Куркумин Curcumin
A fluorescent curcumin-based Zn(II)-complex reactivates mutant (R175H and R273H) p53 in cancer cells
жүктеу/скачать 2.05 Mb.
|
- Бұл бет үшін навигация:
- Abstract
- METHODS
- RESULTS
- CONCLUSIONS
A fluorescent curcumin-based Zn(II)-complex reactivates mutant (R175H and R273H) p53 in cancer cells.Garufi A, Trisciuoglio D, Porru M, Leonetti C, Stoppacciaro A, D'Orazi V, Avantaggiati M, Crispini A, Pucci D, D'Orazi G. AbstractBACKGROUND:Mutations of the p53 oncosuppressor gene are amongst the most frequent aberration seen in human cancer. Some mutant (mt) p53 proteins are prone to loss of Zn(II) ion that is bound to the wild-type (wt) core, promoting protein aggregation and therefore unfolding. Misfolded p53 protein conformation impairs wtp53-DNA binding and transactivation activities, favouring tumor growth and resistance to antitumor therapies. Screening studies, devoted to identify small molecules that reactivate mtp53, represent therefore an attractive anti-cancer therapeutic strategy. Here we tested a novel fluorescent curcumin-based Zn(II)-complex (Zn-curc) to evaluate its effect on mtp53 reactivation in cancer cells. METHODS:P53 protein conformation was examined after Zn-curc treatment by immunoprecipitation and immunofluorescence assays, using conformation-specific antibodies. The mtp53 reactivation was evaluated by chromatin-immunoprecipitation (ChIP) and semi-quantitative RT-PCR analyses of wild-type p53 target genes. The intratumoral Zn-curc localization was evaluated by immunofluorescence analysis of glioblastoma tissues of an ortothopic mice model. RESULTS:The Zn-curc complex induced conformational change in p53-R175H and -R273H mutant proteins, two of the most common p53 mutations. Zn-curc treatment restored wtp53-DNA binding and transactivation functions and induced apoptotic cell death. In vivo studies showed that the Zn-curc complex reached glioblastoma tissues of an ortothopic mice model, highlighting its ability to crossed the blood-tumor barrier. CONCLUSIONS:Our results demonstrate that Zn-curc complex may reactivate specific mtp53 proteins and that may cross the blood-tumor barrier, becoming a promising compound for the development of drugs to halt tumor growth. Люминесцентная куркумин на основе Zn(II)-комплекс активизирует мутант (R175H и R273H) р53 в раковых клетках. Garufi, Trisciuoglio D, Porru М, Леонетти C, Stoppacciaro A, D'Orazi V, Avantaggiati М, Crispini, Pucci D, D'Orazi Г. ФОН: Мутации гена р53 oncosuppressor гена среди наиболее частых аберрации видел раковых опухолей у человека. Какие-то мутанты (mt) белков р53 склонны к потере Zn(II) Иона, который привязан к дикого типа (wt) ядра, продвижение агрегации белков, и поэтому разворачивается. Смятых конформации белка р53 ухудшает wtp53-связывание ДНК и transactivation деятельности, способствующие росту опухоли и устойчивость к противоопухолевой терапии. Скрининговые исследования, посвященные выявлению маленькие молекулы, которые активировать mtp53, представляют собой, следовательно, привлекательным анти-рак терапевтической стратегии. Здесь мы протестировали новые флуоресцентные куркумин на основе Zn(II)-комплекс (Zn-curc), чтобы оценить ее эффект на mtp53 реактивации в раковых клетках. МЕТОДЫ: Конформации белка р53 был рассмотрен после Zn-curc лечения иммунопреципитации и иммунофлюоресценции анализов, с помощью конформации-специфических антител. В mtp53 реактивации была оценена хроматина иммунопреципитации (Чип) и полуколичественного от-ПЦР анализов дикого типа целевых генов р53. В внутриопухолевые Zn-curc локализации была оценена путем иммунофлуоресцентного анализа глиобластома тканей ortothopic модели мышей. РЕЗУЛЬТАТЫ: Zn-curc комплекс индуцированных конформационные изменения в р53-R175H и R273H мутантных белков, две самые распространенные мутации p53. Zn-curc лечения восстанавливается wtp53-связывание ДНК и transactivation функций и индуцированных апоптотической гибели клеток. В исследованиях in vivo показали, что Zn-curc комплекс достиг глиобластома тканей ortothopic модели мышей, подчеркивая свою способность пересек крови к опухоли барьер. ВЫВОДЫ: Наши результаты показывают, что, Zn-curc комплекс может активировать конкретных mtp53 белков, которые могут пересекать крови к опухоли барьер, став перспективным соединением для развития наркотики, чтобы остановить рост опухоли. World J Gastroenterol. 2013 Oct 28;19(40):6814-24. doi: 10.3748/wjg.v19.i40.6814. Curcumin cytotoxicity is enhanced by PTEN disruption in colorectal cancer cells. Chen L, Li WF, Wang HX, Zhao HN, Tang JJ, Wu CJ, Lu LT, Liao WQ, Lu XC. Author information
Abstract AIM: To investigate the effects of phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10 (PTEN) deficiency on the cytotoxicity of chemotherapeutic agents toward colorectal cancer cells. METHODS: PTEN-deficient colorectal cancer (CRC) cells were generated by human somatic cell gene targeting using the adeno-associated virus system. The cytotoxic effects of compounds including curcumin, 5-fluorouracil (5-FU), dihydroartemisinin (DHA), irinotecan (CPT-11) and oxaliplatin (OXA) on cancer cells were determined using the MTT assay. Enhanced cytotoxicity of curcumin in PTEN-deficient CRC cells was observed, and this was confirmed using clonogenic assays. Apoptosis and cell cycle progression were analyzed by flow cytometry. Levels of apoptosis and cell cycle-related proteins were examined by Western blotting. RESULTS: We developed an isogenic set of CRC cell lines that differed only in their PTEN status. Using this set of cell lines, we found that disruption of the PTEN gene had no effect on the sensitivity of CRC cells to 5-FU, CPT-11, DHA, or OXA, whereas PTEN disruption increased the sensitivity of CRC cells to curcumin. Loss of PTEN did not alter the curcumin-induced apoptosis in CRC cells. However, PTEN deficiency led to an altered pattern of curcumin-mediated cell cycle arrest. In HCT116 PTEN (+/+) cells, curcumin caused a G2/M phase arrest, whereas it caused a G0/G1 phase arrest in HCT116 PTEN (-/-) cells. Levels of cell cycle-related proteins were consistent with these respective patterns of cell cycle arrest. CONCLUSION: Curcumin shows enhanced cytotoxicity toward PTEN-deficient cancer cells, suggesting that it might be a potential chemotherapeutic agent for cancers harboring PTEN mutations. Куркумин цитотоксичность усиливается PTEN разрушение клеток в лечении колоректального рака. Чэнь L, Li WF, Ван HX, Чжао HN, Тан JJ, Wu CJ, LT Lu, Ляо WQ, Лу XC. Lin Chen Hong-Xiao Wang, Hai-На Чжао, Цзя-Тан Цзя, Чанг-Jie Wu, Li-Тин Лу, Wan-Цинь Ляо синь-Чэн Лу, института Геномной Медицины, Вэньчжоу Медицинский университет, Вэньчжоу 325027, Провинция Чжэцзян, Китай. ЦЕЛЬ: - Изучение влияния фосфатазы и tensin гомолог удален на хромосоме 10 (PTEN) дефицит на цитотоксичность химиотерапевтических агентов к клеток колоректального рака. МЕТОДЫ: PTEN-дефицитных колоректального рака (КРР) клеток были созданы человеческим геном соматических клеток с помощью таргетинга аденоассоциированный вирус системы. Цитотоксические эффекты соединений, в том числе куркумин, 5-фторурацил (5-ФУ), dihydroartemisinin (DHA), иринотекан (CPT-11) и оксалиплатином (ОКСА) на раковых клеток определяли с помощью МТТ-теста. Цитотоксичность из куркумина в PTEN-дефицитных CRC клеток наблюдалось, и это было подтверждено с помощью клоногенным анализов. Апоптоз и клеточный цикл прогрессии были проанализированы методом проточной цитометрии. Уровень апоптоза и клеточного цикла, связанные с белками, были обследованы с помощью Вестерн-блоттинга. РЕЗУЛЬТАТЫ: Мы разработали изогенной набор CRC клеточных линий, которые отличались только PTEN статус. Используя этот набор клеточных линий, мы обнаружили, что нарушение гена PTEN не оказала никакого влияния на чувствительность CRC клеток к 5-ФУ, CPT-11, DHA, или ОКСА, в то время как PTEN нарушение повышенная чувствительность CRC клеток куркумина. Потери PTEN не изменяет куркумин-индуцированного апоптоза в CRC клеток. Однако, PTEN дефицит привел к изменена структура куркумин-опосредованной клеточного цикла. В HCT116 PTEN (+/+) клеток, куркумин вызвало фазе G2/M ареста, в то время как она вызвала G0/G1 фазы ареста в HCT116 PTEN (-/-) клеток. Уровень клеточного цикла, связанные с белками, согласуются с этим соответствующие структуры клеточного цикла. ВЫВОД: Куркумин показывает, цитотоксичность по отношению к PTEN-дефицитных раковые клетки, предполагая, что это может быть потенциальным химиотерапевтическое средство для раков укрывательство PTEN мутаций. BMC Cancer. 2013 Oct 24;13(1):494. [Epub ahead of print] жүктеу/скачать 2.05 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|