Определение количественного содержания флавоноидов в надземной части шлемника байкальского
жүктеу/скачать 50.75 Kb.
|
Экспериментальные условияСырье. В работе были использованы надземная часть шлемника байкальского (Scutellaria baicalensis Georgi), собранная из пяти ценопопуляций (ЦП) Читинской области в 2005–2007 гг. (табл. 1), а также гер- барные образцы данного вида из гербария Отдела биологически активных веществ ИОЭБ СО РАН. Таблица 1. Характеристика исследуемого сырья
* Автор, с которым следует вести переписку. Спектральные исследования проводили на спектрофотометре Cecil 2011. Спектры поглощения регистри- ровали на спектрофотометре UV mini 1240 (Shimadzu). Использовали кварцевые кюветы с толщиной погло- щающего слоя 1 см. Температуру плавления устанавливали в запаянных капиллярах на приборе для опреде- ления температуры плавления IA-9100. Аналитическую и препаративную хроматографию на бумаге (БХ) проводили на бумаге FN-12 (Filtrak) в системах растворителей: 1 – CH3COOH – H2O (15 : 85), 2 – BuOH – CH3COOH – H2O (4 : 1 : 2); детекторы – УФ-свет, 5% NaOH. Выделение скутеллярина. 200 г измельченного сырья экстрагировали 70%-ным этиловым спиртом 3 раза в соотношении сырья и растворителя 1 : 10 (100 °С, по 90 мин). Объединенные извлечения концентрировали в вакууме до водного остатка (0,1 л), который подвергали жидкофазной экстракции гексаном и хлорофор- мом, после чего водный остаток подкисляли 20% H2SO4 (pH = 5) и экстрагировали этилацетатом. При жид- кофазной экстракции этилацетатом наблюдается выпадение межфазного осадка. Получены следующие фракции: гексановая (5,4 г), хлороформная (4,3 г), этилацетатная (39 г), а также межфазный осадок (2,5 г). Наличие флавоноидов определяли в этилацетатной фракции и межфазном осадке, для чего исследуемые компоненты растворяли в смеси этанол – ДМСО (1 : 1) и хроматографировали в двух направлениях (БХ, системы растворителей 1, 2). В результате проведенного анализа установлено, что в составе данных фрак- ций присутствуют флавоны (лютеолин, апигенин, скутеллярин). Удовлетворительное разделение с возможностью отнесения зон к конкретной группе флавоноидов на- блюдалось при хроматографировании межфазного осадка. Для более детальной идентификации проведено выделение доминирующего вещества с использованием препаративной БХ (системы растворителей 1, 2) с последующим анализом хроматографического поведения и характера поглощения в УФ- и видимой части спектра в присутствии диагностических добавок в сравнении с данными литературы. Физико-химический анализ позволил идентифицировать соединение как скутеллярин. Скутеллярин. С21Н18О12. Т.пл. 221ºС. УФ-спектр (λmax, нм): 285, 335; +NaOAc – 286, 333; +NaOH – 375. Методика количественного определения содержания флавоноидов в надземной части шлемника бай- кальского. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отвер- стиями диаметром 2 мм. Около 1 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 150 мл, приливают 100 мл 70%-ного этилового спирта, присоединяют к обратному холодиль- нику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 60 мин. После охлаждения извлечение фильтруют в мерную колбу вместимостью 250 мл. Экстракцию повторяют еще дважды: со 100 мл экстрагента в течение 60 мин и с 50 мл экстрагента в течение 30 мин. Объем объединенного фильтрата доводят до метки 70%-ным этиловым спиртом (раствор А). 1 мл раствора А переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора до метки 70%- ным этиловым спиртом (раствор Б1). Определяют оптическую плотность раствора Б1 при длине волны 285 нм. В качестве раствора сравнения используют 70%-ный этиловый спирт. Содержание флавоноидов в пересчете на скутеллярин в абсолютно-сухом сырье в процентах (ХI) вычис- ляют по формуле X I D KV m 400 100 , 100 W где D – оптическая плотность исследуемого раствора; KV– коэффициент разбавления исследуемого раствора (6250); 400 – удельный коэффициент погашения скутеллярина при длине волны 285 нм в 70%-ном этиловом спирте; m – масса сырья, г; W – потеря в массе при высушивании сырья, %. 1 мл раствора А переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, приливают 1 мл 2%-ного раствора хло- рида алюминия в 70%-ном этиловом спирте и доводят объем раствора до метки 70%-ным этиловым спиртом (раствор Б2). Определяют оптическую плотность раствора Б через 40 мин при длине волны 405 нм. Для приготовления раствора сравнения 1 мл раствора А переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора до метки 70%-ным этиловым спиртом. Параллельно определяют оптическую плотность раствора стандартного образца лютеолин-7-гликозида. Суммарное содержание флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид в абсолютно сухом сырье в процентах (ХII) вычисляют по формуле X II D KV mS 100 100 , S m DS KV 100 W где D – оптическая плотность исследуемого раствора; DS – оптическая плотность раствора стандартного об- разца лютеолин-7-гликозида; m – масса сырья, г; mS – масса стандартного образца лютеолин-7-гликозида, г; KV – коэффициент разбавления исследуемого раствора (6250); KVS – коэффициент разбавления раствора стандартного образца лютеолин-7-гликозида (2500); W – потеря в массе при высушивании сырья, %. Приготовление раствора стандартного образца лютеолин-7-гликозида. Около 0,02 г (точная навеска) лютеолин-7-гликозида, предварительно высушенного до постоянной массы при температуре 105 °С, перено- сят в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 95%-ном этиловом спирте и доводят объем раство- ра до метки тем же растворителем (раствор А). 1 мл раствора А переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, приливают 1 мл 2%-ного раствора хло- рида алюминия в 95%-ном этиловом спирте и доводят объем раствора до метки 95%-ным этиловым спиртом (раствор Б). Для приготовления раствора сравнения 1 мл раствора А переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора до метки 70% спиртом этиловым. Суммарное содержание флавоноидов в абсолютно сухом сырье в процентах (Х) вычисляют по формуле X X I X II , где ХI – содержание флавоноидов в пересчете на скутеллярин, ХII – содержание флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид. Содержание экстрактивных веществ определяли гравиметрическим методом [3]. При обработке результатов количественных анализов использовали методы математической статистики согласно рекомендациям [4, 5]. жүктеу/скачать 50.75 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|