Исследование биол-кой активности штаммов бифидобактерий



Дата17.07.2016
өлшемі37.5 Kb.
Методы контроля качества сухого бакпрепарата»Бифидумбактерин». Исследование биол-кой активности штаммов бифидобактерий.

Для производства бакпрепарата бифидумбактерин применяют штамм В.bifidum, род Bifidobacterium. Штамм получают в лиофилизованном виде и хранят при тем-ре -18°С.



1.Морфологические св-ва штамма В.bifidum конт-ролируют путём просмотра мазков, окрашенных по Грамму. В мазках не должны быть мко, морфология которых отличается от морфологии бифидоб.

2. Ферментативную активность штамма оценивают по отсутствию способности разжижать желатин, образовывать газ и каталазу.

3. Контроль отношения штамма к желатину про-водят путём посева штамма в пробирки с питат. средой Блаурокка, содержащей 10% желатина. Инкубируют при тем-ре 38°С в теч.48 ч., после чего выдерживают в холодильнике в теч. суток. В пробирках не должно быть разжижжения желатина.

4.Контроль на отсутствие газообразования прово-дят путём посева штамма уколом в столбик спло-шной питат. среды Блаурокка. После инкубирования при 38°С в теч. (48-72)ч. По линии укола в среде не должно быть пузырьков газа и трещин.

5.Контроль на каталазу проводят путём внесения колоний бифидобак., выделенной после роста в полужидкой, питат. среде в 1-2 каплях 3% Н2О2 на предметном стекле. Вокруг колоний не должны образовываться пузырьки газа.

6. Растворимость, прозрачность, цветность.Препарат при добавлении 0.9% NaCl из расчёта 1мл на одну дозу, должен после перемешивания в теч. 5 мин образовывать непрозрачную гомогенную взвесь.

7. Показатель концентрации водородных ионов рН= 6.5±0.5ед. Для опр-ния 2.5г бакпрепарата разводят в 25мл 0.9%Na Cl –из расчёта 1мл на дозу препарата.

8. Массовая доля влаги не более3.5%. Чистый сухой бюкс предварительно высушивают в сушильном шкафу при тем-ре 105-110°С в теч. 1-1.5 ч с последующим охл-нием в эксикаторе. Охлаждённый бюкс вместе с крышкой вынимают из эксикатора и взвешивают. В бюкс отвешивают сухого бакпрепара-та. Открытый бюкс с навеской 0.2г и крышку по-мещают в нагретый до тем-ры (105±2°С) сушильный шкаф, где выдерживают при этой тем-ре 45-60 мин. Бюкс вынимают из сушильного шкафа, закрывают крышкой и переносят для охл-ния в эксикатор. После охл-ния до тем-ры 18-25°С бюкс взвешивают, и открыв крышку, ставят в сушильный шкаф для повторного высушивания на 30-40мин. По истеч. этого вр. бюкс закрывают крышкой, охлаждают в эксикаторе и взвешивают.

Высушивание считают законченным, если разница между последовательными взвешиваниями составляет не более 0.0004г. Если разница оказывается большей, то высушивание в теч. 30-40 мин повторяют, Проводят 2 параллельных опр-ния, которые при заранее известной точности анализа исключают получение неверных результатов из-за случайного нарушения методики.

СОДЕРЖАНИЕ ВЛАГИ (W, в %) рассч-ют по форму-ле:W=( М1 – М2 )/ ( М1 – М0 )* 100; где, М0масса пустого бюкса1 – масса бюкса с навеской бакпре-парата до высушивания, г; М2 – масса бюкса с навеской бакпрепарата после высушивания,г.

Биологическая активность штамма бифидоб. оценивают по его антогонистической активности по отношению к некоторым условно-патогенным микро-бам, а также по его активности кислотообразова-ния. Показатели антагонистической активности бифидоб., выраженные в мм зон угнетение тест-культуры, должны быть не менее 10мм. Активность кислотообразования, определяемая титрометрическим методом при выращивании бифидобй в печёночном среде, должна быть не ниже 100°Т.

Антагонистическая активность производственно-го штамма B. Bifidum опр-яют методом перпендику-лярных штрихов на питат. среде в чашках Петри.

Для создания анаэробных условий, необходимых для роста бифидоб., 0.1 мл взвеси 18-часовой культуры B. seracium marcesens густой, соотв-щей 10ед. мутности засевают сплошным газоном на МПА (или агар Хоттингера) разлитой тонким слоем в крышку чашки Петри и доращивают в теч. 4ч. при 37°С. На дно чашки наливают питат среду и петлёй в 2мм по диаметру чашки непосредственно из флакона наносят полоской культуру B. Bifidum. Края чашки Петри закрывают стерильным резиновым обхватом ширина в 5см (для создания более анаэробных условий).



Определение антибиотической активности, методом последовательных разведений по И А Красильникову , модифицированным для молочнокислых бактерий. В качестве тест-культур Е.coli, В.subtilis.

в стерилизованное об. молоко вносят 1% куль-туры молочнокис. бактерий и выдерживают в теч. 18ч в термостате при тем-ре 37°С. Затем сгусток отфильтровывают через бумажный фильтр и сыворотку пропускают через мембранный фильтр. В стерильные маленькие пробирки разливают по 1мл стерильного гидролизованного молока разбавленного в 3 раза водой( рН=6). В первую пробирку с гидролизованным молоком вносят 1мл фильтрата, а затем из первой пробирки во вторую переносят 1мл смеси фильтрата с гидролизованным молоком и т. д. При этом получают последовательный ряд разведений фильтрата.

Затем во все пробирки вносят по 1ед. петле 500млн. бактериальной взвеси тест-культуры, приготовленной путём разведения суточной культуры на мясо-пептонном бульоне.

Контролем является пробирка, в которую вносят 1мл гидролизованного молока и 1 пет-лю тест-культуры. Пробирки с посевом выдер-живают 18ч. в термостате при тем-ре 37°С, просматривают визуально. Отмечают отсутствие или подавление роста тест культуры.


Методы исследования жидких заквасок молочнокис. мко.


В жидких заквасках анализируют показатели:

  • Видовой состав и морфологию молочнок. мко контролируют методом непосредственного микроскопирования окраш-х препаратов. При микроскопировании препарата смотрят до 10 полей зрения, при этом не д.б. скопления клеток.

  • Активность закваски опр-ют по вр. свертывания пастеризованного молока при внесении в него 5% закваски. Для заквасок молочнок. стрептококков свертывание молока должно происходить не более чем за 7 ч., а молочнок. палочек – не более чем за 6 ч.

  • Титруемую кислотность закваски опр-ют титрованием 10см3 закваски+3капли фенолфтале-ина 0,1Н NaОН до слабо розовой окраски. Титруемую кислотность в градусах Тернера рассч-ют, умно-жая объем щелочи, пошедшей на неитрализацию пробы, на десять.

  • Наличие посторонней микрофлоры устанавливают по следующим методикам:

БГКП опр-ют посевом закваски в среду Кесс-лера, выдерживая при t 43-45оС в теч. 18-24 ч. Газ свидетельствует о возможной контаминации закваски бактериями гр кишечной палочки.

Дрожжи и плесневые грибы опр-ют путем по-сева 1см3 закваски в чашки Петри на сусло-агар.

Споровые бактерии опр-ют посевом 1см3 жидкой закваски в 20 см3 стерильного обезж. молока с добавлением парафина для создания анаэробных условии и без парафина для культивирования в аэробных условиях. Обе пробы термостатируют при 85оС в тече. 10 мин. Охлаждают и выдерживают при 30оС в теч. 2 су-ток. В случае контаминации молока анаэробными споровыми бактериями парафиновая пробка поднимается, молоко может пептонизироваться, при микроскопировании препаратов видны утолщенные палочки со спорами.


Достарыңызбен бөлісу:




©dereksiz.org 2020
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет