Исследование лакказной активности базидиальных грибов
Определение лакказной активности
жүктеу/скачать 58 Kb.
|
| Определение лакказной активности
Наиболее удобен спектрометрический метод определения активности лакказы (полифенолоксидазы) по образованию окисленного продукта – например, окрашенного 0-хинона из субстрата пирокатехина (бесцветный раствор) при λ = 410 нм. Вследствие этого лакказную активность определяют по изменению оптической плотности пробы (содержащей в качестве субстрата пирокатехин (1,2-диоксибензол), превращенного в единицу времени (за 1 мин) единицей белка (или биомассой гриба, мг) при длине волны спектрофотометра (или фотоэлектроколориметра) λ 410 нм. ( на КФК -440 нм). Определение лакказной активности проводят в реакции трансформации 10 мМ раствора пирокатехина (или другого фенолсодержащего субстрата) в 0,1М ацетатном буфере рН 5,0 с помощью исследуемых ферментных систем (например, культуральной жидкости микроорганизмов, полученных культивированием на различных питательных средах ) Расчет лакказной активности ЛА= (ОД0 ─ ОД t) , n/[ t , ℇ , Х, V., где ОД0 и ОД1 значения оптических плотностей растворов реакционной смеси в начале реакции и по истечении определенного времени, например, через 3 мин после начала реакции, где скорость максимальная; t – продолжительность реакции, мин; например, 3 мин. ℇ - коэффициент экстинкции пирокатехина, 740 мкМ . см-1 Х - концентрация белка, мг/мл; (и затем перевод на концентрацию биомассы для ЭПК/биомассы); V – объем пробы (КЖ), взятого на проведение реакции, мл; N - коэффициент разбавления пробы (ферментного раствора) в реакционной смеси. Для определения максимальной скорости реакции окисления необходимо построить график зависимости изменения ОД440 от времени и по графику определить промежуток времени, где скорость реакции окисления пирокатехина максимальная. Объекты исследования: _ХХ__- суточная культуральная жидкость ( или Экстракт поверхностной культуры=ЭПК), полученная в условиях поверхностного (глубинного) роста гриба F. fomentarius Э-14 (рабочее обозначение штамма F-1531). жүктеу/скачать 58 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|