Химия растительного сырья

Экспериментальная часть

Для количественного определения полярных липидов в хлороформном и хлороформ-этанольном экстрактах балластные соединения удаляли по методике [7]. Количественное определение стеринов, гликолипидов и липидов, содержащих в своем составе первичную аминогруппу, осуществляли согласно методикам [6–8]. Кислотное, йодное число и число омыления определяли по стандартной методике [9].

Жирнокислотный состав липидов устанавливали методом газожидкостной хроматографии (ГЖХ). Жирные кислоты анализировали в виде их метиловых эфиров на хроматографе «Шимадзу–GC-8A» с плазменно-ионизационным детектором с использованием насадочной колонки (2,0 м ×2,5 мм), заполненной с 5% ДЭГА (Р) на Chromaton N-super в режиме программирования температуры. В качестве газа-носителя применяли гелий со скоростью потока 30 мл/мин. Идентификацию кислот проводили сравнением относительных времен удерживания их метиловых эфиров по отношению к стандарту (18920 – LAMP).

Обсуждение результатов

Максимальной экстрагирующей способностью для этой системы обладает петролейный эфир. Им удалось извлечь 22% веществ от сухого остатка водного извлечения чаги, взятого на экстракцию. Содержание экстрактивных веществ в хлороформном экстракте составляет 1,51%, а в хлороформ-этанольном – 8,34%. Низкое содержание экстрактивных веществ в хлороформном и хлороформ-этанольном экстрактах объясняется тем, что при применении для экстракции этих растворителей образуется эмульсионный слой, где липиды находятся в связанном состоянии.

Для установления качественного состава нейтральных и полярных липидов в полученных экстрактах использовали тонкослойную хроматографию (ТСХ).

Как показано на рисунке 1, состав нейтральных липидов во всех объектах исследования одинаков. Применение в качестве проявителя раствора хлорного железа позволило обнаружить по фиолетовой окраске пятен на хроматограмме такие биологически активные липиды, как стерины и их эфиры, ненасыщенные жирные кислоты, витамин К и кофермент Q [6, 10].

Хроматограмма полярных липидов хлороформного и хлороформ-этанольного экстрактов представлена на рисунке 2. Их состав отличается. В хлороформ-этанольном экстракте обнаружено больше веществ этого класса соединений. Для проявления хроматограммы в одном случае применяли 20% раствор сульфата аммония, который является неспецифическим проявителем, позволяющим обнаружить все липидные вещества. В другом случае, хроматограмму проявляли 0,25% раствором нингидрина в бутаноле, а также анилинфталатным реактивом. Специфическое окрашивание пятен позволило подтвердить проведенное отнесение их к фосфатидилэтаноламину и фосфатидилсерину, а также к цереброзидам. Можно предположить, что цереброзиды могут быть представлены фитосфингозидом, дигидросфингозином, или дегидросфингозином [6].

Проведено количественное определение биологически активных липидов, таких как стерины, гликолипиды и липиды, содержащие в своем составе первичную аминогруппу [6–8].

Как видно из данных, приведенных в таблице 1, наибольшее содержание определяемых липидов обнаружено в хлороформ-этанольном экстракте. Это может быть объяснено лучшей экстрактивной способностью этой смеси. Более высокое количество липидов, содержащих аминогруппу, по сравнению с гликолипидами, можно отнести за счет того, что в эту группу веществ входят фосфатидилэтаноламин, фосфатидилсерин и лизолецитин. Указанные соединения содержатся в хлороформ-этанольном экстракте в количестве 0,02% от сухих веществ водного извлечения чаги.

Выраженными биологическими свойствами обладают моно- и полиненасыщенные жирные кислоты. Проведен анализ жирнокислотного состава полученных экстрактов методом ГЖХ. По площадям пиков на хроматограммах определено процентное соотношение высших жирных кислот в объектах исследования. Полученные результаты приведены в таблице 2.

Таблица 1. Содержание липидов в экстрактах, полученных из водного извлечения чаги с помощью органических растворителей

Экстракт	Стерины, %*	Гликолипиды, %*	Липиды, содержащие аминогруппу, %*
Петролейный	0,11	–	–
Хлороформный	0,07	0,01	0,01
Хлороформ-этанольный	0,14	0,01	0,03

* в % от сухих веществ водного извлечения чаги.

Экстракты, полученные при обработке водного извлечения чаги: 1 – петролейным эфиром; 2 – хлороформом; 3 – смесью хлороформ – этанол (2 : 1)

Рис. 1. Хроматограмма нейтральных липидов

Экстракты, полученные при обработке водного извлечения чаги: 1 – хлороформом; 2 – смесью хлороформ – этанол (2 : 1)

Рис. 2. Хроматограмма полярных липидов

Наиболее разнообразен состав жирных кислот петролейного экстракта. В нем обнаружено 12 высших жирных кислот, из них три мононенасыщенные и две полиненасыщенные жирные кислоты. Содержание мононенасыщенных – пальмитиновой, олеиновой и эйкозеновой кислот составляет 58% от суммы обнаруженных жирных кислот.

Хлороформный и хлороформ-этанольный экстракты содержат в основном тридекановую кислоту. Кроме этого, их применение позволило обнаружить в водном извлечении чаги гептадекановую, стеариновую и линоленовую кислоты.

Для петролейного экстракта определено кислотное число – 2,02 мг/г и число омыления – 6,88 мг/г. Используя эти значения и то, что в петролейном экстракте преобладает пальмитиновая кислота, рассчитали [9] процентное содержание свободных жирных кислот – 0,92% от сухого остатка экстракта. Соответственно, содержание высших жирных кислот в свободном или слабосвязанном состоянии составляет 0,2% от сухого остатка водного извлечения чаги. В свободном или слабосвязанном состоянии в водном извлечении чаги содержится 0,12% мононенасыщенных и 0,02% полиненасыщенных жирных кислот. Йодное число для петролейного экстракта составляет 23,78 г/100 г, оно выше, чем йодное число подсолнечного масла – 10–15 г/100 г. Его высокое значение можно объяснить тем, что в экстракте, кроме ненасыщенных жирных кислот, присутствуют стерины (0,5%) и другие сопутствующие липидам вещества, имеющие кратные связи, такие, например, как терпены.

Проведенный анализ позволил установить, что в свободном или слабосвязанном состоянии в водном извлечении чаги находятся биологически активные липиды различных классов.