Определение кленбутерола в моче человека методом ГХ-МС-МС: подтверждающий анализ в антидопинговом контроле
- Этот метод включает процедуру предварительной обработки и инструментальный анализ производных, выполненный методом ГХ-МС (3) (ионная ловушка) с ионизацией электронным ударом
- Анализ ГХ-МС (3) позволяет выделить и охарактеризовать конкретные фрагменты из исходной (МС (1)) молекулярной структуры и, в частности, фрагменты, происходящие из ионного кластера-предшественника (m / z = 335-337), характерные для кленбутерол
- Фрагмент продукта MS (2) m / z = 300, в свою очередь, используется в качестве дополнительного фрагмента предшественника, дающего спектр MS (3), специфичный для кленбутерола
Предел чувствительности метода MS (3) ниже 0,2 мкг / л с линейным диапазоном от 0,5 до 5 мкг / л, что соответствует основным требованиям антидопингового анализа в соответствии с рекомендациями Международного олимпийского комитета
Из-за общей аналитической эффективности метод в настоящее время оценивается как протокол подтверждения, которому необходимо следовать для выявления незаконного введения кленбутерола спортсменам, и сравнивается с эталонными методами ГХ-МС и ГХ-МС-МС
Обнаружение кленбутерола на следовых уровнях при допинг-анализе с использованием различных методов ГХ/МС
2 мл мочи
+
- до рН 7,0 добавлением фосфатного буфера (0,2 М, 1,0 мл, Na2HPO4-NaH2PO4, 1: 2, вес: вес);
- β-глюкуронидазу (1000 единиц, 50 мкл)
- и сульфатазу (0,5 единицы, 25 мкл)
инкубируют в течение 3 часов при 55 ° С. После охлаждения до температуры окружающей среды добавляют 0,5 мл буферного раствора, содержащего карбонат калия и бикарбонат калия (рН 9,6, 20%, 1: 1, мас. / мас.).
Жидкость-жидкостная экстракция с МТБЭ, 4 мл
Перемешивают 10 мин, центрифугируют при 1500 об/мин, 5 мин
Органический слой высушивают в токе азота при 55⁰ С и дериватизируют с 50 мкл MSTFA-иодида аммония-дитиоэритритола (1000: 2: 3) с образованием производных N, O-бис-ТМС-кленбутерола и далее ГХ/МС и ГХ/МС/МС
Быстрый и чувствительный 384-микротитровальный лунки формат хемилюминесцентного иммуноферментного анализа на кленбутерол
- Кленбутерол (CLB) -специфичные поликлональные антитела были получены у кроликов с использованием азопроизводного CLB, конъюгированного с альбумином;
- Пероксидазу хрена (HRP) использовали в качестве метки и конъюгировали с тем же производным.
- В разработанном конкурентном методе антитела были иммобилизованы на 384-луночных планшетах для микротитрования черного полистирола;
- объем образца составлял 20 мкл, и активность CLB-меченой хренпероксидазой немедленно измеряли с использованием различных субстратов CL через 10 минут времени инкубации.
- Излучаемый свет регистрировали с использованием чувствительной ПЗС-камеры с задней подсветкой или обычного микропланшетного ридера на основе фотоумножителя.
Достарыңызбен бөлісу: |
