Определение содержания абсцизовой и индолилуксусной кислот методом тфифа фиксация материала
жүктеу/скачать 92.82 Kb.
|
- Бұл бет үшін навигация:
- 6. Получение диазометана
- 7. Метилирование образцов
| 5. Очистка диэтилового эфира
К 1 л эфира добавить 100 мл 20%-го метабисульфита натрия или калия. Встряхивать в делительной воронке, затем дать отстояться до разделения фаз. Находящийся внизу метабисульфит отбросить. Прилить к эфиру 100 мл 20%-го NaOН или КОН и процедуру повторить. После удаления щелочи эфир встряхивать с водой, повторив процедуру 4—5 раз. Эфир поместить в склянку с притертой пробкой и подкислить (10 мл 2%-й HCl на 1 л эфира) 6. Получение диазометана В коническую колбу на 50—100 мл налить охлажденный 40%-й раствор КОН и диэтиловый эфир, 2/3 от объема щелочи (например, если щелочи 30 мл, то эфира взять 20 мл). Быстро перемешать на магнитной мешалке и осторожно на кончике шпателя добавить охлажденную нитрозометилмочевину до появления ярко-желтой окраски эфирной фракции. Содержимое колбы перенести в делительную воронку. После разделения фаз нижний слой, содержащий КОН, слить и загасить добавлением 50%-й уксусной или другой кислоты до его осветления. Оставить на ночь под тягой для удаления остатков эфира и слить в раковину. Верхний слой в делительной воронке — эфир, содержащий диазометан и имеющий ярко-желтый цвет, — сразу использовать для метилирования стандартного гормона и эфирных сухих экстрактов опытных образцов, которые метилируются сразу после их получения. 7. Метилирование образцов В «пальчиковые» пробирки, на дне которых находятся сухие эфирные экстракты опытных образцов, прилить по 1 мл эфира, содержащего диазометан. Осторожно встряхивать пробирки в течение одной минуты, затем выпарить эфир под током холодного воздуха под тягой. В результате сухой остаток на дне пробирки содержит метилированные ИУК и АБК. Метилированные образцы можно хранить в морозильной камере до проведения ТФИФА. Для метилирования стандартного гормона навеску 1 мг перенести в мерную «пальчиковую» пробирку. Прилить 1 мл эфира, содержащего диазометан, и встряхивать. После выпаривания эфира навеску растворить, как указано выше (см. п. 4.5). жүктеу/скачать 92.82 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|