Микробиологиялық зертхана. Микроскоптар сабақтың мақсаты

1 Троценко Н.И., Белоусова Р.В., Преображенская Э.А Практикум по ветеринарной вирусологии // Москва, «Агропромиздат». 1989. С. 3-12.

Материалдар мен жабдықтар. 9-11 күндік тауық эмбриондары, овоскоптар, эмальданған кюветалар. Физиологиялық ерітінді. Шыны түтіктерге арналған штативтер, эмбриондары салуға арналған ұяшықтар, спирт шамдары, резеңке грушалар, таяқшаға оралған тампондар, спирт, Петри шынылары, мөлшері 2-5 мл болатын шыны түтікшелер. Стерильді саймандар (шприцтер, иньекциялық инелер, көзге арналған және анатомиялық пинцеттер, қайшылар мен скальпельдер) салынған стерилизаторлар. Балқытылған парафин, шыныға жазатын қарындаш, лейкопластырь. Термостат, тоңазытқыш. Центрифуга, таразы, су моншасы.

Тауық эмбрионын зертхана жағдайында вирустарды өсіруде пайдалану ХХ ғасырдың 30-жылдарынан бастап іске асырыла бастады. Зертханалық жануарларға қарағанда тауық эмбриондарының артықтылықтары бар. Олардың қауызы мен қауызының астыңғы қабықшасы эмбриондардың сыртқы ортадан түсетін бактериялармен залалдануынан сақтайды және вирустарға өте сезімтал келеді. Тауық эмбриондары вирустарды өсіруге қолайлы орта, күтім мен азықты қажет етпейді және вирустарға қарсы антиденелерді түзбейді. Зертханалық жануарлар тәрізді тауық эмбриондарын вирусологияда келесі мақсаттар үшін: патологиялық материалдардан белсенді вирустарды анықтауда; биосынама қоюда; вирустарды бөліп алуда; вирустарды титрлеуде; вакцина дайындау үшін көп мөлшерде вирустарды жинауда; бейтараптау реакциясына қажетті тест – объект ретінде қолданады. Вирусы бар материалдармен жұқтыруға арналған тауық эмбриондарын келесі талаптар бойынша таңдап алады: тауық эмбриондарын жұқпалы аурулардан таза құс шаруашылығынан алады; жұмыртқа қауыздарында пигменттері болмау және таза болу (жууға болмайды) керек; Эмбриондардың жасы таңдап алған жұқтыру әдістеріне сәйкес болуы тиіс.

Тауық эмбрионының құрылысы. Әдетте тауықтар ұрықтанған, яғни ұрықтың бластула немесе ерте гаструла сатысындағы жұмыртқа шығарады. Осындай жұмыртқаны тауықтың дене қызуының температурасына дейін қыздырғанда ұрықтың ары қарай дамуы байқалады.

5 күн мен 12 күн аралығында инкубацияланған тауық эмбриондарын вирустарды жұқтыру жұмыстарныда пайдалануға болады. Эмбриондар дамып жатқан жұмыртқаның сырты ұсақ саңылаулары бар қауызбен қапталған, қауыздың ішкі жағында жанаса қабықша (қауызының астыңғы қабықшасы) орналасқан. Жұмыртқаның доғал жағында ауа камерасы болады. Ұрық (зародыш) денесі қауызға жақын, ал ұрықтың басы ауа камерасына қарай бағыттала орналасқан. Ұрық сұйықтыққа толы амнион қуысының ортасында орналасады, оның кіндігі саруызға жалғасып жатады. Қауыздың астыңғы қабықшасының ішкі жағында амнион мен сарыуыз қапшығын қоршап тұратын аллантальды қуыс бар. Ұрықтың дамуы кезінде аллантоис қабықшасы хорионмен қосылып, хорион – аллантоис қабықшасын (ХАҚ) құрайды.

Тауық эмбриондарында өсірілген вирустардың көпшілігі аллантоис және амнион сұйықтықтарында жиналып, дайын вирустық суспензияны құрайды. Инкубацияның бастапқы кезінде сарыуыз қапшығында ұрықтың дамуына қажетті қоректік заттар көп жиналып, эмбриогенездің 12 күндерінде ондағы қоректік заттар азаяды. Сондықтан вирусы бар материалдармен сарыуыз қапшығын жұқтыру инкубацияның 5-7 күндерінде жүргізіледі.

Амнион қуысы ұрықтардың дамуына қажетті буферлік орта болып есептеледі. Инкубация кезеңінің ортасына қарай бұл жерге 1 мл-ге дейін сұйықтық жиналады. Амнион қуысына жұқтыру үшін 6-10 күндік эмбриондар пайдаланылады.

Аллантоис қуысында зәр қышқылды тұздар, фосфорлы және азотты қосылыстар жиналады. Ұрықтардың дамуы, өсуі кездерінде аллантоис сұйықтығында қышқылды реакция жүреді. Аллантоис қуысы көлемінің максимальды ұлғаюы эмбриондар дамуының 9-12 күндері байқалады. Осыған байланысты аллантоис қуысына жұқтыру үшін 9-11 күндік эмбриондарды алады.

Хорион – аллантоис қабықшасындағы қан тамырлары қауыздың ішкі жағына бойлай орналасып, ұрықты оттегімен қамтамасыз етіп отырады, яғни эмбриондардың тыныс мүшесі қызметін атқарады. ХАҚ-ның максимальды жетілуі 11-13 күндері байқалатындықтан, жұқтыруға 10-12 күндік тауық эмбриондарын қолданады.