочки кожи фиксировали в 10% нейтральном формалине, заливали в целлоидин-парафи, после спиртовой проводки изготовляли срезы толщиной 5-6 мкм. Срезы исследовали гистологическими методами: окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по Ван-Гизону, по Малори, гистохимически – мукополисахариды идентифицировали PAS-реакцией с контролем амилазой, плазматическое пропитывание выявляли с помощью реакции Рего, РНП определяли с помощью реакции Браше (контроль кристаллической рибонуклеазой), а ДНП – с помощью реакции Фельгена-Россенбека (контроль – гидроз с HCl) [6,7]. Иммуноморфологическое исследование проводили на парафиновых срезах толщиной 5-6 мкм непрямым методом Кунса по методике Brosman (1979) [8]. Иммунные клетки дифференцировали при помощи моноклональных антител (МКА) к различным типам клеток фирмы Novocastra Laboratories Ltd (Венликобритания). Использовали антитела CD3, CD4, CD5, CD8, CD16, CD20, CD22, CD38, HLA-Dr, IgЕ и С-3 фракции комплимента. В качестве люминисцентной метки использовали F(ab)-2 – фрагменты крольичих антител против иммуноглобулинов мишей, меченных ФИТЦ. Препараты изучали в люминисцентном микроскопе МЛ-2 с использованием светофильтров: ФС-1-2, СЗС-24, БС-8-2, УФС-6-3. Иммуноморфологические исследования выполнены на кафедре патологической анатомии ХНМУ (проф. И.В. Сорокина). Результаты обработаны методами вариационной статистики.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Выявлены следующие иммуноморфологические изменения в биоптатах различных форм АД у детей.

Экссудативная форма АД (12 пациентов) характеризуется наличием в эпидермисе неравномерно выраженного гиперкератоза, очагово – паракератоза. При этом отмечается утолщение рогового и частично уменьшение зернистого слоя эпидермиса. Клетки рогового слоя эпидермиса имеют палочковидные ядра, которые содержат большое количество ДНП и уплотненную цитоплазму, в которой выявлялась яркая Шик-реакция и пиронинофилия. Очагово определяется акантоз – утолщение эпидермиса кожи с удлинением межсосочковых отростков вследствие усиленной пролиферации базальных и шиповидных клеток эпидермиса. В ядрах этих клеток выявляется умеренный рост ДНП (реакция Фельгена-Россенбека умеренно позитивная), а в цитоплазме определяется умеренно позитивная реакция Браше на РНП. Зернистый слой прерывистый, отсутствует в зонах паракератоза. На остальном протяжении зернистый слой представлен 2-4 рядами витянутых по длинне и сдавленных по вертикале клеток овальной формы с мелкими глыбками кератогиалину. Шиповидный слой неравномерно утолщенный. Цитоплазма клеток слегка базофильна, пиронинофильна, зернистая, вакуолизована. Ядра округлые или удлиненны, местами с явлениями пикноза. Базальный слой представлен кубическими клетками с явлениями митозов и достаточным РНП (реакция Браше ярко\умеренно позитивна). Кроме вышеописанных клеток, в эпидермисе определяются большие неправильной формы отросчатые клетки Лангерганса.

Иммуногистохимическим методо выявлена экспрессия С-3 фракции комплимента, IgЕ, HLA-Dr антигена. Среди эпителиоцитов также определяются одиночные CD4-лимфоциты, тогда как CD8 не выявлялись. По сравнению с контролем HLA-Dr антиген определялся чаще (в контроле в 1∕6 препаратов, тогда как в этой группе в 1∕3 всех наблюдений). Базальная мембрана эпидермиса волнообразная, неравномерной толщины. В местах утолщения выявляется яркая Шик-позитивная реакция. Сосуды, расположенные в зоне эпидермодермальной линии, расширены. В дерме определялись коллагеновые волокна, которые интенсивно окрашиваются в синий цвет при окрашивании по Малори и в красный цвет при окрашивании по Ван-Гизону. Эластичные волокна местами утончены, местами неравномерно утолщены. В верхних отделах дермы, преимущественно периваскулярно, определялась незначительная лимфо-плазмоцитарно-макрофагальна инфильтрация с примесями эозинофилов. В составе инфильтрации определялись как Т_, так и В-лимфоциты, а именно CD3, CD4, CD5, CD8, CD16, CD20, CD22, CD38, а также одиночные клетки с HLA-Dr антигеном. Среди плазмоцитов виявлялись клетки-продуценты IgE. Определено относительное количество основных клонов иммунных клеток в лимфо-макрофагальных инфильтратах кожи больных (табл. 1.).

Эритемато-сквамозная форма АД (12 больных) характеризуется наличием в эпидермисе очагов выраженного паракератоза. В этой группе наблюдений гиперкератоз, паракератоз, также как и акантоз, выражены сильнее по сравнению с первой группой наблюдений. Так же, как и в предыдущей группе, среди клеток эпидермиса определяются клетки Лангерганса, а также CD4-лимфоциты, в виде одиночных экземпляров определялись CD8-лимфоциты. На поверхности клеток Лангерганса выявляются рецепторы к IgE и С-3 фракции комплимента. По сравнению с предыдущей группой, сила экспрессии этих иммуноглобулинов не определяется. Тогда как экспрессии HLA-Dr была усилена и выявлялась в 2∕3 наблюдений этой группы. Эпителиальная базальная мембрана неравномерно утолщена. В базальной мембране выявляется неравномерной интенсивности Шик-реакция. На базальной мембране очагово определяется откладывание иммунных комплексов, которые содержат IgE и С-3 фракцию комплимента. Сосуды дермы расширены, эндотелий отекший, базальная мембрана утолщена вследствие откладывания на ней иммунных комплексов, которые содержат IgE и С-3 фракцию комплимента. В дерме выявляются колагеновые волокна с явлениями фибриноидного отека и очагово фиброноидного некроза. Очагово определяется утоньшение эластических волокон, местами их утолщение. Соединительно-тканные элементы стромы представлены фибробластами, фиброцитами, макрофагами, при этом заметно по сравнению с контролем обеднение дермы макрофагами (CD16). Так, если в группе контроля насчитывается до 5 клеток в поле зрения 400, то в этой группе наблюдения – 1-2 клетки. По сравнению с предыдущей группой периваскулярно определяется более выраженная лимфо-плазмоцитарно-макрофагальная инфильтрация. Определено относительное количество основных клонов иммунных клеток в лимфо-плазмоцитарно-макрофагальных инфильтратах кожи больных (табл.1.).

Лихеноидная форма АД (14 больных) характеризуется более выраженным (по сравнению с предыдущими группами) гиперкератозом, паракератозом и акантозом. В эпидермисе определяется зернистый слой неравномерной толщины, прерывитсый, отсутствует в зонах паракератоза. На остальном протяжении зернистый слой представлен 1-5 слоями вытянутых по длинне и сдавленных по вертикале клеток овальной формы с мелкими глыбками кератогиалину и умеренно пиронинофильной цитоплазой. Шиповидный слой неравномерно утолщен. Цитоплазма клеток слегка базофильная, умеренно∕ярко пиронинофильна, зерниста, вакуолизована. Ядра округлые или удлинены, местами с явлениями пикноза. Очагово выражен спонгиоз с везикуляцией. Клетки базального слоя кубические с умеренно эозинофильной цитоплазмой. Также как и в предыдущих группах, среди клеток епидермиса определяются большие клетки Лангерганса, которые экспрессируют IgE, С-3 фракцию комплимента и HLA-Dr. Эекспрессия HLA-Dr антигена определяется в 2∕3 случаев этой группы. Изредка среди эпителиоцитов определяются CD8-лимфоциты, чаще CD4-лимфоциты. Базальная мембрана эпидермиса неравномерной толщины. В колагеновых волокнах дермы определяются явления мукоидного, фибриноидного отека и фибриноидного некроза. Эластичные волокна местами истончены, местами неравномерно утолщены. Вышеописана гистологическая картина соответствует лихенификации – сочетанию акантоза, папилломатоза, хронической воспалительной инфильтрации сосочкового слоя дермы. Обильная лимфо-плазмоцитарно-акрофагальная инфильтрация с примесями эозинофилов определяется преимущественно в периваскулярных пространствах дермы. Определено относительное количество основных клонов иммунных клеток в лимфо-плазмоцитарно-макрофагальных инфильтратах кожи больных детей (табл.1.).

Таблица 1. Относительная плотность основных клонов иммунных клеток в лимфо-макрофагальных воспалительных инфильтратах кожи больных в поле зрения х 400, (в пересчете на 100 клеток).

*Р<0,05 по сравнению с группой «эксудативный».

ВЫВОДЫ:

1. При атопическом дерматите, не зависимо от формы, в коже больных детей определяются иммунопатологические процессы: усиление экспрессии HLA-Dr, увеличение количества CD4 и плазмобластов с IgE как в составе воспалительной инфильтрации, так и среди эпителиоцитов эпидермиса и леточных элементов дермы, резкое уменьшение популяций CD8 и CD16. Также для АД характеры микроангиопатии – откладывание иммунных комплексов, которые содержат IgE и С-3 фракцию комплимента на базальных мембранах сосудов. Подобные иммунные комплексы откладываются также и на эпидермальной базальной мембране.

3. Патоморфологические изменения кожи больных атопическим дерматитом (гиперкератоз, паракератоз, акантоз, спогиоз, лихенификация) и выраженность продуктивного воспаления минимальны при экссудативной форме и максимальны при лихеноидной форме, что, очевидно, обусловлено большой длительностью болезни.

4. Рекомендуется включение выявленных иммуноморфологических характеричстик разлычных форма АД в стандартизованные протоколы диагностики АД.
Список літератури:

1. 
   Ласиця О.І. Основні положення щодо діагностики і лікування атопічного дерматиту: Матеріали до консенсусу “Діагностика і лікування атопічного дерматиту”. - К.,2000. - 10с.
   
2. 
   Смолкин Ю.С., Чебуркин А.А., Ревякина В.А. Механизмы развития атопического дерматита у детей (Обзор литературы) // Российский вестник перинатологии и педиатрии. – 2000. - №3. – С.25-29.
   
3. 
   Солошенко Э.Н. Состояние проблемы аллергических заболеваний кожи в Украине // Ж. дерматологии и венерологии. – 2000. - №1(9). – С.49-53.
   
4. 
   Drannik G. Immune pathogenesis of atopic dermatitis: Modern Trends in Allergy and Clinical Immunology. EAACI – summer course. Ukraine, 2001. - Р.215-223.
   
5. 
   Novak N., Bieber T. The skin as a target for allergic diseases // Allergy. -2000. – Vol.55. – P.103-107.
   
6. 
   Виноградов В.В., Фукс Б.Б. Дифференциальное чисто химическое выявление мукополисахаридов // Архив патол. – 1961. – №2. – С.74-78.
   
7. 
   Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия . – М.: «Мир», 1969. – 645с.
   
8. 
   Brosman M. Immunofluorescencne vysetrovanie formal-parafinovego materialu //Cs. Patol. – 1979. – Vol.15, № 4. – Р.215-220.
   

В.А. Клименко, Г.С. Сивопляс-Романова

Ключові слова: діти, атопічний дерматит, ексудативна форма, еритемато-сквамозна форма, ліхеноїдна форма, імуноморфологія, шкіра, біопсія.

Проведено імуноморфологічне дослідження 38 біопсій шкіри дітей віком від 1,5 до 15 років, хворих на різні форми атопічного дерматиту – ексудативну, еритемато-сквамозну, ліхеноїдну. Надана імуноморфологічна характеристика кожної форми АД. Визначена кількість головних клонів імунних клітин (CD3, CD4, CD5, CD8, CD16, CD20, CD22, CD38, HLA-Dr, IgЕ та C-3 фракції комплементу) у лімфо-макрофагальних інфільтратах шкіри при різних формах АД.

В.А. Клименко, А.С. Сивопляс-Романова

Ключевые слова: дети, атопический дерматит, экссудативная форма, эритемато-сквамозная форма, лихеноидная форма, иммуноморфология, кожа, биопсия.

Проведено иммуноморфологическое исследование 38 биопсий кожи детей в возрасте от 1,5 до 15 лет, страдающих различными клиническими формами атопического дерматита - экссудативной, эритемато-сквамозной и лихеноидной. Дана иммуноморфологическая характеристика каждой формы. Определены количественные характеристики основних клонов иммунокомпетентных клеток (CD3, CD4, CD5, CD8, CD16, CD20, CD22, CD38, HLA-Dr, IgЕ, C-3 фракции комплемента) в лимфо-макрофагальных инфильтратах кожи при разных формах АД.

V.A. Klimenko, H.S. Syvoplias-Romanova

Key words: children, atopic dermatitis, exudative form, erithemato-squamous form, lichenoid form, skin, biopsy, immunomorphology.

It is carried out immunomorphologycal researches 38 skin’s biopsies of the children in the age of from 1,5 till 15 years, suffering from different forms of atopic dermatitis – an exudative, an erytemato-squamouse, a lichenoid. The quantity of the basic clones of immune cells (CD3, CD4, CD5, CD8, CD16, CD20, CD22, CD38, HLA-Dr, ІgE and C-3 fraction of complement system) depending on the form of atopic dermatitis is determined in the sites of infiltration of the skin.

Ф.И.О. . Клименко Виктория Анатольевна

Организация: Украина, Харьковский национальный медицинский университет, кафедра пропедевтики педиатрии №2.

Адрес с почтовым индексом: 61022 Украина, г. Харьков, пр.Ленина,4, ХГМУ, кафедра кафедра пропедевтики педиатрии №2.

Должность: заведующая кафедрой.

Ученая степень – д.мед.н.

Ф.И.О. Сивопляс-Романова Анна Сергеевна

Организация: Украина, Харьковский национальный медицинский университет, кафедра пропедевтики педиатрии №2.

Адрес с почтовым индексом: 61022 Украина, г. Харьков, пр.Ленина,4, ХНМУ, кафедра кафедра пропедевтики педиатрии №2.

Должность: ассистент кафедры.

Ученая степень – к.мед.н.