эпидемиология и патогенез вирусных инфекций

• 
  Воздушно-капельный (респираторные вирусы)
  
• 
  Фекально-оральный (Picornaviride, Reoviride, Caliciviride)
  
• 
  Передача при половых контактах (ВИЧ, ВПГ-2, гепатит В, ЦМВ)
  
• 
  Заражение через кожные покровы (герпес)
  
• 
  Инъекционная передача (ВИЧ, ЦМВ, гепатит А)
  
• 
  Вертикальная передача (трансплацентарная передача, перинатальное заражение и заражении при лактации – ВИЧ, ЦМВ, герпес, краснуха, гепатит В)
  
• 
  Трансмиссивная передача возбудителей зоонозных и арбовирусных инфекций (при укусе больного животного, через кровососущих членистоногих-переносчиков, при контакте с зараженным материалом).
  

• 
  Летние месяцы – период распространения многих энтеровирусов и инфекции переносимые кровососущими членистоногими (комары, клещи и др.)
  
• 
  Осенние месяцы - период распространения многих энтеровирусов, инфекции переносимые кровососущими членистоногими (комары, клещи и др.) и респираторные.
  
• 
  Зимние месяцы – приходится пик ОРВИ.
  

Полученную суспензию фильтруют и центрифугируют 10 минут при 1000 оборотов в минуту.

Надосадочная жидкость заменяется 2 мл питательной среды, осадок встряхивают до получения равномерной суспензии.

Определяют количество клеток в 1 мл суспензии при помощи камеры Горяева. Считают количество их в 1мл суспезии по формуле:

80
А – количество клеток в камере (считают в 5 больших квадратах по диагонали),

80 – количество малых квадратов,

1 мл – объем одного квадрата

1000

Для выделения аденовирусов производится одновременное заражение двух видов культур клеток: первично-трипсинизированную культуру фибробластов человека и перевиваемых Hep –2. Культуры тканей просматривают под малым увеличением микроскопа и отбирают пробирки с хорошим монослоем. Питательную среду сливают и заполняют средой 199 по 1 мл. Затем в каждую пробирку наливают по 0,2 мл вирусосодержащего материала. Исследование сопровождают контролем – пробирки с культурой клеток не зараженных вирусом. Пробирки помещают в термостат при 37⁰С на 48 часов.

• 
  Цветная проба - в пробирках с культурами клеток, зараженных вирусом (опытные пробирки), цвет индикатора питательной среды не меняется в результате размножения вируса и гибели клеток. При отсутствии вируса (контрольные пробирки) цвет питательной среды меняется с красного на желтый за счет ощелачивания продуктами метаболизма клеток.
  

Контрольная пробирка: .

Опытная пробирка: .

Цветная проба , что свидетельствует о _{(наличии, отсутствии)} вируса в материале обследуемого.

• 
  Выявление ЦПД вируса – нарушение целостности пласта клеток. Для выявления морфологических изменений в зараженных культурах клеток их просматривают под малым увеличением микроскопа, сравнивая с контрольными, незараженными вирусом культурами клеток.
  

Контрольная пробирка: .

Опытная пробирка: .

ЦПД .

• 
  Реакция гемадсорбции - в пробирки, с зараженной вирусом культурой клеток, без удаления питательной среды вносят по 0,2 мл 5% суспензии эритроцитов. Пробирки слегка встряхивают и оставляют на 15 мин при комнатной температуре, затем слой клеток 2 раза промывают физ.раствором. Учет результатов производится под малым увеличением микроскопа. При размножении в культуре клеток гемагглютинирующего вируса эритроциты адсорбируются на клетках и не отмываются от них при встряхивании.
  

Реакция гемадсорбции , что свидетельствует о _{(наличии, отсутствии)} у выделенного вируса гемагглютинина.

Смесь вирусосодержищего материала и диагностической противовирусной сыворотки по 0,2 мл. наливают в пробирку и ставят на 30 минут в термостат.

После микроскопии пробирок с культурами клеток под малым увеличением отбирают две пробирки с хорошим монослоем. Питательную среду сливают и производят её замену по 1 мл в каждую пробирку.

В опытную пробирку добавляют 0,2 мл смеси вируса и противовирусной сыворотки. В контрольную – наливают 0,2 мл вирусосодержащего материала. Обе пробирки помещают в термостат на 2-5 дней.

Результаты реакции оценивают по наличию или отсутствию ЦПД под малым увеличением микроскопа и изменению цвета индикатора среды 199. При соответствии вируса противовирусной сыворотке отмечается изменение цвета индикатора с красного на желтый и отсутствие ЦПД. При несоответствии вируса противовирусной сыворотке цвет индикатора не меняется и отмечается ясно выраженное ЦПД.

Учет результата:

Контрольная пробирка: цвет индикатора изменился , ЦПД .

Опытная пробирка: цвет индикатора изменился , ЦПД .

Реакция нейтрализации с сывороткой , что свидетельствует о _{(нейтрализации)} вируса.

РАЗДЕЛ 2. Частная вирусология. Серологический метод лабораторной диагностики вирусных инфекций (Занятия № 4-7)

1. 
   Сформировать знания у студентов о характеристике основных видов возбудителей вирусных инфекций у человека.
   
2. 
   Освоить методы лабораторной диагностики вирусных инфекций.
   
3. 
   Овладеть техникой постановки основных серологических реакций для диагностики вирусных заболеваний (РТГА, РСК, РПГА, ИФА).
   
4. 
   Сформировать знания о специфической профилактике и лечении вирусных инфекций.
   

• 
  морфологию, строение и химический состав основных возбудителей вирусных заболеваний человека;
  
• 
  методы лабораторной диагностики вирусов;
  
• 
  механизмы серологической и экспресс-диагностики вирусных инфекций;
  
• 
  биопрепараты для диагностики (диагностикумы и сыворотки) вирусных инфекций;
  
• 
  биопрепараты для лечения и профилактики вирусных заболеваний (вакцины, гамма-глобулины, сыворотки), национальный календарь обязательных прививок.
  

• 
  приготовить разведения сыворотки обследуемого для постановки серологических реакций;
  
• 
  проводить постановку серологических реакций: РТГА, РПГА, РСК и ИФА;
  
• 
  интерпретировать полученные результаты серологических реакций;
  
• 
  использовать биопрепараты для лабораторной диагностики вирусных инфекций;
  

Учебный материал по теме: «Частная вирусология»

1. 
   Респираторные вирусы. Характеристика возбудителей ОРВИ (вирусы гриппа, парагриппа, аденовирусы, риновирусы, ECHO, Коксаки, короновирусы, реовирусы). Лабораторная диагностика респираторных вирусных инфекций. Биопрепараты для диагностики, профилактики и лечения респираторных вирусных инфекций.
   
2. 
   Энтеровирусы. Характеристика возбудителей кишечных вирусных инфекций (Коксаки А и В, ECHO, энтеровирусы, ротавирусы, аденовирусы). Лабораторная диагностика кишечных вирусных инфекций. Биопрепараты для диагностики, профилактики и лечения энтеровирусных инфекций.
   

1. 
   Дермотропные вирусы. Характеристика дермотропных вирусов (оспы, герпеса). Лабораторная диагностика.Биопрепараты для диагностики, профилактики и лечения оспы и герпеса.
   
2. 
   Нейротропные вирусы. Характеристика нейротропных вирусов (арбовирусы, вирусы бешенства). Лабораторная диагностика арбовирусных инфекций, бешенства. Биопрепараты для диагностики, профилактики и лечения арбовирусных инфекций, бешенства.
   

1. 
   Вирусы кори, паротита и краснухи. Характеристика вирусов. Лабораторная диагностика кори и паротита. Биопрепараты для диагностики, профилактики и лечения кори и паротита.
   
2. 
   Вирусы, поражающие печень. Характеристика вирусов гепатита (гепатита А, гепатита В, Дельта-вирус, гепатита С,E,G. Лабораторная диагностика гепатитов. Биопрепараты для диагностики, профилактики и лечения гепатитов.
   

1. 
   Лимфотропные вирусы и вирусы СПИДа. Характеристика вируса СПИДа. Иммунный статус при СПИДе. Лабораторная диагностика СПИДа. Характеристика вирусов группы герпеса. Эпштейн-Барр, цитомегаловирусов. Биопрепараты для диагностики, профилактики и лечения.
   
2. 
   Онкогенные вирусы. Характеристика онкогенных ДНК-содержащих вирусов (папиломовирусы, полиомовирусы, аденовирусы, вирусы герпеса, оспы). Характеристика онкогенных РНК-содержащих вирусов (ретровирусы). Механизм вирусного онкогенеза. Диагностика и профилактика новообразований, вызыва­емых онкогенными вирусами.
   
3. 
   Тестовый контроль по вирусологии.
   

ВИРУСЫ С ОБОЛОЧКОЙ										ВИРУСЫ БЕЗ ОБОЛОЧКИ
ДНК-двунитевые вирусы										ДНК-двунитевые вирусы
Herpesviridae			Hepadnaviridae				Poxviridae			Adenoviridae	Papovaviridae
										ДНК-однонитевые вирусы Parvoviridae
РНК-однонитевые вирусы										РНК-двунитевые вирусы
Coronaviridae		Paramyxoviridae				Bunyaviridae			Arenaviridae	Reoviridae
										РНК-однонитевые вирусы
Orthomyxoviridae				Retroviridae				Rhabdoviridae		Picornaviridae Caliciviridae
Togaviridae	Flaviviridae				Filoviridae

Более 150 разновидностей вирусов вызывают ОРВИ. Вместе с вирусами гриппа они являются наиболее распространенными возбудителями, поражающими верхние дыхательные пути.

Возбудителями ОРВИ являются следующие представители :

РНК-содержащие вирусы

Онкогенная патология имеет высокий уровень летальности (21-22%). Доказательства. У человека установлена вирусная природа бородавок и – это доброкачественная опухоль. Есть общее в клинике эпидемиологии и патоанатомии между опухолями человека и животного. Некоторые инфекционные вирусы участвуют в развитии онкозаболеваний (аденовирусы, герпеса и др.)

В эксперименте установлено сходство биохимических и биофизических и антигенных свойств между опухолями человека и животного. Присутствуют эпид. Характеристики онкозаболеваний.В США доминирует рак легкого, Африке – лимфомы, Австралии – саркомы, Индии – рак молочной жлезы, В России – рак шейки матки. Наблюдается семейный характер онкопатологии (передается по наследству вплоть до 15 поколения, онкогенные вирусы (ретро) передаются с половыми клетками (наследственная патология).

Развитие онковирусной патологии.

1 этап открытие онкогенных вирусов у животных. Впервые в1950 году доказана вирусная природа саркомы птиц.

С 1932 по 1962 открыты вирусы рака молочной железы, лейкимии у мышей, вирусы полиомы и саркомы и т.д.Вирусы SV40 сопутствующая флора у обезьян. Дети которые были привиты против полиомиелита в 50-60 годах были контаминированы этим вирусом, с70 годов эта вакцина уже не контаминирована. В этот период открыто 128 вирусов у животных и 1 у человека (бородавки).

2 этап доказывает участие вирусов в окопатологии. 1962 года – участие типов 18,24,31 аденовирусов в онкопатологии. 1969 – изучается лимфома у детей в Африке и выделен вирус Эпштейн барра. 1970 доказоно, что вирус Э-Б является возбудителем мононуклеоза. Вирусы простого герпеса 1,2 цитомигалии, гепатита В – онкогенные.

3 этап выделение вирусов из опухоли. 1972 году Лапин выделил вирус лейкоза, который был перенесен на обезьян.Вирус активизировался при экологических катастрофах (атомные взрывы в Чернобыле, Хиросиме и Нагосаки). В 1972 году выделен вирус В рака молочной железы. 1974 – Д вирус лимфогранулематоза.

Эпидемиология.

Источник- человек или животное?

Путь передачи – контактный лимфогранулематоза, папиломы, SV40

Трансмиссивный вирус миксемы?

Транспланцентарный вирус Лапина (лейкоз)

Алиментарный (через молоко матери)

Наследуемый (ретровирусы)
Классификация.

1 группа онкодновирусы (39) ДНК

2 группа онкорновирусы (47) РНК

ДНК

- вирусы Попова (папилома-7, из них 2 бородавки у человека; полиомы; вакцинирующие вирусы – SV, УР,ВК) – это голые вирусы имеют только нуклеопротеид.

• 
  аденовирусы (10 из них онкогенных)
  
• 
  герпесвирусы (8 из них онкогенные, простой 1 – рак гортани, простой 2 – рак шейки матки); вирус Эпштейн-Барра; вирус цитомегалии
  
• 
  Покс вирусы (5 из них вызывают фибромы).
  

- вирусы саркомотозного и лейкозного комплекса (20)

• 
  ретровирусы имеют обратную транскриптазу (РНК-ДНК-в хромосомы): род онковирусов (А.В.С.Д.); род лентивирусов (СПИД); лимфотропные вирусы (поражают человека и животных)
  
• 
  Неидентифицированные вирусы РНК (выделяются из опухолей человека).
  

Вирусы имеют структуру: в центре РНК (спираль), на которой имеется обратная транскриптаза. Н.К. имеет внутренний капсид (состоит из белков). Между капсидом и Н.К. имеется сердцевина (белковая оболочка). Имеется 2 внутренняя оболочка (белковая) и 3 оболочка –липопротеидная (идентична ткани хозяина). От наружной оболочки отходят отростки, на которых располагаются головки белковой природы и они определяют сходство ретровируса и ткани человека.

Типы ретровирусов (отличаются по строению сердцевины):

А- имеют полную сердцевину (нет Н,К)

В – четко различимый нуклеопротеид, который отделен сердцевиной от внутренней поверхности капсида ( сердцевина полая и Н,К,+)

С – сердцевина заполнена, за счет соединения с капсидом

Д – сердцевина заполнена, смещена на периферию в виде эллипса.

Этапы вирусного онкогенеза.

1 этап Инфицирование клетки онкогенными вирусами.

Адсорбция вируса на клетку. Проникновение вируса в клетку, чаще путем пиноцитоза, целиком. Происходит процесс депротенизации вируса и Н.К. попадает в ядро.

Без дефекта иммунной системы опухолевые клетки не размножаются (при Т-иммунном дефиците, после 60 лет).