"Плюс-минус" ДНҚ секвенирлеу әдісі

"Плюс-минус" ДНҚ секвенирлеу әдісі

Бастапқыда Ф. Сэнгер мен Алан Коулсон ДНҚ секвенирлеудің "плюс-минус" әдісін ойлап тапты ,оны екі негізгі кезеңге бөлуге болады:

1.Полимеразды тізбекті реакция, онда ДНҚ (мысалы, адамның ДНҚ), фермент (ДНҚ полимераза), олигонуклеотидті праймерлер және төрт дезоксинуклеотид қоспасы (dNTPs) (A, T, G және C) қолданылады, дезоксинуклеотидтердің бірі радиоактивті түрде α-фосфат позициясымен белгіленеді (32p).

2.Күшейтілген фрагменттердің қоспасын реакцияға түспеген дезоксинуклеозид трифосфаттардан тазарту (мысалы, бағандарда). Қоспа сегіз тең бөлікке бөлінеді (әртүрлі түтіктерде). "Плюс" жүйесінде дезоксинуклеозид трифосфаттардың төрт түрінің әрқайсысының қатысуымен төрт ПТР реакциясы жүргізіледі; "минус" жүйесінде параллель олардың әрқайсысы болмаған кезде төрт ПТР реакциясы жүргізіледі. Әрі қарай, нәтижелер электрофорездің көмегімен бейнеленеді және ДНҚ тізбегін анықтайды, бұл "плюс"жүйесінде ПТР терминациясы (үзілуі) нақты dNTP-ден кейін, ал "минус"жүйесінде оның алдында жүреді