18
[15:01, 23.02.2020] Зубадылда Айсұлу: Бактериологиялық әдістің мақсаты зерттелетін материалдан ауру
қоздырғышының таза өсіндісін бөлуде, таза өсіндінің жиналуы және осы өсіндіні морфологиялық, тинкториалдық,
культуралдық, биохимиялық, антигендік қасиеттерінің жиынтығы бойынша сәйкестендіру, патогендігі, уыттылығы
факторларының болуы және оның микробқа қарсы препараттар мен бактериофагтарға сезімталдығын анықтау.
Бактериологиялық зерттеу әдісі:
1. зерттелетін материалды қоректік ортаға себу
2. таза мәдениет бөлу
3. микроорганизмдерді сәйкестендіру (түрге тиістілігін анықтау).
Аэробты және анаэробты бактериялардың таза дақылдарын бөлу және сәйкестендіру мынадай зерттеулер жүргізуді
көздейді:
I кезең (материалмен жұмыс)
Мақсаты: оқшауланған колонияларды алу
1. Алдын ала микроскопия микрофлорасы туралы болжамды түсінік береді
2. Материалды зерттеуге дайындау
3. Оқшауланған колониялар алу үшін тығыз қоректік ортаға себу
4. Оңтайлы температурада Инкубация, көбінесе 37°С, 18-24 сағат бойы
II кезең
Мақсаты: таза мәдениет алу
1. Колонияларды өтетін және шағылысқан жарықта макроскопиялық зерттеу (шаманың, форманың, түстің,
мөлдірліктің, консистенцияның, құрылымның, контурдың, колониялардың бетінің сипаттамасы).
2. Оқшауланған колонияларды микроскопиялық зерттеу
3. Аэротолерантизмге сынама қою (зерттелетін материалда қатаң анаэробтардың болуын растау үшін).
4. Белгілі бір түрге, таза дақылдың жиналу ортасына немесе элективті ортаға тән колонияларды себу және оңтайлы
жағдайларда инкубациялау.
III кезең
Мақсаты: бөлінген таза дақылдарды сәйкестендіру
1. Биологиялық қасиеттер кешені бойынша бөлінген дақылдарды сәйкестендіру үшін:
морфологиясы және тинкториалдық қасиеттері
дақылдық қасиеттері (қоректік ортадағы өсу сипаты)
биохимиялық қасиеттері (микроорганизмдердің ферментативті белсенділігі)
серологиялық қасиеттері)
вирусты қасиеттері (өнімге
Бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний.
Бактериологический метод заключается в выделении чистой культуры возбудителя (популяции, содержащей бактерии
одного вида) и идентификации этого возбудителя является основным методом бактериологического исследования
Изучение свойств микроорганизмов в бактериологической лаборатории с целью установления принадлежности к той
или иной систематической группе (виду, роду) и называется их идентификация.
В целом бактериологический метод исследования представляет собой многоэтапное бактериологическое
исследование, которое длится 18— 24 часов.
19
При бактериологическом методе в анаэростат помещают посевы анаэробов. Из аэростата удаляют воздух и заменяют
его газовой смесью, которая не содержит кислород.
Основой бактериологического метода является выделение чистой культуры возбудителя, которое происходит на
первом этапе исследования. Для выделения чистой культуры возбудителя делают посев взятого материала. Посев
делается, как правило, на плотные питательные среды, которые выбирают исходя из свойств предполагаемого
возбудителя.
При бактериологическом методе применяют по возможности среды, на которых растет только конкретный вид
бактерий — элективные среды.
При бактериологическом методе посев материала на питательные среды производят либо стеклянным или
металлическим шпателем, либо бактериальной петлей таким образом, чтобы находящиеся в исследуемом материале
бактерии рассеять по поверхности питательной среды. В результате такого рассеивания каждая бактериальная клетка
попадает на свой участок среды.
В том случае, если в результате бактериологического метода исследования предполагается в исследуемом материале
содержание малого количества возбудителя, посев производят на жидкую питательную среду для его накопления, так
называемую среду обогащения, которая оптимальна для данного микроорганизма. Далее осуществляют пересев из
жидкой питательной среды на плотные среды, разлитые в чашках Петри. Засеянную возбудителем среду помещают в
термостат обычно при определенной температуре, что важно для бактериологического метода.
На втором этапе бактериологического метода исследования проводят изучение колоний бактерий, выросших на
плотной питательной среде и происходящих от одной бактериальной клетки. (колония и является чистой культурой
возбудителя). Производят микроскопическое и макроскопическое исследование колоний в отраженном и проходящем
свете: невооруженным глазом, под малым увеличением микроскопа, с помощью лупы.
Отмечают культуральные свойства колоний: их форму, величину, цвет, характер краев и поверхности, структуру,
консистенцию. Далее для приготовления мазков используют часть каждой из намеченных колоний. Окрашивают мазки
по Граму, микроскопируют, определяя тинкториальные (отношение к окраске) и морфологические свойства
выделенной культуры и проверяя одновременно ее чистоту.
Оставшуюся часть колонии пересевают в пробирки с оптимальной для данного вида средой, например, скошенным
агаром, с целью накопления чистой культуры для более полного ее изучения. Пробирки перемещают на 18–24 часа в
термостат. На втором этапе, кроме перечисленных исследований, нередко подсчитывают количество выросших
колоний.
Для того чтобы провести такое исследование готовят последовательные разведения взятого исследуемого материала,
из которых на чашки с питательной средой производят высев, подсчитывают количество выросших колоний, умножают
на разведение, из чего определяют содержание микроорганизмов в материале.
Идентификация выделенной чистой культуры возбудителя и определение для этой культуры чувствительности к
антибиотикам и другим химиотерапевтическим препаратам — третий этап бактериологичестого метода.
Идентификацию выделенной бактериальной культуры производят по тинкториальным, морфологическим,
биохимическим, культуральным, токсигенным, антигенным свойствам.
Первым делом берут мазок из культуры, выросшей на скошенном агаре, исследуют морфологию бактерий и проверяют
чистоту культуры выросших бактерий. Далее осуществляют посев выделенной чистой культуры бактерий на среды
Гисса. Желательно провести посев и на другие среды для определения биохимических свойств.
С помощью реакции нейтрализации токсина антитоксином in vivo или in vitro определяют токсинообразование
микробов. В ряде случаев изучают и другие факторы вирулентности. Вышеперечисленные исследования, которые
проводятся в бактериологической лаборатории, позволяют определить род или вид возбудителя.
Метод бумажных дисков базируется на выявлении зоны подавления размножения бактерий вокруг дисков, которые
пропитаны антибиотиками. В случае применения метода серийных разведений химический препарат — антибиотик с
жидкой питательной средой разводят в пробирках, после чего засеивают в пробирки одинаковое количество бактерий.
По отсутствию или наличию роста бактерий проводят учет результатов. В результате бактериологического метода
исследования для определения идентичности штаммов, полученная антибиотикограмма может служить и
эпидемиологическим целям.
Могут проводиться повторные исследования при выявлении бактерионосительства т. к. можно не обнаружить
возбудителя в одной порции материала
Достарыңызбен бөлісу: |