Выделение суммарной ДНК из тканей растений

Из-за особенностей различных видов растений и специфичности органов одного растения (присутствие определенных вторичных метаболитов, прежде всего полифенолов, органических кислот и эфирных веществ у древесных форм, повышенное содержание белков, полисахаридов и других веществ) в настоящее время разработаны сотни методик выделения ДНК. Некоторые из них подходят для выделения ДНК из широкого круга растений, другие - разработаны для конкретных видов растений или экстракции ДНК из отдельных органов растений (клубней, семян), а также для выделения нуклеиновых кислот из гербарного материала.

Методики выделения растительной ДНК включают следующие этапы:

1. Измельчение тканей и разрушение клеточных стенок (гомогенизация). Гомогенизацию часто проводят путем растирания тканей в жидком азоте.

2. Разрушение клеточных мембран (лизис клеток). Эту операцию проводят для того, чтобы ДНК могла выйти в буфер для экстракции. Для лизиса клеток чаще всего используют детергенты, такие, как додецилсульфат натрия (808), цетилтриметиламмониум-бромид (СТАВ, синоним цитовлон) и другие.

3. Очистка ДНК от белков (депротеинизация). Очистку осуществляют с помощью экстракции белков хлороформом и (или) фенолом. Для более быстрой и более полной очистки препаратов ДНК также применяют ферменты протеиназы, которые приводят к гидролизу белков.

Для осаждения ДНК из раствора используют низкомолекулярные спирты (этанол или изопропанол).