Методическое пособие к малому практикуму по биохимии и молекулярной биологии
Работа 14. Количественное определение глюкозы по Халтману
жүктеу/скачать 1.21 Mb. Pdf көрінісі
|
| Работа 14. Количественное определение глюкозы по Халтману
Для количественного определения глюкозы широко используются следующие методы: титрометрические, энзиматические и колориметриче- ские. Последние наиболее распространены в биохимической практике в силу легкой воспроизводимости, точности и сравнительно высокой специ- фичности. Колориметрические методы основаны на определении степени интенсивности окраски соединений, образующихся при взаимодействии глюкозы с определенным веществом. В основе метода Халтмана – колориметрическое определение интен- сивности окраски раствора, образующегося при нагревании о-толуидина с глюкозой в присутствии уксусной кислоты. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации глюкозы. Ход исследования В три пробирки (одна из которых центрифужная) наливают по 1,8 мл 10 %-ного раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ). В первую (центри- фужную) пробирку прибавляют 0,2 мл крови (опытная проба), во вторую – 0,2 мл стандартного раствора глюкозы (стандартная проба) и в третью – 0,2 мл воды (контрольная проба). Содержимое пробирок перемешивают, а опытную пробу (с кровью) центрифугируют в течение 10 мин при 2500– 3000 об/мин. Центрифугат сливают в сухую пробирку. Затем из каждой пробы отбирают в другие пробирки по 0,5 мл раствора и добавляют во все пробирки по 4,5 мл о-толуидинового реактива. Пробирки закрывают фоль- гой вместо пробок, выдерживают в кипящей водяной бане 8 мин и тотчас же охлаждают. Окрашенный раствор колориметрируют против контроля на реактивы в кювете с рабочим ходом 10 мм, при длине волны 580-630 нм. Расчет производят по формуле: С оп = С ст Е оп /Е ст , где С оп – концентрация глюкозы в крови, мг %; С ст – концентрация стандартного раствора глюкозы, мг % (200 мг %); Е оп – оптическая плотность опытной пробы; 42 Е ст – оптическая плотность стандартной пробы. В норме содержание глюкозы в крови составляет 75–90 мг %. жүктеу/скачать 1.21 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|