Учебно-методическое пособие к лабораторным занятиям Красноярск сфу 2011 ббк 28. 072 М 545

1. 
   Выбрать образцы ДНК и подобрать к ним подходящие пары праймеров с помощью компьютерных программ выбирающие эти пары автоматически.
   
2. 
   Подобрать программу амплификатора для получения ампликонов, характерных для данных видов ДНК.
   
3. 
   Для каждого образца приготовить 0,2 мл пробирку для центрифугирования, подписать и поставить на подставку.
   
4. 
   Исследуемую ДНК разморозить, перемешать и центрифугировать при 13000 об/мин 1 минуту.
   
5. 
   Поместить в ПЦР пробирки 0,2 мл по 2 мкл исследуемой ДНК.
   

6. 
   Рассчитать и приготовить реакционную смесь для каждой пары праймеров по схеме, приведенной в таблице:
   

n – количество образцов плюс один на каждые 10 образцов.

7. 
   В пробирки 1,5 мл поместить все 6 компонентов (в каждую помещается своя пара праймеров).
   
8. 
   Реакционную смесь перемешать и центрифугировать при 13000 об/мин 10 секунд (Taq полимеразу разморозить и добавить в последнюю очередь).
   
9. 
   Поместить реакционную смесь на лед.
   
10. 
    В каждую ПЦР пробирку с ДНК 0,2 мл добавить по 23 мкл реакционной смеси, перемешать и центрифугировать при 13000 об/мин 30 секунд.
    
11. 
    Поместить ПЦР пробирки 0,2 мл в амплификатор и включить выбранную программу амплификации.
    
12. 
    Приготовить 2 %-ный гель агарозы.
    
13. 
    После завершения программы амплификации в пробирки с амплификатом добавить по 2 мкл концентрированного буфера для нанесения, перемешать.
    
14. 
    Полученные пробы нанести в карманы агарозного геля. В крайние карманы поместить ДНК-маркер (1 мкг ДНК).
    
15. 
    Подвергнуть пробы и маркерные ДНК электрофорезу в 2 %-ном агарозном геле.
    
16. 
    По окончанию разделения прокрасить и отмыть гель.
    
17. 
    Рассмотреть гель в проходящем ультрафиолетовом свете; зафиксировать полученное изображение и оформить результаты, используя гель-документирующую систему.
    
18. 
    Сравнить электрофореграммы, полученные для продуктов ПЦР одинаковых образцов ДНК при разных парах праймеров, сделать выводы.
    

1. 
   Что такое ПЦР? Суть метода.
   
2. 
   Каков алгоритм проведения ПЦР.
   
3. 
   Участки какой длины можно амплифицировать, используя ПЦР?
   
4. 
   Перечислите компоненты реакции ПЦР.
   
5. 
   Что называется праймером ПЦР?
   
6. 
   Что называется амплификатором?
   
7. 
   С помощью чего можно сделать вывод об успешности проведения ПЦР?
   
8. 
   Что называется ампликонами?
   
9. 
   Сколько циклов обычно выполняется при проведении ПЦР?
   
10. 
    Из каких стадий состоит цикл ПЦР?
    
11. 
    В каких сферах деятельности используется ПЦР?
    
12. 
    В чём состоят достоинства метода ПЦР?
    
13. 
    Как проще сделать правильный выбор последовательности праймеров
    
14. 
    Как готовится реакционная смесь для каждой пары прймеров?
    
15. 
    Какие операции нужно совершить после проведения ПЦР в амплификаторе?
    
16. 
    Какую информацию можно получить при сравнении электрофореграмм амплификатов, полученных при использовании одной и той же пары праймеров для ДНК разных бактерий?
    

1. 
   Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. 3-е изд., Москва : Медицина, 2007. (30 экз. в библ. СФУ)
   
2. 
   Ельяшевич М.А. Атомная спектроскопия. М.: Либроком, 2009. (15 экз. в библ. СФУ)
   
3. 
   Ельяшевич М.А. Молекулярная спектроскопия. М.: Либроком, 2009. (15 экз. в библ. СФУ)
   
4. 
   Северин Е.С., Николаев А.Я. Биохимия : краткий курс с упражнениями и задачами. 3-е изд., Москва : ГЭОТАР-МЕД, 2005. (15 экз. в библ. СФУ)
   
5. 
   Жимулев, И. Ф. Общая и молекулярная генетика : учеб. пособие / И. Ф. Жимулев. – Новосибирск, 2005. – 479 с. (30 экз. в библ. СФУ)
   
6. 
   Коничев, А. С. Молекулярная биология: учеб. / А. С. Коничев,Г. А. Севастьянова. – М. : Академия, 2005.– 397 с. (70 экз. в библ. СФУ)
   
7. 
   Николаев, А. Я. Биологическая химия : учеб. / А. Я. Николаев. – 3-е изд., перераб. и доп. – М., 2007. – 568 с. (3 экз. в библ. СФУ)
   
8. 
   Вавилова Т.П.,Евстафьева О.Л.,Островская И.Г. Практикум по биохимии. М.: Веди. 2010.
   

1. 
   Запруднова Е.А. Практикум по биохимии / Е. А. Запруднова, А. Г. Гладилкина ; Владим. гос. ун-т. – Владимир: Изд-во Владим. гос. ун-та, 2011. – 56 с.
   
2. 
   Ченцов, Ю. С.Введение в клеточную биологию : учеб. для вузов / Ю. С. Ченцов. – 4-е изд., перераб. и доп. – М. : Академкнига, 2005. – 495 с.
   
3. 
   Кларк, Д. Молекулярная биология / Д. Кларк, Л. Рассел. – М., 2004. – 472 с.
   
4. 
   Клиническая биохимия / под ред. В. А. Ткачука. – М. : ГЭОТАР-МЕД, 2004. – 512 с.
   
5. 
   Мюльберг, А. А. Фолдинг белка : учеб. пособие / А. А. Мюльберг. – СПб. : Изд-во С.-Петерб. ун-та, 2004. – 156 с.
   

6. 
   Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. М.: МЦНМО, 2002.
   
7. 
   Гекселер К., Экштайн Э. Аналитические и препаративные лабораторные методы. М.: Химия, 1994
   
8. 
   Эллиот, В. Биохимия и молекулярная биология / В. Эллиот, Д. Эллиот ; под ред. А. И Арчакова, М. П. Кирпичникова, А. Е. Медведева, В. П. Скулачева. – М., 2002. – 446 с.
   
9. 
   Elliott. – Oxford : University Press, 2002. – 586 р.
   
10. 
    Кольман, Я. Наглядная биохимия / Я. Кольман, К.-Г. Рем. – М. Мир, 2000. – 469 с.
    
11. 
    Дарбре А. Практическая химия белка. М.: Мир, 1989.
    
12. 
    Практикум по биохимии. Под редакцией С.Е.Северина и Г.А.Соловьёвой. М.: Издательство МГУ, 1989.
    
13. 
    Аффинная хроматография: Методы. Под ред. П.Дин, У.Джонсона, Ф.Мидл. М.: Мир, 1988.
    
14. 
    Орехович В.Н. Современные методы в биохимии. М.: Мир, 1987.
    

Учебное издание

Составитель: Гусейнов Олег Аладдинович

Методы биохимических исследований
Подготовлено к публикации редакционно-издательским отделом БИК

Подписано в печать 27 октября 2011 г. Формат 60х84/16.

Бумага офсетная. Печать плоская.

Усл. печ. л. (3).

Тираж 50 экз. Заказ 6531

Редакционно-издательский отдел

Библиотечно-издательского комплекса

Сибирского федерального университета

660041, г. Красноярск, пр. Свободный, 79

Тел/факс (391) 206-21-49. E-mail rio@sfu-kras.ru

Отпечатано Полиграфическим центром

Библиотечно-издательского комплекса

Сибирского федерального университета