Возможности применения метода гх-мс
жүктеу/скачать 0.64 Mb. Pdf көрінісі
|
| ГХ-МС-АНАЛИЗ В МЕДИЦИНЕ
И ТОКСИКОЛОГИИ В клинических анализах и определении неток- сичных веществ метод ГХ-МС не получил широ- кого распространения. Можно, однако, выделить некоторые области применения: клинический ана- лиз стероидов и селективный скрининг врожден- ных ошибок метаболизма. Способность ГХ-МС определять множество метаболитов стероидов одновременно в едином "стероидном профиле" остается до сих пор непре- взойденной. Предложена методика определения 12 анаболических гормонов в моче с пределами об- наружения 0.5 нг/мл [52]. Показан метод опреде- ления 8 анаболических стероидов в тканях свиней после жидкостно-жидкостной экстракции (ЖЖЭ) и дериватизации гептафторбутировым ангидридом с пределами обнаружения 0.9–1.5 мкг/кг [53]. Врожденные ошибки метаболизма представля- ют собой группу редких заболеваний. Для обна- ружения излечимых врожденных заболеваний ис- пользуют лабораторные скрининговые тесты. Та- кие биохимические исследования включают в себя анализ аминокислот в плазме и моче, органиче- ских кислот (интермедиатов в метаболизме ами- нокислот, жиров и углеводов), пуринов, пирими- динов, олиго- и полисахаридов в моче, карнитина, ацилкарнитина и длинных жирных кислот в плаз- ме. Большую роль играет и определение органиче- ских ацидурий [54]. Именно их анализ является основным применением ГХ-МС в селективном скрининге [55, 56]. Органические кислоты экстра- гируют из биологических жидкостей методом твердофазной экстракции, затем дериватизируют этерификацией обычно с N,O-бис(триметилсилил) трифторацетамидом, содержащем 1 % триметил- хлорсилана, реже диазометаном [57]. Кислородсо- держащие кислоты предварительно переводят в оксимы с помощью гидроксиламина и его произ- водных. Хроматографическое разделение прово- дят на капиллярных колонках. Анализ анаболических стероидов, а также эст- рогенов долгое время тесно связан с ГХ-МС. Сложность анализируемых образцов вынуждает использовать капиллярные колонки для разделе- ния; в большинстве лабораторий применяют непо- лярные или малополярные колонки с силикагелем длиной 25–30 м. Для разделения изомеров иногда используют колонки длиной до 60 м. Для допол- нительной очистки образца предложено использо- вать систему ГХ-ГХ с двумя колонками [58]. Развитие техники МС-МС позволило опреде- лять соединения в сложных смесях, поскольку во фрагментном спектре отсутствуют сигналы при- месей [59]. Одна из основных областей применения ГХ- МС — токсикология и судебная медицина, по- скольку это один из самых мощных, универсаль- ных и чувствительных методов качественного и количественного определения наркотических и лекарственных веществ и их метаболитов в раз- личных биологических образцах (кровь, плазма, моча, слюна, пот, волосы). К настоящему времени разработано множество методик определения большой группы наркотических и лекарственных веществ в плазме или цельной крови, использую- ВОЗМОЖНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ МЕТОДА ГХ-МС... НАУЧНОЕ ПРИБОРОСТРОЕНИЕ, 2010, том 20, № 4 41 щих ГХ с азотно-фосфорным и масс-селективным детекторами [60], а также методик для скрининга отдельных групп лекарственных и наркотических веществ, бензодиазепинов [61–63], барбитуратов [64], амфетаминов [65], каннабиноидов [66], фено- тиазинов [67], антиэпилептиков, антидепрессан- тов, нейролептиков и опиатов [68, 69] и т. д. В большинстве случаев образцы крови или плазмы анализируются для более точного количественно- го определения токсиканта, обнаруженного при скрининге мочи. Подготовка образцов биожидкостей перед ана- лизом должна включать в себя следующие стадии: разрушение конъюгатов (т. к. большинство поляр- ных метаболитов наркотических и лекарственных веществ выводятся с мочой в конъюгированном виде); выделение анализируемых веществ из био- материала; дериватизацию полярных труднолету- чих аналитов и переочистку экстракта (если необ- ходимо). В то же время важно, чтобы при подго- товке образцов в анализируемых соединениях не нарушалась их основная структура, т. к. это при- ведет к трудностям их идентификации. Для раз- рушения конъюгатов обычно применяется либо мягкий, но продолжительный ферментативный гидролиз, либо более жесткий прямой кислотный гидролиз. Обычно ферментативный гидролиз ис- пользуется в допинг-контроле и для анализа неко- торых групп соединений, чувствительных к ки- слотному гидролизу (типа 1,4-бензодиазепинов, кокаина и др.). Для токсикологических анализов жүктеу/скачать 0.64 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|