Біраз уақыт өткен соң,әр лункада қалыптасқан антиденелерді анықтайды да,гибридомды жасушалардың клонының бастаушысы болатын жасушалар табылады.
Біраз уақыт өткен соң,әр лункада қалыптасқан антиденелерді анықтайды да,гибридомды жасушалардың клонының бастаушысы болатын жасушалар табылады.
Іріктеліп алынған гибридті жасушаларды in vitro және in vivo жағдайында культурациялап,қажетті МКАД-мен жасушалар мөлшері алынады.Гибридомды клеткаларды мұздатылған күйде сақтауға болады.Гибридомды клеткаларды дайындау барысында антигендердің әртүрлі эпитоптарына антидене өндіретін жасуша клондары алынуы мүмкін.Осыған байланысты алынған нәтижеге жан-жақты және әртүрлі бағытта талдау жүргізеді.
Бұл этапта қолданылатын зат-полиэтиленгликоль.Оны қолданудың екі негізгі нұсқасы бар:
1.Бір минуттың ішінде 370 градуста араластыра отырып ПЭГ-нің 50 пайыздық ерітіндісін қосады да,центрифугалайды.
2.Біршама ұзақ уақыт жүргізіледі.Ол үшін ПЭГ-нің 30-35 пайыздық ерітіндісін қолданады.2 минут центрифугалайды да,бөлме температурасында 5-7 минут ұстайды.
Жаңадан алынған гибридомды клеткалар хромосома жоғалтуына байланысты стабильділігі төмен боладыі.Кейбір жасушалардың антидене өндіруші қабілеті болмайды.Сондықтан клондау жүргізеді.Ол үшін жартылай сұйық агарда клондау мен цитофлуориметр қолданылады.
Жартылай сұйық агар үшін 2 жүйе қолданылады.Ол жүйе екі қабаттан тұрады.Төменгі қабат (қатты) құрамында 0,5 пайыздық агар болады.Енді оның үстіне екінші сұйық қабатты қосады.Оның құрамында 0,3 пайыздық агар және клондаушы жасушалар болады.
Цитофлуориметрде флюросцентті микрошариктер қоллданылады.Оны антигенмен қаптайды.Мұндай микрошариктер арнайы антигендік гибридомды клеткаларда адсорбцияланады да,осы құралда оларды бөліп алады.
