- Ақуыздарды фракциялаудың ең көп таралған әдістерінің бірі (гомогендікті бағалау әдісі сияқты) полиакриламидті гельдегі диск-электрофорез (ағылшын тілінен discontinuous – үзік, перемежающийся) болып табылады. Гель-электрофорездің жоғары рұқсат ету қабілетін атап өткен жөн. Егер ақуыздарды электрофорезде адамның қанын қағазда 6 фракция ашылса, онда электролизде крахмалдық гелде – 10, ал полиакрил-амидтік гелде – 18 түрлі ақуыз фракциясына дейін ашылады.
Ақуызды тазалау әдістері Белокты фракциондау және тазалау - Гельдерде электрофорез кезінде ақуыздарды анықтау үшін оларды мынадай бояғыштардың бірімен өңдейді: бромфенол көк, амидо қара 10В, қышқыл көк 83, кумасси Гауһар Көк R-250 және т.б. бояудың қарқындылығы және тиісінше әрбір ақуыз фракциясының салыстырмалы құрамын денситометрде тікелей сканерлеу арқылы анықтайды. Соңғы жылдары гель концентрациясының градиенті бар ақуыздарды электрофорездеу әдістерін қолдана бастады, бұл рұқсат ету қабілетін едәуір арттырады, әсіресе молекулалық салмағы 50000– 100000 асатын ақуыздарды фракциялау кезінде.
Ақуызды тазалау әдістері Белокты фракциондау және тазалау - Ақуыздарды бөлудің аса перспективалы әдістері (бірқатар физикалық-химиялық қасиеттерді анықтау сияқты) изоэлектрлік фокусирлеу әдісінің – рН градиенті бар қолдаушы ортада (колонкада немесе жұқа қабатта) электрофорез жүргізуге негізделген изотахофорездің әр түрлі нұсқалары болды. Қоспадан жасалған әрбір белоктың колонкасындағы нақты орналасқан жері оның изоэлектрлік нүктесінің мәнімен, яғни осы рН мәні кезінде белок бөлшектерінің жиынтық электр заряды нөлге тең болатын жағдаймен анықталады. Изоэлектрлік фокустау әдісін пайдалану кезінде 3,0-ден 10,0-ге дейінгі диапазонда рН градиентін құру үшін синтетикалық полиаминополикарбон қышқылдарының (амфолиндер) қоспаларын қолданады.
- Соңғы жылдары ақуыздарды фракциялау үшін изоэлектрофокусирлеу және полиакриламидті гельдегі диск-электрофорездің әртүрлі үйлесімдері кеңінен таралды-екі өлшемді электрофорез әдістері, олар жүздеген және мыңдаған ақуыз фракцияларын талдайды.
Достарыңызбен бөлісу: |
