Флавоноиды Astragalus uliginosus L. и A. schelichovii Turcz. секции Euodmus Bunge (Fabaceae).
Коцупий О. В.
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Центральный сибирский ботанический сад СО РАН, Новосибирск, olnevaster@gmail.com
Секция Euodmus Bunge подрода Cercidothrix Bunge рода Astragalus L. (Fabaceae) на территории России включает 3 вида – южно-европейский Astragalus falcatus L. (астрагал серпоплодный), северо-азиатский A. uliginosus L. (астрагал болотный) и северо-восточно-азиатский A. schelichovii Turcz. (астрагал Шелихова). Виды имеют достаточно четкие анатомо-морфологические признаки. Биохимическое исследование видов секции представляет интерес как с точки зрения хемосистематики, так и с позиций ресурсоведения.
Достаточно хорошо изучен химический состав официнального А. falcatus. В надземной части растений этого вида обнаружены тритерпеноиды и азотсодержащие соединения, в листьях – кумарины [1], в растении - каротиноиды [2]. Флавоноиды найдены во всех частях растения. Главный компонент – робинин, в надземной части его количество (в %) составило 2,20, в стеблях – 0,16 - 1,12, в листьях 1 – 2,33, в бутонах – 1,10, в цветках – 1, 47 - 1,48, в плодах 0,47. Кроме робинина, в листьях А. falcatus идентифицированы кемпферол–3–О-β-рутинозид [1], кверцетин-3-О-[β-D-глюкопиранозил (1→ 3) - α-L–рамнопиранозил (1 → 6)] - β-D-галактопиранозида 7-O-β-D-глюкопиранозид; изорамнетин 3-O-[β-D-ксилопиранозил (1 → 3) - α-L-рамнопиранозил (1 → 6)] - β-D-галактопиранозида 7-O-α--L–рамнопиранозид [3]. Аптечный препарат, полученный из листьев и цветков астрагала серпоплодного – «Фларонин» – гипоазотемическое средство.
В надземной части A. uliginosus обнаружены кумарины, в листьях – азотсодержащие соединения и флавоноиды [1]. Нами не найдено литературных данных по исследованию химического состава растений A. schelichovii.
Цель нашего исследования - изучить состав и содержание флавоноидов у растений сибирских видов A. uliginosus и A. schelichovii секции Euodmus Bunge с хемотаксономических позиций, а также оценить ресурсную значимость объектов исследования.
Для извлечения суммы флавоноидов проводили исчерпывающую экстракцию 70 % этанолом при нагревании на водяной бане. Для проведения кислотного гидролиза к 0,5 мл водно-этанольного извлечения прибавляли 0,5 мл HCl (2 н) и нагревали на кипящей водяной бане в течение 2-х часов.
ВЭЖХ проводили на жидкостном храмотографе «Agilent 1200» с диодноматричным детектором и системой для сбора и обработки хроматографических данных ChemStation. Разделение проводили на колонке Zorbax SB-C18, размером 4,6×150 мм, с диаметром частиц 5 мкм, применив градиентный режим элюирования. В подвижной фазе содержание метанола в водном растворе ортофосфорной кислоты (0,1 %) изменялось от 50 до 52 % за 56 мин. Скорость потока элюента 1 мл/мин. Температура колонки 26 оС. Объем вводимой пробы 5 мкл. Детектирование осуществляли при λ = 255, 270, 290, 340, 350, 360, 370 нм. Для приготовления подвижных фаз использовали метиловый спирт (ос.ч.), ортофосфорную кислоту (ос.ч.), бидистиллированную воду. Стандартные растворы готовили в концентрации 10 мкг/мл в этиловом спирте. Анализируемые соединения идентифицировали сравнением со стандартными образцами. Анализ каждого образца проводили в 2-кратной повторности.
Содержание индивидуальных компонентов (Сх) в процентах в пересчете на абсолютно-сухое сырье вычисляли по формуле:
где Сст - концентрация соответствующего стандартного раствора флавонола, мкг/мл; S1 – площадь пика флавонола в анализируемой пробе, е.о.п.; S2 – площадь пика стандартного флавонола, е.о.п.; V1 – объем элюата после вымывания флавонолов с концентрирующего патрона, мл; V2 – общий объем экстракта, мл; М – масса навески, мг; В – влажность сырья, %
В гидролизатах листьев растений A. uliginosus и A. schelichovii, исследованных с помощью ВЭЖХ, обнаружены пять веществ, которые по максимумам УФ-спектров отнесены к веществам агликоновой природы; из них идентифицированы кверцетин, кемпферол и изорамнетин (таблица 1).
-
Таблица 1
Время удерживания и спектральная характеристика агликонов флавоноидов Astragalus uliginosus и A. schelichovii в обращенно-фазовой ВЭЖХ
-
№ пика
| -
Вещество
| -
Время удерживания, мин
| -
Спектральные данные, λ
| -
1
| -
агликон I
| -
5,4
| -
256, 372 нм
| -
2
| -
кверцетин
| -
6,7
| -
255, 370 нм
| -
3
| -
агликон II
| -
9
| -
249 пл., 266, 322 пл., 367 нм
| -
4
| -
кемпферол
| -
11,2
| -
265, 322 пл., 366 нм
| -
5
| -
изорамнетин
| -
12,5
| -
254, 370 нм
|
В таблице 2 приведено содержание индивидуальных компонентов и суммы агликонов растений изучаемых видов из разных ценопопуляций, а также образцы разных лет одной ценопопуляции. Как видно из таблицы, у двух изученных видов нет отличий в качественном составе и суммарном содержании агликонов флавоноидов. Некоторые отличия обнаружены в соотношении индивидуальных компонентов. Так, в растениях изучаемых видов накапливается кемпферола больше, чем кверцетина: у A. uliginosus - от 1,1 до 9,6 раз, у A. schelichovii от 2,5 до 20 раз. У A. uliginosus кверцетина больше, чем агликона II, у A. schelichovii кверцетина меньше или равно агликону II.
Таблица 2
Содержание агликонов флавонолов в листьях видов Astragalus uliginosus и A. schelichovii в обращенно-фазовой ВЭЖХ (в % от массы абсолютно–сухого сырья)
Место произрастания, дата сбора,
фаза развития
|
Агли
кон I
|
Квер–
цетин
|
Агли
кон II
|
Кемп–
ферол
|
Изо-рам-нетин
|
Сумма агликонов
|
A. uliginosus
|
Забайкальский край, Улетовский р-н, 137 км от Читы на запад, луг. 25.07.2001. Ц
|
0,05
|
0,33
|
0,21
|
0,6
|
0,07
|
1,27
|
Забайкальский край, Газ-Заводской р-н, окр. с. Урюпино, застава, луг. 24.07.2002. Ц
|
0,003
|
0,32
|
0,04
|
0,77
|
0,19
|
1,32
|
Забайкальский край, окр. п. Газ-Завод, приречные заросли. 20.07.2002. Ц
|
0,01
|
0,22
|
0,04
|
0,33
|
0,06
|
0,66
|
Забайкальский край, Карымский р-н, окр. с. Урульга, влажный осоковый луг. 13.07.2002. Ц
|
0,06
|
0,29
|
0,23
|
0,68
|
0,05
|
1,30
| Забайкальский край, окр. с. Урульга, влажный осоковый луг.13.07.2003. Ц |
0,03
|
0,28
|
0,05
|
0,70
|
0,05
|
1,11
|
Забайкальский край, окр. с. Урульга, берег р. Урульга. 13.07.2003. Ц
|
0,03
|
0,15
|
0,14
|
0,68
|
0,07
|
1,08
|
Респ. Бурятия, Баунтовский р-н, окр. п. Таксимо, суходольный луг.15.07.1975. Ц
|
0,05
|
0,24
|
0,11
|
0,40
|
0,03
|
0,84
|
Кемеровская обл., Промышленновский р-н, окр. п. Ваганово, осоково-злаковое болото. 13.07.1989. Ц
|
0,03
|
0,04
|
0,22
|
0,34
|
0,04
|
0,66
|
НСО, Каргатский р-н, окр. с. Филино, разнотравный луг. 14.07.2005. Ц
|
0,03
|
0,25
|
0,15
|
0,78
|
0,04
|
1,24
|
A. schelichovii
|
Якутия, Жиганский р-н, лев. берег р. Собопол, песчано-галечниковая пойма. 30.07.1958. Ц-П
|
0,03
|
0,05
|
0,07
|
0,47
|
|
0,62
|
Якутия, Булунский р-н, окр. п. Джарджан, галечниковый берег. 4.08.1970. Ц-П
|
0,02
|
0,02
|
0,42
|
0,32
|
|
0,78
|
Якутия, Жиганский р-н, устье р. Катары, песчано-галечниковый берег. 30.07.1970. Ц-П
|
0,06
|
0,03
|
0,29
|
0,30
|
0,02
|
0,69
|
Якутия, Усть-Янский р-н, окр. п. Усть-Куйга, каменистый берег ручья. 03.08.1988. Ц-П
|
0,04
|
0,14
|
0,14
|
0,33
|
0,01
|
0,66
|
Хабаровский край, окр. п. Софийск, р. Олга, песчано-галечниковый берег. 10.07.1977. Ц
|
0,05
|
0,03
|
0,47
|
0,30
|
0,02
|
0,86
|
Хабаровский край, окр. п. Софийск, долина р. Олга, разнотравный луг. 11.06.1978. Ц
|
0,09
|
0,14
|
0,34
|
0,45
|
0,03
|
1,05
|
Примечание: Ц – фаза цветения, П – фаза плодоношения.
Достаточно четкие отличия в компонентном составе изучаемых видов обнаружены на хроматограммах этанольных экстрактов листьев. Качественный состав растений А. uliginosus насчитывает от 21 до 38 фенольных кислот, гликозидов и агликонов флавоноидов, растений A. schelichovii – от 9 до 13 компонентов. При изучении растений разных ценопопуляций выделены типичные для изучаемых видов «флавоноидные профили». Главные компоненты этих профилей, по максимумам спектров поглощения соответствующие гликозидам флавоноидов, различны у растений А. uliginosus и A. schelichovii (рисунок).
Таким образом, в гидролизованных экстрактах листьев растений А. uliginosus и A. schelichovii, исследованных с помощью ВЭЖХ, обнаружено достаточно большое содержание агликонов флавоноидов, которое составляет 0,6 – 1,3 % от массы абсолютно–сухого сырья. Из пяти веществ, по максимумам УФ-спектров отнесенных к агликонам флавоноидов; идентифицированы кверцетин, кемпферол и изорамнетин. Богатый состав фенольных кислот, гликозидов и агликонов флавоноидов в экстрактах листьев А. uliginosus отличается от более скудного состава фенольных соединений A. schelichovii.
Рисунок. Типичные «флавоноидные профили» А. uliginosus (Забайкальский край, Газ-Заводской р-н, окр. с. Урюпино, 24.07.2002) и A. schelichovii (Хабаровский край, окр. п. Софийск, р. Олга, 10.07.1977), полученные методом ВЭЖХ. По оси абсцисс – время удерживания, мин., по оси ординат – оптическая плотность.
Литература
1. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование: cемейства Hydrangeaceae – Haloragaceae. Л., 1987. Т. 3. 326 с.
2. Гигошвили Т.И., Алания М.Д. Каротиноиды Astragalus falcatus // Химия природных соединений. 2003. Т. 39. № 4. С. 403.
3. Alaniya M.D., Kavtaradze N.Sh., Skhirtladze AV., Sutiashvili M.G. Flavonoid oligosides from Georgian Astragalus falcatus // Chemistry of Natural Compounds. 2011. Vol. 47. N. 3. Р. 377-381.
Достарыңызбен бөлісу: |