Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор В. В. Мефодьев Тюмень 2016
жүктеу/скачать 2.68 Mb. Pdf көрінісі
|
| P
P , где Р – общее количество яиц гельминтов в 1 кг или 1 л объекта среды; 1 P количество яиц гельминтов в 0,1 мл осадка обработанной навески пробы Для определения эффективности работы очистных сооружений сточные воды забирали объемом 3, 10, 15 л до поступления и на различных этапах очистки. После добавления коагулянта (сульфата меди) взвесь перемешивали, отстаивали 40-50 мин, надосадочную жидкость сливали, к осадку добавляли раствор 3% 70 соляной кислоты до полного растворения хлопьев коагулянта, центрифугировали 5 мин при 800 об/мин. В осадок вносили воду до объема 200 или 80 мл и вновь центрифугировали. Полученный после центрифугирования осадок обрабатывали по вышеприведенной методике исследования почвы. Проведены экспериментальные исследования по изучению эксцистирования метацеркарий O. felineus, ультраструктуры паразита и наиболее значимых образований с использованием растрового электронного микроскопа СОХЕМ ЕМ 30 компании Радо-Ника. Исследования проводились в лабораториях Тюменского научного центра Сибирского отделения РАН. Проведено 2 серии опытов в двух вариантах эксперимента по эксцистированию. В первом варианте в чашку Петри с фосфатным буферным раствором (РН 7,8–8,0) помещали 50 жизнеспособных метацеркарий O.felineus. Во втором варианте в чашки Петри при температуре 37ºС с изотоническим раствором хлорида натрия (0,9%) или глюкозы (10,0%) помещали 50 жизнеспособных личинок паразита, затем чашки Петри ставили в термостат при температуре 39ºС. Методом сканирующей электронной микроскопии изучали следующие структуры O.felineus: строение головной части паразита, края ротового отверстия, покрова тела, кутикулярных шипиков и пучков мышечного аппарата. Модель описторхоза создавали у сирийских хомяков - самцов массой 98,6± 3,3 г, животные содержались в стандартных условиях вивария. При выполнении экспериментов соблюдались все правила работы с лабораторными животными (Приказ МЗ РФ №755 от 12.08.1977). Экспериментальные животные разделены на II группы: I - контрольная (44 особи), II - модель суперинвазионного описторхоза (192 особи): заражение 50 метацеркариями О. felineus, повторные заражения через 14 сут инвазии 50 личинками паразита. После 3; 6;9; 16; 24; 29;41;60; 90; 120 и 160 сут суперинвазии хомяков забивали под эфирным наркозом. Токсичность марит O.felineus выявляли на анализаторе AT - 05 фирмы «БМК - Инвест», (г. Москва), используя при этом методические указания МУ 1.1.037-95 «Альтернативные методы исследований (экспресс-методы) для токсиколого-гигиенической оценки материалов, изделий и объектов окружающей 71 среды. Биотестирование продукции из полимерных и других материалов», - М., 1995. В качестве тест-объекта использовали сперму крупного рогатого скота, замороженную в парах жидкого азота (t -210ºС) и хранившуюся в сосудах Дьюара. Экстракт из испытуемого образца готовили путем настаивания в дистиллированной воде (модельная среда). Навеску из высушенных на воздухе нативных марит О.felineus массой в 1 г помещали в сухую чистую колбу и добавляли модельной среды в соотношении 1: 10. В другую колбу налили модельную среду и обе колбы оставляли на 12 час при 37 ºС. После окончания экстракции растворы подвергли фильтрации через бумажные фильтры ВФА-ВП- 10. Затем из модельной среды и экстракта готовили изотонические растворы, добавляя в них сухие реактивы глюкозы (4г), цитрата натрия (1г), фильтрат (100 мл). В каждую пробирку с модельной средой и опытным экстрактом из марит О. felineus вносили по 0,1 мл раствора спермы. Полученную смесь экстрактов и спермы из каждой пробирки переносили в капилляры (минимум по 5 на 1 образец) и устанавливали в каретку прибора. Измерения проводили согласно инструкции к прибору. Основные результаты, приведенные в диссертации, получены лично автором. Санитарно-паразитологические исследования воды поверхностных водоемов, почвы проводили совместно со специалистами паразитологических подразделений ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Тюменской области» и его филиалов; эксперименты по изучению паразито-хозяиных отношений при суперинвазионном описторхозе осуществляли совместно с сотрудниками кафедры патологической анатомии и судебной медицины ФГБОУ ВО «Тюменский государственный медицинский университет» МЗ РФ. Анализ данных по распространенности и зараженности первого промежуточного хозяина O. felineus и характеристики элиминационного потенциала гидробионтов водоемов эндемичной территории проводили по фондовым материалам ФБУН «Тюменский научно-исследовательский институт краевой инфекционной патологии» Роспотребнадзора, включенных в совместно разработанные методические рекомендации (Тюмень, 1989). |