Қазақстан республикасының білім және ғылым министірлігі

2. Горшков А. Н., Мешков В. М., Зарицкая В. А., Тимченко И. В. // Центральная клиническая больница им. Н.А. Семашко МПС РФ, Россия, г. Москва. - 24.09.2009г.;

3. http://www.D-bolezni.ru. Язвенная болезнь (статья № 1);

4. Альтшулер Б.А., Фогель Ф. и др. Язвенная болезнь.- 1989г., 1979г;

5. Lehmann D.F., Medicis J.J., Franklin P.D. Polymorphisms and the pocketbook: the cost effectiveness of cytochromeP450 2C19 genotyping in the eradication of Helicobacter pylori infection associated with duodenal ulcer // J. Clin. Pharmacol. – 2003. – Vol. 43, N 12. – P. 1316–1323;

6. Sapone A., Vaira D. et al. The clinical role of cytochrome p450 genotypes in Helicobacter pylori management // Am. J. Gastroenterol. – 2003. – Vol. 98. – P. 1010–1015;

7. Sjostedt S., Sagar M., Lindberg G. et al. Prolonged and profound acid inhibition is crucial in Helicobacter pylori treatment with a proton pump inhibitor combined with amoxicillin // Scand. J. Gastroenterol. – 1998. – Vol. 33. – P. 39–43;

8. Маев И. В., Говорун В. М., Кучерявый Ю. А., Генерозов Э. В., Лисицина И. А., Буданова Е. А. Генетический полиморфизм интерлейкина у больных хроническим гастритом и язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки, ассоциированными с HELICOBACTER PYLORI. // Клинические перспективы гастроэнтерологии, гепатологии.-2008.-№6.-с.1-9;

9. В.Ф. Приворотский, Н.Е. Луппова. Язвенная болезнь. Этиология. Часть III.- Россия.- 2006г.

10. Абузарова Э.Р. Особенности генотипов Helicobacter pylori и полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) у больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки. //Автореферат. - Казань.-2008г;

Студент(ка) ЕНУ им. Л. Н. Гумилева

Научный руководитель – Акпарова А.Ю.

E-mail: alika_se@mail.ru

Цель работы- изучение региональных особенностей распространения вирусного гепатита С, определение предпосылок разработки антивирусной вакцины.

Факторами, способствующими прогрессированию гепатита С, являются: злоупотребление алкоголем, возраст старше 40 лет, мужской пол, наличие дополнительной хронической инфекции (вирусный гепатит В, ВИЧ). Ослабление иммунной системы сопутствующими заболеваниями, нездоровый образ жизни приводят к хронизации воспалительного процесса.

Возбудителем гепатита С является вирус, содержащий геном в виде 1 одной молекулы РНК, в которой зашифрована структура 9 белков. Эти белки участвуют в проникновении вируса в клетку, создании и сборке вирусных частиц и переключении на себя некоторых функций клетки. Три белка вируса, участвующие в формировании вирусной частицы, называются структурными, остальные 6 белков выполняют разные каталитические функции при воспроизводстве вирусных частиц, но сами в состав этих частиц не входят и потому называются неструктурными.

Рисунок 1 – Структура вируса гепатита С

Генотипы варьируют генетически и делятся на шесть видов, каждый из которых подразделяется на субтипы 1a, 1b и т.д. Генотип HCV обуславливает степень тяжести острого и хронического гепатита HCV [3].

Таблица 1 - Основные генотипы HCV, их распространенность [3].

Самым распространенным субтипом ВГС в России является 1b (более 70% от общего числа случаев). Тип 1b считается наиболее опасным и плохо поддающимся лечению интерфероном. Следующими по частоте обнаружения в России являются подтипы 1а и 3а, значительно реже обнаруживается подтип 2а.

В Казахстане наиболее чаще обнаруживается 1b генотип (у 80% больных ВГС), реже встречается генотипы 3a и 2 [8].

По данным Wang J., et al. 2006, при инфицировании генотипом 1а и 1в наблюдается выраженная виремия и повышение активности трансаминаз, что требует применения более высоких доз и продолжительности лечения интерфероном. В тоже время, при заражении генотипом 4, который преобладает в основном на Среднем Востоке, интерферонотерапия оказывает более эффективное действие [Hagan H., et al. 2006].

Определение наличия заболевания, его стадии, характера течения основывается на методе ИФА - выявлении в крови антител к вирусным белкам [6], с последующим подтверждением положительных результатов анализа методом иммуноблотинга. Иммуноферментный анализ на гепатиты и другие инфекции основан на реакции антиген-антитело, в результате которой в сыворотке крови обнаруживаются либо антитела (с помощью стандартных антигенов), либо антигены (с помощью стандартных антител) микроорганизмов [7].

При определении в сыворотке анти-HCV-core в разведении 1:1000 и выше, вероятность содержания вируса считается высокой и проведение ПЦР не обязательно. Если детектированный показатель сыворотки составляет 1:200, то в дальнейшем необходимо провести типирование на наличие вирусной РНК. Отрицательные результаты ИФА-диагностики ВГС при наличии клинических проявлений заболевания не исключают инфицирование HCV. В этом случае также возникает необходимость проведения РНК типирования. [9]. Отрицательные результаты ПЦР-диагностики, не коррелирующие с обнаружением антител Ig G, Ig M в сыворотке крови могут быть следствием репликации вируса в иммунных, гемопоэтических клетках, гепатоцитах, либо в мононуклеарных лейкоцитах. Выявление анти-HCV-core Ig M, характеризует активную репродукцию вируса и необходимость антивирусной терапии [Crovatto M. et al.,2000; Serafino A., 1997].

Частота регистрации ВГС среди здоровых доноров в различных странах колеблется от 0,5 до 7% [2]. Причиной такого распространения вируса является недостаточная информированность населения о путях заражения инфекцией, характере течения заболевания и его исходах, недостаточный эпидемиологический надзор, а также отсутствие противовирусной вакцины.

В одной из наиболее развитых стран мира – США - количество инфицированных составляет 3,9 млн. человек. Из-за особенностей скрытого течения болезни до 90 процентов больных даже не догадываются про мину замедленного действия в собственном организме. По данным различных авторов, количество НСV-инфицированных людей на земном шаре составляет от 200 млн. до 1 млрд. Ученые Франции рассчитали, что на протяжении следующих 20 лет ежегодная смертность, обусловленная НСV- инфекцией, увеличится на 150-200%. Ожидается, что пик заболеваемости достигнет высокого уровня в 2018 году [2].

По имеющимся данным с 90-х годов в странах СНГ в основном выявляются случаи острого гепатита С (ОГС). [1].

Проведенный анализ показателей заболеваемости острым ВГС за 2003-2008 гг. показал их снижение c 1,0 до 0,4% на 100 тыс. населения, повышение показателей заболеваемости хроническим ВГС с 2,9 до 8,0%.[5]. То есть, характер эпидемиологического процесса гепатита С в целом не однозначен.

Источниками ВГС являются больные с острой и хронической формами инфекции. Исследования, проведенные в Научном центре гигиены и эпидемиологии им. Хамзы Жуматова (г. Алматы), отмечают, что вертикальным путем заражается 10,3 % новорожденных, количество бессимптомных носителей HCV среди детей до 14 лет составляет 14,3%, среди взрослого населения – 3,4%, беременных женщин – 4,1%, наркоманов – 67,4%, больных ИППП (инфекциями, передающимися половым путем) – 7,4%. [5].

Широко распространено лечение заболевания совместным назначением препаратов интерферона и рибавирина. Интерферон подавляет синтез вирусной матричной РНК и синтез белков вирусной оболочки. Рибавирин, схожий с одним из элементов РНК вируса препятствует его размножению. Но даже при таком 6—12 месячном лечении эффективность медикаментозной терапии составляет всего 33—41%, а при последующем рецидиве заболевания — 21—30% [2].

В наиболее тяжелых случаях острого поражения печени, не поддающегося лечению антивирусными препаратами, единственным спасением для пациента оказывается пересадка печени. Ежегодно в Соединенных Штатах производится в среднем от 2 тыс. до 4 тыс. операций по трансплантации печени, что значительно меньше числа людей, ожидающих подходящего для пересадки органа [4].

Основной целью исследований, проводимых в разных странах, является обнаружение стабильного вирусного белка, специфичного для всех генотипов и подвидов НСV, на который бы вырабатывались нейтрализующие антитела.

Ведется разработка вакцины на основе рекомбинантных молекул ДНК, представляющих собой антиген определенного типа вируса, полученный микробиологическим синтезом; создание субстанций, блокирующих вещества, запускающие синтез вируса. Остаются недостаточно изученными вирусы гепатитов, механизмы репликации вирусного генома и активации противовирусного иммунитета, а также отсутствие адекватных систем тестирования является препятствием для создания эффективных препаратов.

Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о неуклонном росте распространенности ВГС во всех странах мира, возрастающем уровне смертности, подтверждают большое медицинское и социальное значение этой патологии. Определяющее значение в распространенности болезни имеют пути передачи инфекции, такие как переливание крови, вертикальный путь от матери к плоду, парентеральное введении наркотиков и др. Несмотря на значительные достижения современной медицины, проблема лечения хронического ВГС остается еще полностью не решенной. Частый переход в хроническую форму, образование гепатокарциномы, дорогостоящее лечение создают предпосылки для создания эффективной противовирусной вакцины.

Литература.

1. Артур Губайдуллин.- Враг внутри.- Здоровье — Аналитика — Gazeta.kz http://wap.gazeta.kz/article/39760/.

2. Ломака Ж.М. Профилактика заражения вирусным гепатитом С в эстетических манипуляциях // Статья.-2008г. - Херсонский государственный университет.-С. 1-2.
3. А. В. ИВАНОВ, А. О. КУЗЯКИН, С. Н. КОЧЕТКОВ.МОЛЕКУЛЯРНАЯ БИОЛОГИЯ ВИРУСА ГЕПАТИТА С // Росс.журнал Успехи биологической химии т.45, с. 37-46.
4. Infection By Hepatitis C Virus Prevented By Novel Antibody. By Michael Cohen, University of Massachusets Medical School: Gisselquist D., Perrin L., Minkin S. Parallel and overlapping HIV and bloodborne hepatitis epidemics in Africa. International Journal of STD & AIDS 2004, v. 15, pp. 145—152.

5. Статья в Интернете: Совершенствование технологии эпидемиологического надзора за гепатитом С, // Научный центр гигиены и эпидемиологии им Хамзы Жуматова, г.Алматы.-info-health.kz [10.03.2010].

6. НЕТЕСОВ С.В. ВИРУСНЫЕ ГЕПАТИТЫ // Статьи Соросовского Образовательного журнала.- 1997, БИОЛОГИЯ.-С.

7.http://hepatit-c.narod.ru/lecenie.htm. Российское сообщество больных гепатитом С.

8. Чернышева А. В., Махамбетов К. О. Клинико-иммунологическая характеристика хронического вирусного гепатита С // Материалы научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные вопросы медицины». - Астана, 2004.-С. 169-170.

9. Сизякина Л. П, Андреева И. И. Справочник по клинической иммунологии.// Ростов-на-Дону.- Феникс. - 2004 г. – С. 107-109.

Научный руководитель: д. м. н. Т.Д. Укбаева

С целью оперативного реагирования на возможность появления новых вариантов вируса гриппа птиц, и определения его генетического разнообразия на территории Республики Казахстан необходимо изучение генетической структуры изолятов гриппа птиц, выделенных на территории Республики Ка­захстан. Отобранные образцы патологического материала должны подвер­гаться комплексному анализу с целью определения возможной генетической мутации выделенных изолятов гриппа птиц. В связи со сложившейся ситуацией, возникает необходимость в создании четкой структуры программы по мониторингу вируса птичьего гриппа и совершенствование методов его диагностики.

1. Выделение РНК из исследуемого материала.

2. Проведения реакции обратной транскрипции (получение кДНК на матрице РНК) и постановка ПЦР (амплификация участка полученной кДНК). Работу проводили на 5 образцов выделенной ранее РНК.

3. Постановка реакции ПЦР – амплификация участка полученной кДНК [5,6].

Таблица 1. Программа для амплификации кДНК вируса гриппа птиц типа А.

Цикл	Температура	Время	Циклы
0	95°С	пауза
1	95°С	5 мин	1
2	95°С	10 сек	42
	63°С	25 сек
	72°С	25 сек
3	72°С	1 мин	1
4	4°С	Хранение

4. Электрофоретический анализ продуктов ПЦР-амплификации.

Учет результатов ПЦР-анализа приводятся по наличию или отсутствию на электрофореграмме специфических полос амплифицированной кДНК.

Длина специфического амплифицированного фрагмента кДНК вируса гриппа А - 365 п.н.

В дорожке, соответствующей положительному контролю амплификации ДНК, должны присутствовать светящаяся полоса. В дорожках, соответствующих отрицательным контролям, специфическая полоса на уровне положительного контроля 365 п.н. должна отсутствовать.

Положительными считаются пробы, которые содержат специфическую полосу 365 п.н. большей или меньшей интенсивности строго на том же уровне, где расположена полоса положительного контрольного образца. Отрицательными считаются образцы, в дорожках которых нет полосы на уровне 365 п.н. Результат электрофоретического анализа на определение ВПГ типа А

1 2 3 4 5 К- К+

Рисунок 1.

Для идентификации субтипов Н5 и Н7 используют образцы кДНК, давшие положительные результаты при скрининговом тестировании на вирусы гриппа А.

Постановка ПЦР

Таблица 2.

Программа амплификации кДНК 5 типа гемагглютинина вируса

гриппа А

Цикл	Температура	Время	Циклы
0	95°С	Пауза
1	95°С	5 мин.	1
2	95°С	10 сек.	42
	58°С	25 сек.
	72°С	25 сек.
3	72°С	1 мин.	1
4	4°С	Хранение

Программа амплификации кДНК 7 типа гемагглютинина вируса

гриппа А

Цикл	Температура	Время	Циклы
0	95°С	Пауза
1	95°С	5 мин.	1
2	95°С	10 сек.	42
	61°С	25 сек.
	72°С	25 сек.
3	72°С	1 мин.	1
4	4°С	Хранение

Учет результатов ПЦР-анализа проводится по наличию или отсутствию на электофореограмме специфических полос амплифицированной кДНК.

Длина специфических фрагментов амплификации кДНК:

5 типа гемагглютинина – 235 п.н.

7 типа гемагглютинина – 360 п.н.
1. В дорожках, соответствующих положительным контролем амплификации кДНК, должны присутствовать светящиеся полосы на уровне указанном в табл. В дорожках, соответствующих отрицательным контролям» полосы на уровнях положительных контролей (235 п.н. и 360 п.н.) должны отсутствовать.

Далее учитывают результаты амплификации исследуемых образцов.

1. 
   Положительными на наличие РНК 5 типа гемагглютинина ВГП А считаются пробы, которые содержат полосу 235 п.н., располагающуюся строго на том же уровне, что и полоса в дорожке К+5 тип
   
2. 
   Положительными на наличие РНК 7 типа гемагглютинина ВГП А считаются пробы, которые содержат полосу 360 п.н., располагающуюся строго на том же уровне, что и полоса в дорожке K+7 тип
   

Результат электрофоретического анализа на определение Н5 ВПГ [7].

Рисунок 2.

Рисунок 3