Методическое пособие к малому практикуму по биохимии и молекулярной биологии
жүктеу/скачать 1.21 Mb. Pdf көрінісі
|
| Приготовление экстракта из ягоды шиповника. Шиповник взвеши-
вают, тщательно измельчают в фарфоровой ступке сначала в сухом виде, затем с 2 мл 2 %-ного раствора соляной кислоты. Осторожно, без потерь (по палочке, через воронку) переносят содержимое ступки в мерную колбу емкостью 50 мл. Ступку и пестик обмывают 2 %-ным раствором соляной кислоты, промывную жидкость присоединяют к общей порции вытяжки. Объем жидкости в мерной колбе доводят дистиллированной водой до мет- ки, колбочку закрывают пробкой и содержимое ее тщательно перемеши- вают. Небольшую порцию вытяжки фильтруют через бумажный фильтр, фильтрат используют для титрования. Титрование. В стаканчик отмеряют 2 мл экстракта и добавляют 4 мл 2 %-ного раствора соляной кислоты. Содержимое стаканчика титруют из бюретки 0,001 Н раствором 2,6-ДФИ до появления розового окрашивания, не исчезающего в течение 30 с. Расчет содержания витамина С: молекулярный вес (М) аскорбино- вой кислоты – 176. Грамм–эквивалент (М/2) равен 88 г; 1 мл 0,001 Н рас- твора соответствует 0,088 мг аскорбиновой кислоты. Количество аскорби- новой кислоты в 1 мл исследуемой жидкости определяют, исходя из титра окислителя 2,6-ДФИ и его количества, израсходованного на титрование. Например, если на титрование 1 мл вытяжки из шиповника израсходовано 1,35 мл 0,001 Н раствора 2,6-ДФИ, то в 1 мл вытяжки содержится: 0,088 мг 1,35 = 0,1188 мг аскорбиновой кислоты. Затем вычисляют содержание витамина С в 100 г продукта, исходя из величины навески шиповника и объема экстракта. Часть 2. Жирорас творимы е витамины 7. К а ч е с т в е н н а я р е а к ц и я на в и т а м и н А (р е а к ц и я Д р у м- монда ). Витамин А представляет собой группу жирорастворимых соеди- нений, производных b-ионона. 36 C H 3 CH 3 CH 3 CH 2 OH CH 3 CH 3 Ретинол является необходимым компонентом для нормальной функ- ции сетчатой оболочки глаза: он связывается с опсином (красным пигмен- том сетчатой оболочки), образуя зрительный пурпур родопсин, необходи- мый для зрительной адаптации в темноте. Витамин А необходим для роста костей, нормальной репродуктивной функции, эмбрионального развития, для регуляции деления и дифференцировки эпителия (усиливает размно- жение эпителиальных клеток кожи, омолаживает клеточную популяцию, тормозит процессы кератинизации). Качественное определение основано на том, что серная кислота, обладающая водоотнимающим свойством, спо- собствует превращению витамина А в окрашенный комплекс фиолетово- красного цвета. Реакция специфичностью не обладает. Ход исследования На сухое предметное стекло наносят 2 капли рыбьего жира в 4-5 кап- лях хлороформа и 1 каплю концентрированной серной кислоты. Наблюда- ют за появлением окраски (вначале проявляется голубое окрашивание, ко- торое затем быстро переходит в буро-красное). 8. Качественная реакция на витамин Д. Витамин Д (антирахитиче- ский) представляет собой группу соединений, состоящую из феролов, при- обретающих активность при ультрафиолетовом облучении (в том числе эргокальциферол и холекальциферол). CH 2 O H CH 2 O H эргокальцифeрол (витамин D 2 ) холeкальцифeрол (витамин D 3 ) Повышает проницаемость клеточных и митохондриальных мембран кишечного эпителия, облегчая транспорт катионов кальция и других двух- валентных катионов, активирует вторичное всасывание фосфатов, увели- чивает захват этих ионов костной тканью. При взаимодействии витамина Д с анилиновым реактивом при нагревании образуются окрашенные продук- ты реакции. 37 Ход исследования В сухую пробирку вносят 3 – 5 капель рыбьего жира (или раствор витамина в масле) и 5 капель хлороформа, перемешивают и добавляют 1 мл смеси анилина и концентрированной соляной кислоты (15:1). При нагревании желтая эмульсия приобретает сначала зеленую, а затем крас- ную окраску. Через 1–2 мин эмульсия разделяется на два слоя, нижний из которых окрашен в интенсивный красный цвет. жүктеу/скачать 1.21 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|