Сравнение разрешенного по времени флюороиммуноанализа и иммуноферментного анализа на кленбутерол
- Флюороиммунологический анализ с временным разрешением (TR-FIA) для прямого определения остатков кленбутерола в моче лошади с использованием высокоспецифичного моноклонального антитела сравнивали с иммуноферментным анализом (IEMA).
- чувствительность обоих методов составила 10 пг; калибровочная кривая была линейной между 10 и 105 пг для TR-FIA и между 10 и 104 пг для IEMA.
Реализация газовой хроматографии в сочетании с одновременно выбранным ионным мониторингом и полной сканирующей масс-спектрометрией в допинговом анализе.
- Комплексный метод скрининга для обнаружения запрещенных веществ при допинг-контроле описан и утвержден.
- Этот метод способен обнаружить более 150 компонентов, упомянутых в списке Всемирного антидопингового агентства, включая анаболические андрогенные стероиды, стимуляторы и все наркотические средства, которые в настоящее время анализируются с использованием различных аналитических методов.
- Аналиты экстрагируют из мочи комбинированной процедурой экстракции, используя свежеперегнанный диэтиловый эфир и трет-бутилметиловый эфир в качестве экстракционных растворителей при рН 9,5 и 14 соответственно
- Перед GC-MS анализом остатки объединяют и дериватизируют, используя смесь N-метил-N-триметилсилилтрифторацетамида, NH (4) I и этантиола
- Масс-спектрометр одновременно работает в режиме полного сканирования (диапазон масс зависит от температурной программы ГХ-печи) и в выбранном режиме контроля ионов
дважды промывают деионизированной водой и один раз этанолом, после чего их сушат в вакууме при комнатной температуре
200 мг волос помещают в стеклянную пробирку, в которую был добавлен 2,5 мл экстракционного раствора
Карбонатный буфер (рН=9) или NaOH (рН=12)
Образцы встряхивают и инкубируют в водяной бане при 100° С в течение 30 мин
затем дают остыть до комнатной температуры
Экстракты очищают центрифугой с ультрафильтрацией 3000 Дальтон (120 мин, 14 000 / г) до биосенсорного анализа.
- Многоразовый чип с покрытием из кленбутерола, был приготовлен путем ковалентной иммобилизации кленбутерола на поверхности сенсорного чипа CM5 с использованием аминосцепления, опосредованного тиофосгеном
- Образцы и калибровочные стандарты в объединенных экстрактах волос смешивают (1 + 1) с антисывороткой, разбавленной до 1/1000, в проточном буфере двойной силы [20 мМ HEPES (рН 7,5) с 1 М NaCl, 6,8 мМ ЭДТА и 0,01% Р20] до анализ
- Вторичное козлиное антикроличье антитело (z421) разбавляют рабочим буфером до 37,5 мкг мл -1
- Сенсорный чип с покрытием из кленбутерола помещают в биосенсор. Рабочий буфер [10 мМ HEPES (рН 8,2) с 0,5 М NaCl, 3,4 мМ ЭДТА и 0,005% Р20] прокачивают по поверхности при непрерывном потоке 30 мкл мин -1 .
- Образец, смешанный с первичным антителом, инъецируют в течение 120 с, а затем через 60 с вводили вторичное антитело через 60 с.
- В конце каждого цикла поверхность регенерировали двумя 30-секундными импульсами регенерационного раствора (10 мМ глицин / HCl pH 1,5 с 20% ДМФА и 100 мМ NaOH соответственно)
Достарыңызбен бөлісу: |
