Lh system Лютеинизирующий гормон (ЛГ)

3. Принцип метода

1. 
   Тест-система для определения лютеинизирующего гормона Eclectica: специфические реагенты тест-системы Eclectica LH Reagent Kit для выполнения тестирования и проверки калибровки.
   
2. 
   Тест-система для калибровки лютеинизирующего гормона: для стандартизации.
   
3. 
   Тест-система общих реагентов для иммунохимии Eclectica: для реакции общей химии.
   
4. 
   Промывающий раствор для иммунохимии Eclectica: специфический промывающий раствор для иммунохимии.
   
5. 
   Системный промывающий раствор Eclectica для анализатора Eclectica.
   

Определенные количества флуоресцеин-конъюгированных моноклональных антител к ЛГ и моноклональных антител к ЛГ, конъюгированных со щелочной фосфатазой, добавляются к образцу, контролю, или стандарту. Реакционная смесь инкубируется при 37ºС. В процессе инкубации флуоресцеин-конъюгированные моноклональные антитела к ЛГ связываются с определенным сайтом молекулы ЛГ. Моноклональные антитела к ЛГ, конъюгированные со щелочной фосфатазой, связываются со вторым участком на молекуле ЛГ, образуя сэндвич.

В конце инкубационного периода анти-флуоресцеин, связанный с магнитными частицами, добавляется в избытке. Он быстро и специфично связывается с комплексом моноклональных антител с ЛГ и осаждается в магнитном поле. После удаления жидкой фазы и промывки твердой фазы, раствор ферментного субстрата, фенолфталеин-монофосфат, добавляется в инкубационную ячейку, и каждая ячейка инкубируется при 37ºС. После инкубации, ферментная реакция останавливается добавлением стоп-раствора, а интенсивность окраски измеряется фотометрически. Интенсивность окраски прямо пропорциональна, в рамках рабочего диапазона теста, концентрации ЛГ в образце. Концентрация ЛГ в образце пациента или контроле затем определяется методом интерполяции по сохраненной стандартной кривой.

4. Реагенты – подготовка и хранение

Тест-система Eclectica LH Reagent Kit содержит специфические реагенты для выполнения 100 тестов, и контроли для 5 проверок калибровки из каждого флакона. Реагенты хранить при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке.

Информация о номере лота, сроке годности и количестве тестов содержится на параметрической карте, которая входит в состав тест-системы Eclectica LH Reagent Kit. Используйте считыватель параметрических карт для загрузки информации, содержащейся на карте в систему. Для получения дополнительной информации смотрите Руководство пользователя для анализатора Eclectica.

• 
  2 флакона Eclectica LH Реагент Код1702016
  

Реагент готов к применению и один флакон рассчитан на 50 тестов.

Хранить реагент при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке. Защищать от воздействия прямых солнечных лучей.

Вскрытый реагент стабилен в течение:

- 2 месяцев при хранении в закрытом флаконе при 2-8ºС,

- 2 недель при хранении в закрытом флаконе в анализаторе Eclectica с включенным охлаждением.

После использования закройте каждый флакон своей специфической крышкой.

Смотрите раздел 7. Паспорт материала предоставляется по запросу.

• 
  2 флакона Eclectica LH Контроль 1 Код 1702018
  

Хранить контроль при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке. В конце тестирования убрать флакон и хранить его закрытым при 2-8ºС, если контроль не используется в последующие 24 часа или в тот же день.

Вскрытый контроль стабилен в течение:

- 2 месяцев при хранении в закрытом флаконе при 2-8ºС,

- 1 недели при хранении в закрытом флаконе в анализаторе Eclectica с включенным охлаждением.

После использования закройте каждый флакон своей специфической крышкой.

Смотрите раздел 7.

• 
  2 флакона Eclectica LH Контроль 2 Код 1702019
  

Хранить контроль при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке. В конце тестирования убрать флакон и хранить его закрытым при 2-8ºС, если контроль не используется в последующие 24 часа или в тот же день.

Вскрытый контроль стабилен в течение:

- 2 месяцев при хранении в закрытом флаконе при 2-8ºС,

- 1 недели при хранении в закрытом флаконе в анализаторе Eclectica с включенным охлаждением.

После использования закройте каждый флакон своей специфической крышкой.

Смотрите раздел 7.

5. Необходимые реагенты, поставляемые отдельно

5.1 Тест-система для калибровки Eclectica LH Calibration Kit Код 1702017

Тест-система для калибровки Eclectica LH Calibration Kit содержит шесть флаконов, достаточных для построения 5 калибровочных кривых. Калибраторы ЛГ помечены от А до F и содержат приблизительно 0- 1- 3- 10- 50- 200 мМЕ/мл человеческого гипофизарного ЛГ в бычьей сыворотке с азидом натрия (< 0,1% w/w). Каждый флакон содержит 1 мл готового к применению калибратора. Точная концентрация каждого калибратора содержится на параметрической карте, которая входит в состав тест-системы для калибровки Лютеинизирующего гормона. Используйте считыватель параметрических карт для загрузки информации, содержащейся на карте в систему. Для получения дополнительной информации смотрите Руководство пользователя для анализатора Eclectica.

Необходимо, чтобы флаконы достигли комнатной температуры (18-25ºС) и перед применением содержимое флаконов следует осторожно перемешать.

Хранить калибраторы при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке.

В конце тестирования убрать флакон и хранить его закрытым при 2-8ºС, если калибратор не используется в последующие 24 часа или в тот же день.

Вскрытый калибратор стабилен в течение:

- 2 месяцев при хранении в закрытом флаконе при 2-8ºС,

- 1 недели при хранении в закрытом флаконе в анализаторе Eclectica с включенным охлаждением.

После использования закройте каждый флакон своей специфической крышкой.

Смотрите раздел 7.

На анализаторе Eclectica используются 3 общих реагента для всех иммуноанализов.

Каждый флакон содержит достаточный объём для выполнения 200 тестов при использования анализатора в стандартных условиях (2 еженедельных запуска и 10 ежедневных запусков).

Хранить при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке.

Необходимо, чтобы компоненты тест-системы общих реагентов для иммунохимии достигли комнатной температуры (18-25ºС) перед установкой на борт анализатора. Вскрытые общие реагенты стабильны в течение двух недель (при хранении при 2-8ºС или на борту анализатора Eclectica).

Информация о номере лота, сроке годности и количество тестов для каждого общего реагента содержится на параметрической карте, которая входит в состав тест-системы общих реагентов для иммунохимии. Используйте считыватель параметрических карт для загрузки информации, содержащейся на карте в систему. Для получения дополнительной информации смотрите Руководство пользователя для анализатора Eclectica.

• 
  1 флакон Eclectica Разделительный реагент Код 1700004
  

• 
  1 флакон Eclectica Субстрат Код 1700002
  

Вскрытый Реагент стабилен в течение двух недель (при хранении при 2-8ºС или на борту анализатора Eclectica).

Смотрите раздел 7. Информацию о безопасном обращении с реагентом смотрите в паспорте безопасности.

Внимание: реагент относится к классу опасности Xn: R 41 48/22, S 3 26 36/37/39 60.

ния глаз.

здоровья при длительном контакте и проглатывании.

сразу промыть проточной водой и обратиться за медицинской помощью.

перчатки и защитные очки.

следует утилизировать как опасные отходы.

• 
  1 флакон Eclectica Стоп-раствор Код 1700003
  

Внимание: реагент относится к классу опасности Xi: R 36/38, S 23 26 37 60.

Смотрите раздел 7.0. Информацию о безопасном обращении с реагентом смотрите в паспорте безопасности.

Коды риска:

R 36/38 раздражает глаза и кожу.

Коды безопасности:

S 23 не вдыхать аэрозоль.

S 26 в случае попадания в глаза, сразу

промыть проточной водой и обратиться за медицинской помощью.

следует утилизировать как опасные отходы.

5.3 Промывающий раствор для иммунохимии Eclectica Код 1700001Р4

Один флакон содержит 900 мл Трис буфера (> 1%) и консервант.

Раствор готов к применению. Хранить при температуре 2-25ºС до конца срока годности, указанного на этикетке. Вскрытый раствор стабилен в течение двух недель (при хранении при 2-8ºС или на борту анализатора Eclectica).

Смотрите раздел 7. Паспорт безопасности предоставляется по запросу.

Один флакон содержит 1600 мл готового к применению карбонатного буфера и антибактериальный консервант. Хранить при температуре 2-25ºС до срока годности, указанного на этикетке.

После вскрытия раствор стабилен в течение двух недель (при хранении при 2-25ºС или на борту анализатора Eclectica). Смотрите раздел 7.0. Паспорт безопасности предоставляется по запросу.

6. Необходимые материалы и оборудование

6.1 Предоставленные Реагенты для тестирования

Тест-система для определения Eclectica LH Reagent Kit.

Тест-система для калибровки Eclectica LH Calibration Kit.

Тест-система для иммунохимии Eclectica.

Промывающий раствор для иммунохимии Eclectica.

Системный промывающий раствор Eclectica.

Комплект растворов для промывки анализатора Eclectica (код 1700006 – информацию о составе и применении читайте в Руководстве пользователя для анализатора Eclectica).

6.2 Необходимое Оборудование/ принадлежности, поставляемые отдельно

Анализатор иммунохимический Eclectica.

Одноразовые блоки кювет.

Пробирки кат. № 18056 (дополнительную информацию читайте в Руководстве пользователя для анализатора Eclectica).

Для in vitro диагностики.

Только квалифицированный лабораторный персонал должен использовать данный тест и проведение процедуры тестирования должно быть в соответствии со стандартом GLP (правила лабораторной практики).

Запрещается смешивать реагенты из разных лотов.

Все реагенты следует использовать на анализаторах, которые находятся в хорошем рабочем состоянии и тщательно очищены с помощью Eclectica комплекта растворов для промывки (код 1700006).

Дополнительную информацию об обслуживании и инструкциях по применению читайте в Руководстве пользователя для анализатора Eclectica.

1. Не пипетировать реагенты ртом.

Некоторые реагенты системы Eclectica содержат материал животного происхождения, даже если указано, что он получен от здоровых животных, рекомендуется обращаться с реагентами, следуя тем же мерам предосторожности, что и в работе с потенциально инфекционными образцами.

Некоторые реагенты, используемые в системе Eclectica, могут быть получены из пула сывороток крови человека. Каждая порция крови, использованная для создания пула сывороток, была проверена утвержденными методами FDA (Управление по контролю качества продуктов питания и лекарственных средств) на отсутствие сифилиса, поверхностного антигена вируса гепатита B (HBsAG), вируса гепатита C (HCV) и антител против ВИЧ (HIV 1 + 2). Поскольку, никакой тест не может давать полной гарантии отсутствия вируса гепатита B, ВИЧ и другие инфекционных агентов, то указанные реагенты следует рассматривать как потенциально опасные и обращаться с ними, следуя тем же мерам предосторожности, что и при работе с образцами сыворотки или плазмы. Некоторые реагенты, такие как калибраторы и контроли, могут содержать материал тканей человеческого происхождения. В настоящее время, отсутствует стандартный тест на наличие ВИЧ в таком материале. Поэтому рекомендуется и такие реагенты рассматривать как потенциально опасные.

С такими материалами следует обращаться в соответствии с правилами лабораторной практики, как описано в документе CDC (Центр по контролю заболеваемости, Атланта, США): Универсальные меры предосторожности для предотвращения передачи вируса иммунодефицита человека, вируса гепатита B и других передающихся через кровь патогенов в учреждениях здравоохранения «MMWR» 37:377-387, 1999.

Некоторые реагенты относятся к опасным химическим веществам, согласно классификатору. Для безопасной работы рекомендуется внимательно прочитать информацию в Паспорте безопасности.

Не использовать ЭДТА и цитрат натрия в качестве антикоагулянта, поскольку они ингибируют ферментативную реакцию. Помутнение, агрегация и выпадение осадка в любом из Eclectica реагентов указывает на возможное ухудшение их качества. Обратитесь за консультацией к вашему региональному дистрибьютору. Как и во всех анализах, на результаты данного теста могут повлиять факторы, присутствующие в образцах некоторых пациентов.

Как в любом иммуноанализе, на результаты могут повлиять факторы, присутствующие в сыворотке пациента. Хотя информация о реагентах была тщательно изучена для того, чтобы уменьшить влияние гетерофильных антител и неспецифических белковых связываний, возможная недостоверность одного образца не может быть исключена, как для всех «Сэндвич» систем.

Для диагностических целей, результат, полученный при данном тестировании всегда должен использоваться совместно с клинической картиной, анамнезом пациента и другими лабораторными исследованиями. Реагенты различных лотов нельзя смешивать вместе.

Применение реагентов, расходных материалов, и запасных частей, отличающихся от поставляемых уполномоченным дистрибьютором, может привести к неправильным результатам.

Следуйте инструкциям по применению, поскольку любая модификация может повлиять на результат.

Использование реагентов, расходных материалов или запасных частей, поставляемых не официальным дистрибьютором, может привести к получению неправильного результата.

Пациенты, получающие терапию моноклональными антителами (мышиными) для диагностических или терапевтических целей могут иметь антимышиные антитела (НАМА). Присутствие НАМА в образце может дать как ложно положительные (высокие), так и ложно отрицательные (низкие) значения при использовании системы с моноклональными антителами. Образцы, содержащие НАМА, не должны анализироваться на системе Eclectica.

Следующие рекомендации для обработки и хранения образцов крови выпущены Национальным комитетом по клиническим лабораторным стандартам (NCCLS – Doc. H18-A):

- Забор образцов крови проводить с соблюдением стандартных мер предосторожностей при отборе биологических жидкостей.

- В случае образцов сыворотки, обеспечить полную коагуляцию образцов перед центрифугированием:

- Пробирки следует хранить закрытыми в вертикальном положении.

- Не использовать образцы, которые находились при комнатной температуре более 8 часов

- Герметически запечатать и охладить образцы (2-8ºС), если раскапывание не выполнено в течение 8 часов.

- Заморозить образцы при температуре -20ºС или ниже, если тестирование не выполнено в течение 48 часов.

- Замораживать образцы только один раз, после размораживания, их следует тщательно перемешать.

Для осветления липемических образцов рекомендуется применение ультрацентрифуги. Гемолизированные образцы могут указывать на несоответствующую обработку образца перед доставкой его в лабораторию; по этой причине, результаты следует интерпретировать с осторожностью.

Требуемый объём: составляет 0,05 мл образца для каждого определения. Этот объём не включает в себя мертвый объём (неиспользуемый объём в пробирке с образцом) или дополнительный объём, требуемый для повторов или для выполнения других тестов для того же самого образца. Дополнительную информацию по определению минимального требуемого объёма читайте в разделе «Требования к объёму образца» в Руководстве пользователя для анализатора Eclectica.

Перед помещением образца на борт анализатора следует проверить образцы на отсутствие в них фибрина, частиц, и пузырьков воздуха.

Внести 5 мл венозной крови в стеклянную или пластиковую пробирку без добавок. Позволить крови свернуться при комнатной температуре (18-25ºС). Отцентрифугировать, и отделить сывороточную фракцию.

Внести 5 мл венозной крови в стеклянную или пластиковую пробирку, содержащую гепарин в качестве антикоагулянта. Отцентрифугировать, и отделить плазменную фракцию.

Собрать однократную порцию мочи в подходящий контейнер без консерванта.

Предпочтительна первая утренняя порция мочи.

Для осветления мутных образцов рекомендуется центрифугирование или фильтрование (Ватман #1). Отобрать 5 мл образца и сохранить.

Образцы мочи стабильны при хранении при 2-8ºС в течение 3 дней. Более длительное хранение образцов мочи не рекомендуется, даже при –20ºС.

9. Процедура анализа

Руководство пользователя для анализатора Eclectica подробно описывает процедуру подготовки, установки, стандартизации, тестирования и контроля качества. Следует выполнять все стандартные процедуры обслуживания, как описано в Руководстве пользователя для получения оптимальных результатов анализа.

• 
  Тест-система для определения аналита, которая включает также контроли 1 и 2, идентифицируется по номеру лота, специфичного для данного реагента.
  
• 
  Каждый лот тест-систем можно загрузить только с помощью соответствующей параметрической карточки, входящей в состав реагентов.
  
• 
  Нельзя смешивать реагенты разных лотов.
  
• 
  Калибровка метода специфична для конкретного лота реагентов.
  
• 
  Для каждого нового лота реагентов определяется основная калибровочная кривая (референсная кривая), которую получают при выполнении серии тестов на различных анализаторах.
  
• 
  Данные контролей (в единицах OD и концентрации), рассчитанные по референсной кривой, хранятся на параметрической карточке, поставляемой в упаковке тест-системы, и эти данные представляют «целевые» значения.
  
• 
  Данные закодированного лота загружаются в анализатор Eclectica при считывании информации с параметрической карточки.
  
• 
  Данные контролей 1 и 2, в единицах сигнала, полученные экспериментально, сравниваются с соответствующим «ожидаемым сигналом».
  
• 
  Достоверность калибровочной таблицы оценивается в отношении группы параметров качества и, в случае, когда результаты принимаются, таблица будет загружена в память, связанную с лотом реагентов.
  

Каждой лаборатории рекомендуется регулярно использовать материалы контроля качества и установить свои собственные контрольные диапазоны.

Необходимо проводить измерение многоуровневых контролей при каждом тестировании ЛГ. Значения ЛГ, полученные для контрольных материалов, не должны часто выходить за границы контрольных диапазонов, установленных в каждой лаборатории. Если эти контрольные значения регулярно попадают за границы установленных контрольных диапазонов, то следует проверить правильность работы прибора (смотрите раздел «Устранение неисправностей» в Руководстве пользователя для анализатора Eclectica).

11. Расчеты и результаты

Значения образца рассчитываются программой пользователя Eclectica, используя референсную калибровочную кривую и измерение контролей, во время тестирования. Программа анализатора Eclectica подтверждает, что хранящаяся эталонная кривая соответствует специфическим критериям анализа.

В дополнение к имеющейся действительной референсной кривой, измеряемые контроли должны быть в пределах, установленных программой для результатов образцов, чтобы быть распечатанными анализатором Eclectica.

12. Ожидаемые значения

Заявленные ожидаемые результаты по ЛГ были ранее определены с использованием SR1 LH. Результаты были подтверждены применением тест-системы Eclectica LH при анализе 56 образцов.

Основываясь на проведённых исследованиях образцов сыворотки от здоровых взрослых людей, были получены следующие диапазоны значений ЛГ, и они показаны в следующей таблице:

Нормальные значения ЛГ получены по 17 индивидуальным менструальным циклам здоровых женщин.

Эти значения являются только ориентировочными и могут отличаться от других опубликованных значений, как результат различий в методах и в обследованном населении. Каждой лаборатории рекомендуется установить свои собственные контрольные диапазоны.

Значения сывороточного ЛГ в течение менструального цикла показаны на рис. 1.

Рис. 1

Основываясь на исследованиях, проведенных на образцах мочи от здоровых взрослых людей, были получены следующие диапазоны значений ЛГ, и они показаны в следующей таблице.

Нормальные значения мочевого ЛГ получены по 15 индивидуальным менструальным циклам здоровых женщин.

Эти значения являются только ориентировочными и могут отличаться от других опубликованных значений, как результат различий в методах и в обследованном населении. Каждой лаборатории рекомендуется установить свои собственные контрольные диапазоны.

Приведенные выше нормальные значения выражены в мМЕ/мл. Чтобы выразить значения как суточное выделение, следует умножить результат в мМЕ/мл на объём собранной суточной мочи в мл.

Значения мочевого ЛГ во время менструального цикла показаны на рис. 2.

Р
ис. 2

Постепенное повышение уровня ЛГ происходит с возрастом у мужчин и женщин. Более быстрый подъём до непрерывно высоких уровней отмечен у женщин в менопаузе.

Приём Гн-РГ, кломифена или HMG.

Патологические:

Недостаток функции яичников, как в случае преждевременной менопаузы, аменорея как результат недостаточности яичников, удаление одного или обоих яичников (с удалением или без удаления матки), агенезия яичников, например, синдром Тернера, редко, опухоль гипофиза или гипоталамуса.

Недостаток тестикулярной функции как при задержке полового созревания в результате первичной тестикулярной недостаточности, агенезия яичка, анорхия, недостаточность клеток Сертоли (аплазия зародышевой ткани яичка), дисгенезия семенных канальцев (например, синдром Клайнфелтера), орхиэктомия.

12.4 Факторы, связанные с пониженными значениями

Физиологические:

Период детства.

Прием препаратов тестостерона или эстрадиола (например, оральные контрацептивы).

Терапия, вызывающая нарушение регуляции гипоталамо-гипофизарной оси.

Гипофизарная недостаточность, как в случае синдрома Шихана, гипопитуитаризм; подавление функции гипофиза, иногда в результате секреции эстрогена или андрогена опухолями яичников или яичек.

Ановуляторные менструальные циклы.

Вторичная аменорея.

0,5 - 200 мМЕ/мл (ВОЗ 1^st IRP 68/40).

Результаты теста Eclectica LH выражаются в единицах мМЕ/мл.

Коэффициент пересчета: мМЕ/мл = МЕ/л.

Эту альтернативную единицу измерения можно заранее запрограммировать в Eclectica анализаторе. Дополнительную информацию читайте в Руководстве пользователя для анализатора Eclectica.

13.2 Эффект прозоны

При концентрациях ЛГ до 1000 мМЕ/мл эффект прозоны не наблюдался.

13.3 Разбавление

Пять Образцов сыворотки, содержащие концентрации ЛГ в аналитическом диапазоне, были разбавлены в отношении 1:2, 1:4, 1:8 и 1:16 бычьей сывороткой, не содержащей ЛГ, затем проанализированы для определения линейности при разбавлении. Данное исследование выполнено на двух анализаторах с использованием двух лотов реагентов. Полученные результаты показаны в следующей таблице.

Воспроизводимость теста Eclectica LH определена повторяющимся анализом образцов в четырех повторах в течение 20 дней, один анализ в день, всего 20 анализов и 80 повторов, используя два анализатора.

Полученные результаты показаны в следующей таблице.

Значения выражены в мМЕ/мл.

Предел чувствительности теста равен 0,5 мМЕ/мл, и определяется как концентрация ЛГ, эквивалентная средней оптической плотности нулевой пробы плюс два стандартных отклонения, основанных на 20 повторах образца с нулевым аналитом.

Перекрестная реактивность теста ЛГ была оценена измерением различимого ответа теста на разнообразные обладающие потенциальной перекрестной реактивностью аналиты. Полученные результаты показаны в следующей таблице.

Метод Eclectica LH сравнивали с эталонным методом, используя SR1 LH.

Образцы сывороточного ЛГ анализировали двумя методами.

С помощью анализа линейной регрессии получены следующие результаты:

у = 0,83 х + 1,288

r² = 0,944

x = эталонный метод SR1 LH

у = Eclectica LH

n = 56

14. Литература

1. Storring, P.L., Bangham, D.R., Cotes, P.M, Gaines, R.E. and Jeffcoate, S.L.: The International Reference Preparation of Human Pituitary Luteinizing Hormone for Immunoassay. Acta Endocrinologica (1978) 88: 250-259.

2. Pierce, J.G. and Parsons, T.F.: Glycoproteins Hormones: Structure and Function. Ann. Rev. Biochem. (1981) 50: 465-495.

3. Shome, B. and Parlow, A.F.: Human Follicle Stimulating Hormone (FSH): First Proposal for the Amino Acid Sequence of the Alpha Subunit and First Demonstration of its Identity with the Alpha Subunit of Human Luteinizing Hormone. J. Clin. Endocr. Metab. (1974) 39: 199-202.

4. Sairam, M.R. and Choh Hao Li: Human Pituitary Thyrotrophin: Isolation and Chemical Characterisation of its Subunits. Biochem. Biophys. Res. Comm. (1973) 51 (2): 336-342.

5. Daughaday, W.H.: The Adenohypophysis, in “Textbook of Endocrinology”, ed. R.H. Williams, W.B. Saunders Co. (1981) 80-86.

6. Harris, G.W. and Naftolin, F.: The Hypothalamus and Control of Ovulation. Brit. Med. Bull. (1970) 26: 3-9.

7. Knobil, E.: The Neuroendocrine Control of the Menstrual Cycle. Rec. Prog. Horm. Res. (1980) 36: 53-88.

8. Santen, C.J. and Bardin, R.W.: Episodic Luteinizing Hormone Secretion in Man: Pulse Analysis, Clinical Interpretation, Physiological Mechanisms. J. Clin. Invest. (1973) 52: 2617-2628.

9. Backstrom, C.T., McNeilly, A.S., Leask, R.M. and Baird, D.T.: Pulsatile Secretion of LH, FSH, Prolactin, Estradiol and Progesterone During the Human Menstrual Cycle. J. Clin. Endocrinology (1982) 17: 29-42.

10. Reame, N., Sauder, S.E., Kelch, R.P. and Marshall, J.C.: Pulsatile Gonadotrophin Secretion During the Human Menstrual Cycle: Evidence for Altered Frequency of Gonadotrophin-Releasing Hormone Secretion. J. Clin. Endocr. Metab. (1984) 59: 328-337.

11. Besser, G.M., McNeilly, A.S., Anderson, D.C., Marshall, J.C., Harsoulis, P., Hall, R., Ormston, B.J., L Alexander, L. and Collins, W.P.: Hormonal Responses to Synthetic Luteinizing Hormone and Follicle Stimulating Hormone-Releasing Hormone in Man. Brit. Med. J. (1972) 3: 267-271.

12. Judd, S.J.: The Neuroendocrinology of Reproduction in “Clinical Reproductive Endocrinology”, ed. R.P. Shearman, Churchill Livingstone (1985) 7-37.

13. Shaw, R.W., Butt, W.R., London, D.R., and Marshall, J.C.: The Oestrogen Provocation Test: A Method of Assessing the Hypothalamic-Pituitary Axis in Patients with Amenorrhoea. J. Clin. Endocrinology. (1975) 4: 267-276.

14. Hansen, J.W. and Ross, G.T.: A new method simplifying collection of serial specimens for gonadotropin determinations. J. Clin. Endocr. Metab. (1975) 41: 241 - 244.

15. Kinders, R.J., Hass, G.M., Interference in immunoassay by human anti-mouse antibodies. Eur. J. Cancer. 26 (5):647, 1990.