Тема: Основы рационального питания
Схема проведения исследований на опиаты биологических объектов
жүктеу/скачать 1.35 Mb. Pdf көрінісі
|
| Схема проведения исследований на опиаты биологических объектов.
Исследование биологических объектов (трупного материала, биологических жидкостей живых лиц) на опиаты включает следующие этапы: 1) пробоподготовка: - гомогенизация (для тканей и органов); - гидролиз; - экстракция; 2) предварительное исследование; 3) подтверждающее исследование; 4) интерпретация полученных результатов. При исследовании на опиаты одним из определяющих моментов является пробоподготовка. При определении общего морфина и общего кодеина она включает: первичную обработку (гемолиз, гидролиз конъюгатов, депротеинизация) для последующего экстракционного выделения и собственно процесс экстракции, который может осуществляться методом жидкость- жидкостной экстракции (ЖЖЭ) или твердофазной экстракции (ТФЭ). Применение ЖЖЭ при контролируемом значении рН среды (8,5-9,0) обеспечивает изолирование из цельной крови до 70-80% морфина и 70-98% кодеина. Морфин является амфотерным соединением (с рК а 9,72 и 8,14), этим объясняется использование узкого диапазона значений рН при экстракции. 25 Оптимальными экстрагентами признаны смеси галогенуглеводородов со спиртами С 3 - С 4 : изопропанол - хлороформ (1:9) и н-бутанол - хлороформ (1:9), а также изопропанол - этилацетат (1:9). Несмотря на недостатки ЖЖЭ, к которым относятся образование эмульсий, применение больших объемов органических растворителей, при судебно-химическом исследовании крови на «лекарственные» яды методом ГХ/МС именно этому методу отдают предпочтение перед ТФЭ. Это определяется особенностями матрицы: вязкостью, способностью эритроцитов к агглютинации, наличием клеточных элементом, составом соэкстрактивных веществ. Метод ТФЭ с использованием наиболее распространенных неполярных сорбционных материалов – модифицированных силикагелей С 2 , С 8 и С 18 с гидрофобными функциональными группами, а также модифицированных сорбентов со смешанными функциями – широко разрабатывается и применяется для скринингового анализа «лекарственных» ядов, в том числе опиатов, преимущественно в моче, реже – в плазме, сыворотке крови, а также цельной крови живых лиц. Сообщения о применении ТФЭ к анализу трупной крови носят единичный характер. Ограничения к использованию ТФЭ для изолирования анализируемых веществ из крови обусловлены блокированием колонок компонентами этой матрицы, что требует обязательной первичной обработки проб, обеспечивающих гемолиз и депротеинизацию крови, что по трудоемкости ставит метод в один ряд с ЖЖЭ. Применение метода ТФЭ требует соответствующего оборудования для вакуумирования и дорогостоящих колонок (картриджей) одноразового использования. В качестве примера достаточно наглядна схема пробоподготовки (изолирования) при исследовании трупной крови на морфин и кодеин: 1) кислотный гидролиз – с применением концентрированной соляной кислоты (100 0 С, 30 мин); 2) осаждение белков трихлоруксусной кислотой; 3) отделение осадка центрифугированием (4000 об/мин в течение 10 мин); 4) очистка кислого водного супернатанта экстракцией гексаном; 5) отделение кислой водной фазы и доведение ее до рН 8,5-9,0; 26 6) экстракция анализируемого вещества из водного извлечения органическим экстрагентом (смесью галогенуглеводородов со спиртами С 3 - С 4 ); 7) центрифугирование экстракта (при необходимости); 8) отделение органической фазы и доведение до определенного объема; 9) отбор аликвотных частей экстракта для анализа. Данный вариант пробоподготовки является простым и универсальным, что делает возможным ее применение в аппаратурных хроматографических методах. жүктеу/скачать 1.35 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|