ЗАНЯТИЕ № 5
ПРИГОТОВЛЕНИЕ ЖИВЫХ И ФИКСИРОВАННЫХ ПРЕПАРАТОВ МИКРООРГАНИЗМОВ И ЗНАКОМСТВО С ИХ МОРФОЛОГИЕЙ
Цель: Изучить методы и приемы приготовления микропрепаратов при исследовании микроорганизмов и познакомится с их морфологией.
Задачи:
Изучить особенности морфологии бактериальных клеток.
Приготовить прижизненный и фиксированный микропрепараты микроорганизмов.
Материалы и оборудование. Предметные стекла, бактериологическая петля, спиртовка, фильтровальная бумага, кристаллизатор с мостиком для препаратов, промывалка с водой, водные растворы красителей – фуксина, метиленового синего, генцианвиолета (далее – оборудование для приготовления микропрепаратов); иммерсионное масло, микроскоп; мясная вода, дрожжи, культуры сенной и картофельной палочки.
Ход работы
Задание № 1. Провести прижизненное изучение бактериальных клеток следующими методами, сделать рисунки:
Метод раздавленной капли. На предметное стекло микробиологической петлей наносят каплю одной из жидкостей. Покровное стекло ставят на ребро у края капли и постепенно опускают на нее.
Метод висячей капли. По центру покровного стекла наносят бактериологической петлей небольшую каплю исследуемой жидкости и опрокидывают его над углублением специального предметного стекла.
Препарат «отпечаток». Из агаризованной среды, на которой микроорганизмы растут сплошным газоном или в виде отдельных колоний, вырезают небольшой кубик и переносят его на предметное стекло так, что поверхность с микроорганизмами была обращена вверх. Затем к газону или колонии прикладывают чистое покровное стекло, слегка надавливают на него петлей или пинцетом и тотчас же снимают, стараясь не сдвинуть. Полученный препарат помещают отпечатком вниз в каплю воды или метиленового синего (1:40) на предметное стекло.
Задание № 2. Приготовить фиксированный препарат Вас. subtilis, Вас. subtilis var mesentericus, St. lactis, S. cerevisiae, E.coli (рис. № 1, 2, 3, 4 приложения), сделать рисунки.
Нанесение. Предметное стекло обсушивают на пламени спиртовки. Бактериологической петлей, простерилизованной на пламени горелки, по центру предметного стекла наносят мазок исследуемого материала. Если культура микроорганизма выращена на плотной питательной среде, предварительно на стекло наносят каплю воды, в нее бактериологической петлей вносят небольшое количество материала и делают мазок.
Высушивание и фиксация. Препарат высушивают на воздухе, а далее фиксируют. Обычные мазки микроорганизмов фиксируют термически, проводя стекло 2—3 раза через пламя горелки мазком вверх. Фиксация мазка приводит к гибели микроорганизмов, плотному прилипанию их к поверхности стекла и более легкой восприимчивости микробов к красителю.
Окраска. Заливают поверхность раствором любого красителя на 2-3 мин (метиленовая синь, генцианвиолет, фуксин). Различают простое и дифференциальное окрашивание микроорганизмов. В первом случае прокрашивается вся клетка, так что становятся хорошо видны ее форма и размеры. Дифференциальное окрашивание выявляет только определенные структуры клетки и запасные вещества.
Промывка. Затем краситель с мазка смывают водой из промывалки, нижнюю сторону препарата вытирают полоской фильтровальной бумаги, верхнюю осторожно обсушивают и микроскопируют.
Достарыңызбен бөлісу: |
