Днк секвенирлеу


Сэнгерді секвенирлеу технологиясын қолданатын ең танымал секвенаторлар-Thermo Fisher Scientific шығарған құрылғылар: 3730xL, 3730, 3500xl, 3500, 3130xl, 3130, 310



бет3/13
Дата03.01.2022
өлшемі1.76 Mb.
#450552
1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   13
ДНК секвенирлеу Кабенова Игисинова Көкіш

Сэнгерді секвенирлеу технологиясын қолданатын ең танымал секвенаторлар-Thermo Fisher Scientific шығарған құрылғылар: 3730xL, 3730, 3500xl, 3500, 3130xl, 3130, 310.


Электрофорограммада с нуклеотидінің Т-ға өзгеруі (мутация Y әрпімен белгіленген) бақылау үлгілерінің реттілігімен салыстырғанда байқалды. Бұл мутация гетерозиготалы, өйткені екі аллельде де әртүрлі нуклеотидтер болады.

Сэнгер әдісінің схематикалық көрсетілуі

1

4



3

2

Gel electrophoresis



5

ТЕРМИНАТОРЛАР ӘДІСІ

Сэнгер бойынша ДНҚ реттілігі: "Терминаторлар" әдісі»

Бірнеше жылдан кейін Сэнгер әріптестерімен бірге"Терминаторлар" әдісі немесе "шынжырды үзу" әдісі деп аталатын жүйелеудің тағы бір әдісін ұсынды .Бұл әдістің мәні реакция қоспасына әдеттегі нуклеотидтердің аналогтары (дидезоксинуклеозид трифосфаттары) қосылады, олардың синтезделген тізбекке қосылуы оны одан әрі синтездеудің мүмкін еместігіне әкеледі (тоқтату), ал алынған "қоқыс" арқылы сіз реттелген ДНҚ фрагментінің соңғы әрпін орната аласыз (сурет. 5).


"Терминаторлар" әдісі: ДНҚ полимеразасын, олигонуклеотидті праймерлерді және төрт дезоксинуклеотидтердің (dNTPs) (A, T, G және C) қоспасын қолданыңыз, олардың біреуі фосфаттың α-позициясымен (32p) радиоактивті түрде белгіленеді. Төрт реакцияның әрқайсысына бір-бірден 2',3'қосылады — дидезоксинуклеозид трифосфаты (ddATP, ddTTP, ddCTP немесе ddGTP), олар одан әрі реакцияны тоқтатады (матрицадан ДНҚ молекуласының синтезі) - осылайша әр түтікте бірдей нуклеотидпен аяқталатын әртүрлі ұзындықтағы ДНҚ фрагменттерінің жиынтығы пайда болады. Содан кейін алынған фрагменттер электрофорез арқылы бейнеленеді және төрт реакцияның фрагменттерінің ұзындығын DDATP, ddTTP, ddCTP немесе ddGTP-мен салыстыра отырып, ДНҚ тізбегін қалпына келтіреді.


Достарыңызбен бөлісу:
1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   13




©dereksiz.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет