Изучение влияния аргинина на состояние гематологических и биохимических показателей старых крыс на фоне действия фенилгидразина

Научный руководитель: к.м.н., доцент Попугайло М.В.

Старение населения является глобальным явлением. Пожилое население мира – люди в возрасте 60 лет и старше – являются самой быстрорастущей возрастной группой. По данныи ВОЗ в мире насчитывается 650 миллионов пожилых людей, т. е. людей в возрасте шестидесяти лет и старше. Старение населения является одной из важнейших социальных проблем, которая во многом изменяет экономические, производственные и общественные отношения современного мира. Поэтому не случайно, что в разработанном Программой ООН по старению проекте "Программы научных исследований по проблеме старения в ХХI веке", концепция здорового старения отнесена к наиболее приоритетным направлениям. Очевидно, что разработка средств профилактики преждевременного старения является ключевой в реализации этих программ.

В России эта проблема стоит особенно остро, т.к. средняя продолжительность жизни в стране существенно ниже, чем во многих промышленно развитых странах. Остро стоящие проблемы старого населения страны, его активного долголетия, призваны решить геронтологические исследования. Задача исследования – изучение характера и динамики возрастных изменений здоровья населения старше пятидесяти лет и определения приоритетов развития медико-социальной помощи пожилым. Увеличение продолжительности жизни возможно за счёт правильной диеты, физических упражнений и избегания потенциально токсичных факторов, таких как курение. Тем не менее, преимущественно все эти факторы направлены на преодоление не старения, а только «случайной» смертности, которая уже сегодня составляет небольшую долю смертности в развитых странах, и таким образом этот подход имеет ограниченный потенциал увеличения продолжительности жизни.

Существует несколько возможных стратегий, за счёт которых исследователи надеются уменьшить скорость старения и увеличить продолжительность жизни. Например, показано, что продолжительность жизни увеличивается в результате ограничения калорийности диеты. Другие авторы рассчитывают на омоложение тканей с помощью стволовых клеток или химическими и другими методами (антиоксиданты, гормональная терапия), которые оказывали бы влияние на молекулярный ремонт клеток организма. Тем не менее, значительный успех к настоящему моменту в решение этой проблемы не достигнут.

Вожным направлением в геронтологии является поиск и использование геропротекторов. В настоящее время известно более 20 веществ, в отношении которых показана способность увеличивать продолжительность жизни животных, и получивших название геропротекторов [1, 3]. Актуальность изучения активности геропротекторных препаратов не теряет своей значимости. Одним из перспективных геропротекторов является аминокислота L-аргинин.

Аргинин является условно незаменимой аминокислотой, которая в нормальных условиях необходима для обеспечения физиологических потребностей, а в условиях болезни ее применение обеспечивает эффективное восстановление нарушенных функций организма [2]. Некоторые эффекты введения аргинина в патологии и физиологии [4]:

- усиление продукции и высвобождения NO, вызванное L-аргинином, вызывает антиоксидантный эффект и способствует улучшению эндотелиальной функции у пациентов с гиперхолестериненмией;

- длительное предварительное введение L-аргинина сопровождается наименьшим истощением антиоксидантной защиты и оказывает выраженное ингибирующее действие на процессы перекисного окисления липидов при охлаждении организма;

- L-аргинин при нейропатическом болевом синдроме оказывает профилактическое и лечебное действие. При адьювантном артрите L-аргинин ослабляет развитие артрита на период введения препарата. В основе действия L-аргинина лежит его двоякое действие в качестве прекурсора NO и киоторфина - эндогенного антиноцицептивного дипептид, и в качестве стимулятора репарации;

- L-аргинин способствует внутриутробному росту плода за счет увеличения продукции NO, улучшающего кровообращение в пупочной артерии;

- терапия L-аргинином способствует активации цикла мочевинообразования, восстановлению кислотно-основного баланса, за счет повышения буферной емкости и щелочного резерва крови, предотвращению гидронефроза и нормализации прироста массы тела.

Многоплановая роль L-аргинина в метаболизме обуславливает широкий спектр его терапевтических эффектов и результативность применения. Однако, исследование использования L-аргинина в качестве геропротектора начато сравнительно недавно и, несмотря на позитивные результаты, не позволяет обоснованно говорить о его использовании в этом качестве, особенно, при патологическом старении.

фенилгидразином.

- изучить влияния аргинина на биохимические и гематологические показатели старых крыс;

- изучить влияния аргинина на биохимические и гематологические показатели старых крыс, получивших подострую интоксикацию фенилгидразином.

Материалы и методы исследования.

Исследование было проведено на 24 белых крысах обоего пола массой 200-220 г, в возрасте 1,5-2 года, содержащихся в виварии на стандартном рационе питания. Все животные были распределены на 4 группы:

1 группа – интактные крысы (контроль),

2 группа – крысы, получавшие инъекции L-аргинина в течение 5 дней,

3 группа – крысы, отравленные солянокислым фенилгидразином,

4 группа – крысы, отравленные солянокислым фенилгидразином и получавшие инъекции L-аргинина в

течение пяти дней.
L-аргинин вводили внутрибрюшинно в дозе 0,5 мг («Вазотон», ЗАО «Алтай витамины», Россия, Алтайский край, г. Бийск) в виде водного раствора ежедневно в течение пяти дней. Выбранная доза была рассчитана согласно рекомендациям по определению равноэффективных доз для животных и человека, исходя из количества лекарственного препарата на поверхность тела, и соответствует терапевтической дозе для человека препарата «Вазотон», представляющего собой аминокислоту L-аргинин (100%).

Введение солянокислого фенилгидразина производилось внутрибрюшинно в дозе 0,5 мг в виде водного раствора однократно, а затем крыс забили на пятый день эксперимента. Фенилгидразин является сильным ядом, вызывающим прямой распад эритроцитов, лейкоцитов и превращение гемоглобина в метгемоглобин и другие пигменты. Гемолитическое действие фенилгидразина обусловлено способностью тормозить активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и снижать уровень восстановленного глутатиона.

У крыс производился забор крови из хвостовой вены в специальные пластиковые пробирки, затем их умершвляли передозировкой эфира (60-80 мг/кг). Плазму получали центрифугированием гепаринизированной крови при 2000 об/мин и 4 С в течение 15 минут.

Исследование гематологических показателей проводилось на гематологическом анализаторе PCE-90Vet (США).

Исследование биохимических показателей проводилось на биохимическом анализаторе Chem Well 2910 (E) (Awareness Technology Inc. США).

Все исследования проводились на базе Свердловского областного клинического психоневрологического госпиталя ветеранов войн.

Анализ и статистическая обработка полученных результатов был осуществлен с помощью специально разработанной выборки, оформленной в компьютерной программе MC Exсel.
Результаты исследования и их обсуждение.

1.Анализ гематологических показателей. Было установленно, что введение аргинина достоверно увеличивало количество клеток белой крови (на 69%). Другие гематологические показатели под воздействием аргинина существенно не изменялись.

На фоне действия фенилгидразина увеличивалось количество лимфоцитов в периферической крови (на 53%), при этом количество гранулоцитов уменьшалось на 73% по сравнению с контролем. Резко угнетался эритропоэз, о чем свидетельствовало снижение количества эритроцитов и гемоглобина, и тромбоцитопоэз. Данные эффекты фенилгидразина обусловленны его цитолитическим действием.

При интоксикации фенилгидразином лечебное введение аргинина приводило к увеличению количества клеток белой крови, в основном за счет количества лимфоцитов (на 111%, p<0,05). Снижение общего количества гранулоцитов было меньше, чем в группе животных, которым вводился только фенилгидразин. Лечебное введение аргинина также способствовало восстановлению количества эритроцитов. Эти данные подтвердились при анализе гематокрита у животных: фенилгидразин уменьшил клеточную массу, а аргинин восстанавливал ее.

Можно предположить, что введение аргинина активировало иммуннную систему, а увеличение количества лимфоцитов способствовало активации репаративных процесссов в кроветворной ткани.

1. Аргинин улучшает гематологическую картину у старых животных и уменьшает цитолитические последствия отравления фенилгидразином.

2. Лечебное введение аргинина снижает хемилюминисценцию сыворотки крови у старых животных с фенилгидразиновой интоксикацией.

3. Аргинин не оказывал существенного влияния на уровень ALT, AST, альбумина сыворотки крови у старых животных.

ЛИТЕРАТУРА

1. Анисимов В.Н., Соловьев М.В. [Текст] Эволюция концепций в геронтологии/ СПб.: Эскулап, 1999.

130 с.

2. Аргинин в медицинской практике[Текст]/ А.И. Журбина, И.Н. Кононов, Ю.М. Степанов, А.И. Филипова//АМН Украины, 2004.

4. Monographia L-arginin [Текст]/ Alternative Medical Rev., 2005. – 147 с..

Выражаем благодарность за помощь в проведении лабораторных исследований доценту кафедры биохимии УГМА Гаврилову И.В.

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ АРГИНИНА НА СОСТОЯНИЕ ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ И БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ СТАРЫХ КРЫС НА ФОНЕ ДЕЙСТВИЯ ФЕНИЛГИДРАЗИНА

Осипова Е.Я., Копылов А.Б., Перепелица Л.М

Научный руководитель: доцент, к.м.н., Попугайло М.В.

Кафедра патологической физиологии ГОУ ВПО УГМА.

В работе приведено изучение статистических данных влияния аргинина на состояние гематологических и биохимических показателей старых крыс на фоне действия фенилгидразина. Исследование основано на результатах эксперимента проводимого на 24 нелинейных белых крысах, разделенных на 4 группы. Анализ гематологического, биохимического и хемилюминесцентного исследования осуществлен с помощью специально разработанной выборки, оформленной в компьютерной программе MC Exсel. Аргинин улучшает гематологическую картину у старых животных и уменьшает цитологические явления в клетках после воздействия на них фенилгидразином. Пределы индивидуального уровня хемилюминесценции довольно широки и это видно при исследовании контрольной группы крыс. Различие индивидуальной чувствительности крыс к аргинину и фенилгидразину способствует различной чувствительности к их взаимодействию. Уровень ALT не изменяется при введении аргинина, фенилгидразина и совместного их введения. При воздействии фенилгидразином уровень альбумина и AST снижается, а при воздействии аргинином – повышается. После интоксикации фенилгидразином при введении аргинина уровень AST повышается.

Osipova E.J., Kopylov A.B., Perepelitsa L.М

The supervisor of studies: the senior lecturer, the candidate of medical sciences Popugaylo M.B.

Chair of pathological physiology of GOU VPO USMA.