Homocysteine FS*
Гомоцистеин
|
Кат. №
|
Фасовка
|
1 3409 99 10 930
|
R1 4 х 12,5мл
|
+ R2 1 × 8 мл
+ R3 1 × 6мл
| Справка [1, 2]
Гомоцистеин представляет собой серосодержащую аминокислоту, которая является медиатором в метиониновом цикле. Повышенный уровень гомоцистеина в плазме является чувствительным маркером недостатка фолиевой кислоты и цианкобаламина (витамина B12), а также независимым фактором риска развития сердечно-сосудистых заболеваний. Патологические концентрации гомоцистеина в плазме сопутствуют также родовым патологиям, осложнениям беременности, психиатрическим заболеваниям и старческому маразму. Тем самым, измерение гомоцистеина играет потенциально важную роль в клинической диагностике.
Метод
Метод ферментативной циклической реакции.
Окисленный общий гомоцистеин восстанавливается до свободного гомоцистеина (Hcy). Свободный гомоцистеин вступает в реакцию с косубстратом S-аденозилметионином (SAM), катализируемую гомо-цистеинметилтрансферазой, с образованием метионина и S-аденозилгомоцистеина (SAH), который, в свою очередь, гидролизуется SAH-гидролазой до аденозина и гомоцистеина. Образовавшийся гомоцистеин опять включается в реакцию, катализируемую гомоцистеинметилтрансферазой. Такая циклическая реакция приводит к значительному усилению определяемого сигнала.
Образовавшийся аденозин немедленно гидролизуется аденозиндезаминазой до инозина и аммиака, который вступает в глутаматдегидрогеназную реакцию с сопутствующим превращением НАДH в НАД+. Снижение концентрации НАДH, измеряемое при 340 нм, пропор-ционально концентрации гомоцистеина в пробе.
Hcy + SAM Метионин + SAH
SAH Аденозин + Hcy
Аденозин Инозин + NH3
NH3 + НАДH + 2-Оксоглутарат ГДГ> Глутамат + НАД+ + H2O
Hcy – Гомоцистеин
SAH – S-аденозингомоцистеин
SAM – S-аденозинметионин
ГДГ - глутаматдегидрогеназа
Реагенты
Компоненты и их концентрации в реакционной смеси
Примечание: Концентрации приведены для окончательной тестовой смеси
R1
|
S-аденозилметионин (SAM), ммоль/л
|
0,1
|
|
НАДН, ммоль/л
|
0,2
|
|
ТСЕР, ммоль/л
|
0,5
|
|
2-оксоглутарат, ммоль/л
|
5
|
|
Глутаматдегидрогеназа, кЕд/л
|
10
|
|
SAH-гидролаза, кЕд/л
|
3
|
|
Аденозиндезаминаза, кЕд/л
|
5
|
|
Гомоцистеинметилтрансфераза, кЕд/л
|
5
|
Стабильность и хранение
Реагенты стабильны до конца месяца, указанного в сроке годности, при хранении при 2 – 8 °C в защищённом от света месте. Не допускать загрязнений! Не замораживать реагенты!
Меры предосторожности
-
Реагенты содержат азид натрия (менее 1 г/л) в качестве консерванта. Не глотать! Избегать попадания на кожу и слизистые оболочки!
-
Следуйте мерам предосторожности, соблюдаемым при использовании лабораторных реагентов.
-
Не смешивайте реагенты из наборов разных лотов.
-
Реагенты должны быть прозрачными. На непригодность реагентов указывает их помутнение или начальное поглощение реагента 1 меньше 0,5 (при 340 нм и оптическом пути 0,6 см).
Обезвреживание отходов
В соответствии с местными правилами.
3-реагентная система
Реагенты готовы к использованию.
2-реагентная система
Внести 2 мл реагента 2 в 12,5 мл реагента 1, не допуская пенообразования. Смесь стабильна в течение 1 недели в тёмном месте при 2 – 8 °C.
Необходимые материалы, не включённые в набор
• 0,9 % раствор NaCl.
• Общее лабораторное оборудование
Исследуемые образцы
• Сыворотка.
• ЭДТА – или гепаринизированная плазма.
Отделить сыворотку от клеток немедленно после забора крови. Липемические или гемолизированные пробы для тестирования непригодны.
Стабильность [2]:
4 суток при 15 – 25 °C
4 недели при 2 – 8 °C
4 года при –20 °C
Загрязнённые образцы хранению не подлежат.
Процедура определения
Адаптации к автоматизированным системам запрашивайте дополнительно.
Параметры для Hitachi 911 (3-реагентная система):
Длина волны, нм
|
700 / 340 (бихроматическая)
|
Температура, °C
|
37
|
Измерение
|
Кинетика фикс. времени
По 2 точкам
|
Образец/Калибратор
|
15 мкл
|
Реагент 1
|
200 мкл
|
Реагент 2
|
32 мкл
|
Реагент 3
|
20 мкл
|
Внесение реагента 2
|
Цикл 5 (80 с)
|
Внесение реагента 3
|
Цикл 15 (276 с)
|
1-е считывание
|
Цикл 23 (460 с)
|
2-е считывание
|
Цикл 31 (590 с)
|
Калибровка
|
Линейная интерполяция
|
Параметры для Hitachi 911 (2-реагентная система):
Длина волны, нм
|
700 / 340 (бихроматическая)
|
Температура, °C
|
37
|
Измерение
|
Кинетика фикс. времени
По 2 точкам
|
Образец/Калибратор
|
15 мкл
|
Реагент 1+2 (смесь)
|
230 мкл
|
Реагент 3
|
20 мкл
|
Внесение реагента 3
|
Цикл 15 (276 с)
|
1-е считывание
|
Цикл 23 (460 с)
|
2-е считывание
|
Цикл 31 (590 с)
|
Калибровка
|
Линейная интерполяция
|
Примечание: При выполнении анализа вручную следует пересчитать требуемые объёмы проб, калибратора и реагентов, сохраняя пропорцию.
Калибровка и вычисление
Концентрация гомоцистеина в тестируемых пробах определяется по калибровочной кривой путём линейной интерполяции. Калибровочная кривая строится по поглощениям 2 калибраторов TruCal Homocysteine (уровни 1 и 2). Для анализатора Cobas Mira следует использовать калибраторы TruCal Homocysteine уровня 0 (холостая проба Cobas Mira) и уровня 2.
При 3-реагентной системе стабильность калибровки сос-тавляет не менее 5 суток. При 2-реагентной системе ка-либровку следует выполнять ежедневно.
Калибраторы и контроли
Для внутреннего контроля качества с каждой серией образцов проводите измерение контрольной сыворотки DiaSys TruLab Homocysteine.
TruLab Homocysteine
|
Кат. №
|
Фасовка
|
уровень 1
|
5 9770 99 10 046
|
1 × 1 мл
|
уровень 2
|
5 9780 99 10 046
|
1 × 1 мл
|
Рабочие характеристики
Диапазон измерений
Тест разработан для определения концентраций гомоцистеина в диапазоне измерения до 50 мкмоль/л. Если значение превосходит верхний предел этого диапазона, необходимо развести образец изотоническим раствором NaCl (0,9%) в соотношении 1+1 и полученный результат умножить на 2.
Специфичность/Помехоустойчивость
Цистатионин до 20 мкмоль/л, аденозин до 100 мкмоль/л, L-цистеин до 1 ммоль/л, глютатион до 500 мкмоль/л, гемоглобин до 1200 мг/дл, аскорбиновая кислота до 10 ммоль/л, билирубин до 20 мг/дл, липемия до 2500 мг/дл триглицеридов, фторид натрия до 1 ммоль/л, фосфат натрия до 1 ммоль/л и аммиак до 500 мкмоль/л не влияют на точность анализа.
Чувствительность/Предел определения
Нижний предел определения составляет 1 мкмоль/л.
Воспроизводимость
По протоколу EP-5 NCCLS (Национального комитета по клиническим и лабораторным стандартам):
Образец
|
n
|
Среднеарифметическое значение, мкмоль/л
|
SD, мкмоль/л
|
CV, %
|
Внутрисерийная
|
Образец 1
|
40
|
7,2
|
0,16
|
2,2
|
Образец 2
|
80
|
13,2
|
0,64
|
3,0
|
Образец 3
|
80
|
29,1
|
0,81
|
1,8
|
Межсерийная
|
Образец 1
|
40
|
7,2
|
0,29
|
4,1
|
Образец 2
|
80
|
13,2
|
0,72
|
5,9
|
Образец 3
|
80
|
29,1
|
0,92
|
4,0
|
Сравнение методов
Сравнение реагента Homocysteine FS DiaSys (y) и коммерчески доступных тестов (x) с использованием 72 образцов дало следующие результаты:
y = 1,013x – 0,162 мкмоль/л; r = 0,978.
Референсные значения [3, 4]
Женщины:
< 30 лет 6 - 14 мкмоль/л
30 – 59 лет 5 – 13 мкмоль/л
> 60 лет 7 – 14 мкмоль/л
Мужчины:
< 30 лет 6 – 14 мкмоль/л
30 – 59 лет 6 – 16 мкмоль/л
> 60 лет 6 – 17 мкмоль/л
> 85 лет 15 – 30 мкмоль/л
Каждая лаборатория должна проверить применим ли контрольный диапазон величин к местному населению, и определить, при необходимости, свой собственный диапазон нормальных величин.
-
Refsum H, Smith AD, Ueland PM, Nexo E et al. Facts and recommendations about Total Homocysteine Determinations: an Expert Opinion. Clin Chem 2004;50:3-32.
-
Guder WG, Zawta B et al. The Quality of Diagnostic Samples. 1st ed. Darmstadt: GIT Verlag; 2001. p. 35.
-
Schreiner H, Göbel-Schreiner B, Durst C, Casper R, Walch S. Homocysteine: reference values. Clin Lab 1997;43:1121-4.
-
Herrmann W, Quast S, Ullrich M, Schultze H, Geisel J. The importance of hyperhomocysteinemia in high age people. Clin Lab 1997;43:1005-9.
Изготовитель
DiaSys Diagnostic Systems GmbH
Alte Strasse 9, 65558 Holzheim, Germany
FS – жидкие стабильные (Fluid stable)
Достарыңызбен бөлісу: |