Химия растительного сырья
жүктеу/скачать 9.11 Mb.
|
- Бұл бет үшін навигация:
- Обсуждение результатов
Экспериментальная частьБыли исследованы 19 образцов чая различных сортов и регионов произрастания (табл.). Каждый опыт повторяли трижды, доверительный интервал вычисляли по стандартной процедуре с использованием коэффициента Стьюдента (доверительная вероятность составляла 0,95). Все исследуемые чаи растирали до порошкообразного состояния, после чего экстрагировали 0,5 г чая, 25 мл бидистиллированной воды, нагретой до 100 °С. Через 5 мин настои фильтровали. В полученных экстрактах определяли содержание полифенолов следующими методами: согласно ГОСТ 19885-74 [9] (метод Левенталя, основанный на окислении таннина чая перманганатом калия с использованием индигокармина в качестве индикатора), методом Дейса [10] (методом гравиметрического определения продуктов взаимодействия с избытком формальдегида) и спектрофотометрически с использованием реактива Фолина-Чикольте [11]. В качестве стандарта в случае спектрофотометрии использовали раствор галловой кислоты в дистиллированной воде. Галловую кислоту (Merck) предварительно очищали перекристаллизацией из воды. Для определения антирадикальной активности экстрактов (АРА) использовали реакцию со стабильным свободным радикалом дифенилпикрилкидразилом (ДФПГ) (Sigma-Aldrich) [12]. Для приготовления рабочих растворов применяли 96% этиловый спирт. Первоначальная концентрация ДФПГ в реакционной смеси составляла 710–5 моль/л. Степень обесцвечивания раствора ДФПГ при добавлении экстрактов определяли спектрофотометрически при 517 нм. Для каждого образца строилась зависимость концентрации непрореагировавшего ДФПГ от объема добавленного экстракта. Из полученных линейных зависимостей определяли объем настоя, необходимый для 50% деградации ДФПГ. Затем антирадикальную активность – как количество вещества ДФПГ, вступающее в реакцию с 1 мл экстракта [13] по формуле: АРА=ν50%(ДФПГ)/Vнастоя, где ν50%(ДФПГ) – количество вещества ДФПГ, составляющее 50% от исходного; Vнастоя – объем настоя, определенный вышеописанным способом. Антиоксидантная активность чайных экстрактов (АОА) была исследована в реакции окисления полиоксиэтиленсорбитанмоноолеата (Твин-80) (Merck) кислородом воздуха [14, 15]. Ранее было показано, что данная система моделирует перекисное окисление липидов плазмы крови [16]. В склянки объемом 200 мл вносили реакционную смесь следующего состава: 2 мл 1% водного раствора Твина-80, 0,2 мл 1·10–3 моль/л раствора сернокислого железа, 0,2 мл 1·10–2 моль/л аскорбиновой кислоты, 0,2 мл раствора испытуемого в качестве антиоксиданта экстракта. В контрольный раствор вместо испытуемого вещества вносили 0,2 мл воды. Смесь тщательно перемешивали, закрывали герметично пробкой и ставили в термостат при 313 К на 48 ч. По прошествии этого времени из реакционной смеси отбирали 2 мл, приливали 1 мл 40% раствора трихлоруксусной кислоты, смесь перемешивали и выдерживали в течение 1 ч. Затем раствор отфильтровывали через бумажный фильтр («синяя лента») и к фильтрату приливали 2 мл 0,25% раствора 2-тиобарбитуровой кислоты. Смесь встряхивали и выдерживали 15 мин при 373К, затем охлаждали и проводили фотоколориметрическое определение концентрации окрашенного в розовый цвет триметинового комплекса продуктов окисления с 2-тиобарбитуровой кислотой при 532 нм в контрольных и опытных образцах. Антиоксидантную активность (АОА) водных экстрактов образцов чая оценивали по интенсивности торможения накопления продуктов перекисного окисления. АОА рассчитывали по формуле:
где Dк, Dоп – оптическая плотность в контрольном и опытном образцах соответственно. Обсуждение результатовПоскольку таннино-катехиновая смесь представляет собой довольно сложную, многокомпонентную систему, указанные три метода позволяли оценить лишь общее содержание фенольных компонентов. Как видно из таблицы, концентрации таннинов, полученные для каждого образца тремя способами, в большинстве случаев совпадают в пределах погрешности. Значительно отличается точность измерения содержания таннинов. Наименее точным оказался весовой метод определения таннинов. К существенным недостаткам данного метода следует отнести также увеличение погрешности метода с уменьшением концентрации таннинов, наличие в растворе низкомолекулярных продуктов, влияющих на результат измерения; кроме того для проведения реакции используются значительные количества токсичного формальдегида. Сравнительно хорошую точность и воспроизводимость показал наиболее часто используемый в чаеперерабатывающей промышленности классический метод Левенталя, заключающийся в титровании экстракта чая перманганатом калия в присутствии индигокармина в качестве индикатора (результаты приведены в табл.). Однако и этот метод имеет ряд недостатков: субъективность определения конца титрования по появлению золотисто-желтой окраски; сильная зависимость результатов от интенсивности перемешивания титруемого раствора и от освещения; зависимость расхода перманганата калия от скорости титрования; неприемлемость применения единого пересчетного коэффициента для различного чайного сырья и готовой продукции (показано, что в зависимости от исследуемых объектов он может составлять от 0,00416 до 0,00735 [17]). В последнее время наиболее широкое применение находит спектрофотометрическое определение соединений фенольного ряда [18]. Метод основан на окислительно-восстановительной реакции, в ходе которой восстанавливается фосфорно-молибденовая кислота. Интенсивность появляющейся синей окраски зависит от концентрации восстановителя. На практике чаще всего используют смесь фосфорномолибденовой и фосфорновольфрамовой кислот, называемую реактивом Фолина-Чикольте. Известно, что с реактивом Фолина-Чикольте кроме компонентов таннино-катехиновой смеси могут реагировать присутствующие в экстракте восстанавливающие сахара, аскорбиновая кислота, белки и аминокислоты (цистеин и тирозин) [19]. Однако в большинстве случаев для этого требуются дополнительные условия или реагенты (так, аскорбиновая кислота и восстанавливающие сахара способны реагировать с фосфорномолибденовой кислотой только при нагревании). Кроме того, содержание фенольных соединений в настое значительно больше, чем других компонентов, способных в указанных условиях реагировать с реактивом Фолина. Поэтому данный метод позволяет получать более достоверные результаты. Как видно из таблицы, данные, полученные спектрофотометрически (С (GAE), %), характеризуются наименьшей погрешностью. Итак, из рассмотренных трех альтернативных методик определения содержания фенольных соединений в образцах чая наиболее чувствительной и специфичной именно к фенольным компонентам настоя является спектрофотометрия. Поэтому в дальнейшем для анализа данных были использованы значения концентрации таннинов, определенные спектрофотометрически. Для оценки антирадикальной активности чайных экстрактов использовалась реакция с ДФПГ. Данная методика исследования применяется для оценки антирадикальной активности как растительного сырья [13], так и экстрактов лекарственных растений. Можно отметить, что все исследованные сорта чая проявляют высокую антирадикальную активность (табл.). Наибольшей АРА среди зеленых сортов чая обладает образец 7 (марка Золотой Дракон, страна произрастания Китай, фирма производитель «Мономах»), среди черных сортов образец 10 (Дарджелинг, Индия «Wittard of Chelsea»). Между содержанием таннинов (определенным в реакции с реактивом Фолина-Чикольте) и АРА для исследованных образцов наблюдается удовлетворительная линейная корреляция (коэффициент корреляции r = 0,755, критерий значимости Р=0,001). Анализируя полученные данные, можно отметить, что исследованные зеленые сорта чая более богаты фенольными соединениями (среднее содержание полифенолов в экстрактах зеленых сортов чая составляет 0,288 ± 0,004%, в экстрактах черных сортов чая – 0,18±0,01%), что обеспечивает их большую АРА (среднее значение АРА для экстрактов зеленых сортов чая составляет 1,67±0,32, для экстрактов черных сортов чая – 1,19±0,18). Однако, как оказалось, некоторые сорта черного чая (например упомянутый выше образец 10) также богаты полифенолами и проявляют значительную АРА, сравнимую с зелеными сортами. Следует отметить, что методы определения общего содержания полифенолов в экстрактах чая давно разработаны и повсеместно используются для оценки качества сырья в пищевой промышленности. И поскольку антирадикальная активность определяется содержанием полифенолов, это существенно облегчает выбор образцов чая с наибольшей антирадикальной активностью для пищевой и фармакологической промышленности. В ходе изучения антиоксидантной активности в реакции окисления Твина-80 показано, что все исследованные сорта чая проявляют ингибирующее действие при окислении твина-80) (табл.). АОА исследованных экстрактов варьируется в пределах от 19% (образец 9) до 70% (образец 19). Достоверной корреляции между содержанием таннинов и АОА для исследованных образцов не наблюдается. Не обнаружено для исследованных образцов также корреляции между АРА и АОА. Отметим, что для исследованных экстрактов не выявлено также достоверных отличий АОА зеленых и черных сортов чая. Так, средняя АОА экстрактов зеленых сортов чая составляет 42±7%, черных сортов чая – 43±8%. Отдельно отметим, что нами не установлено зависимости между антиоксидантной и антирадикальной активностью и ареалом произрастания чая. Большее влияние на эти величины имеет сортность чая, тип его ферментации, особенности химического строения таннино-катехиновой смеси.
Общее содержание полифенолов и антирадикальная активность водных экстрактов различных сортов чая (*тип ферментации: ж – желтый, з – зеленый, к – красный, ч – черный)
жүктеу/скачать 9.11 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
,
