Инструкция по применению. Комплект vk 48 480 тестов



Дата16.07.2016
өлшемі67.5 Kb.
түріИнструкция
МЮРЕКС АНТИ-HCV

Тест-система иммуноферментная для определения антител к вирусу гепатита С в сыворотке и плазме крови человека

Инструкция по применению.


Комплект VK 48 – 480 тестов (Комплект VK 47 – 96 тестов)


СОДЕРЖАНИЕ НАБОРА

1. Планшет с сорбированными очищенными антигенами HCV, разборный




5 шт.

2. Буфер для разведения образцов

100,0 мл

1 фл.

3. Отрицательный контроль (К-)

0,8 мл

1 фл.

4. Анти-HCV положительный контроль (К+)

0,6 мл

1 фл.

5. Буфер для разведения конъюгата

20,0 мл

3 фл.

6. Конъюгат (меченные пероксидазой хрена мышиные моноклональные антитела против IgG человека, лиофилизированные)

2,0 мл

3 фл.

7. Буфер для разведения субстрата

35,0 мл

1 фл.

8. Концентрат субстрата (ТМБ)

35,0 мл

1 фл.

9. Отмывающий буфер, 20-кратный концентрат

125,0 мл

2 фл.

10. Инструкция




1 шт.

Набор рассчитан на проведение 480 анализов, включая контрольные образцы. Комплектация набора позволяет провести 60 независимых исследований. В комплект входят все необходимые реактивы, за исключением стоп-реагента.

Сыворотка крови человека, содержащая антитела к вирусу гепатита С (К+) и нормальная сыворотка крови человека (К-) протестированы на отсутствие HBs Ag, антител к вирусам иммунодефицита человека 1 и 2 типов и подвергнуты инактивации.

Набор Мюрекс анти-HCV используется для определения антител к вирусу гепатита С (HCV) в сыворотке или плазме крови человека. При проведении теста разведенные пробы инкубируют в микролунках, поверхность которых покрыта высокоочищенными антигенами, соответствующими зонам сore, NS3, NS4, NS5 вируса гепатита С, что обеспечивает высокую чувствительность диагностического теста. Во время первой стадии инкубации антитела к HCV, содержащиеся в образце, связываются с иммобилизованными антигенами. После отмывания, цель которого заключается в удалении несвязавшегося материала, захваченные анти-HCV антитела инкубируются с конъюгатом. Во время второй стадии инкубации конъюгат связывается с антителами к HCV, иммобилизованными на первой стадии, при этом образуется комплекс: антиген - антитело человека - конъюгат. После удаления избытка конъюгата связанный фермент выявляется добавлением раствора, содержащего ТМБ и перекись водорода. В тех лунках, где присутствуют предположительно анти-HCV-положительные образцы, развивается синее окрашивание. Ферментативную реакцию останавливают серной кислотой, что приводит к появлению оранжевого окрашивания, интенсивность которого измеряется фотометрическим методом. Количество связанного конъюгата и, соответственно, интенсивность окрашивания в лунках находятся в прямой зависимости от концентрации антител в образце.

НАЗНАЧЕНИЕ

Тест-система Мюрекс анти-HCV предназначена для выявления антител к вирусу гепатита С в индивидуальных сыворотках и плазме крови человека (не объединенных в пулы) при диагностике вирусного гепатита С.


СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ


Подготовка образцов.

Для анализа используют образцы сывороток или плазмы. Следует убедиться в том, что образцы сыворотки для анализа отбираются из полностью свернувшейся естественным образом крови. Перед постановкой образцы следует осветлить центрифугированием. Хранить образцы при 2-8 ОС в течение 7 дней. Образцы не проанализированные в течение этого времени следует отделить от сгустка или осадка клеток и хранить при температуре –15 ОС или ниже. Не допускать многократного замораживания и оттаивания! Можно анализировать образцы плазмы, взятые в присутствии ЭДТА, цитрата натрия или гепарина.



Подготовка растворов и реагентов.

Раствор 1. Рабочий раствор конъюгата. Во флакон 6 с конъюгатом влить буферный раствор для разведения конъюгата (флакон 5). Флакон закрыть и выдержать не менее 15 мин, периодически встряхивая. Раствор можно хранить при 2-8 ОС не более 7 дней, в замороженном состоянии при температуре –15 ОС или ниже не более 6 месяцев. Раствор конъюгата можно замораживать и оттаивать не более 4 раз.

Раствор конъюгата имеет коричневый цвет.

Раствор 2. Рабочий раствор субстрата. Смешать в равных объемах концентрат субстрата из флакона 8 и буфер для разведения субстрата из флакона 7, добавляя последний к концентрату субстрата. Количество концентрата субстрата достаточно для постановки минимум 96 анализов. Следить за чистотой посуды и пипеток, а также соблюдать требуемую последовательность в ходе смешивания. Предохранять растворы от прямого воздействия яркого света !

Рабочий раствор субстрата имеет розовый цвет.

Хранить раствор можно в течение 2 дней при температуре 15-25 ОС или 2-8 ОС, однако раствор необходимо выбросить если образовались кристаллы. Приготовленный рабочий раствор субстрата взаимозаменяем с аналогичным буфером других серий Мюрекс анти-HCV.



Раствор 3. Отмывающий буфер. Содержимое флакона 9 вылить в емкость с дистиллированной водой. Тщательно перемешать и довести объем до 2500 мл. Раствор хранить в закрытой посуде при температуре 18-30 оС в течение 1 месяца. В отмывающем буфере при хранении может развиться желтая окраска. Это не влияет на результат проведения теста при условии, если тщательно удалять (отмывать) раствор из лунок. Приготовленный отмывающий буфер взаимозаменяем с аналогичным буфером других серий Мюрекс анти-HCV.

Раствор 4. Стоп-реагент, 2 М серная кислота. Добавить от 3 до 11 мл концентрированной серной кислоты чда к 0,5 - 80 мл дистиллированной воды, перемешать и довести объем до 100 мл.

ПРОВЕДЕНИЕ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА.

  1. Отобрать необходимое количество стрипов. Оставшиеся стрипы положить в пластиковый пакет с защелкой вместе с пакетом силикогеля и хранить при 2-8 ОС.

  2. Стрипы, предназначенные для проведения анализа, а также все реагенты и образцы выдержать для достижения ими температуры 18-20 ОС.

  3. Приготовить рабочий раствор конъюгата (раствор 1), рабочий раствор субстрата (раствор 2), отмывающий буфер (раствор 3) и стоп-реагент (раствор 4).

  4. Внести в каждую лунку по 180 мкл буфера для разведения образцов. Буфер для разведения образцов и контролей – жидкость зеленовато-коричневого цвета.

  5. Внести в лунки по 20 мкл исследуемых образцов. Если используется два стрипа или меньше, внесите пипеткой один отрицательный контроль в лунку А1 и один положительный контроль в лунку В1. Если используется больше двух стрипов, рекомендуется использовать две лунки отрицательного контроля. Внесите контроли в обозначенные лунки на каждом планшете после внесения образцов. Использование белого фона будет способствовать зрительному контролю факта добавления образцов. Образцы и контроли должны быть тщательно смешаны с буфером для разведения образцов путем 4-х кратного пипетирования содержимого лунок. Альтернативно, для достижения адекватного перемешивания в лунках используйте шейкер при 800 об/мин в течение 30 секунд (используйте новый наконечник для каждого нового образца или контроля). При внесении образцов цвет раствора меняется на сине-зеленый.

  6. Накрыть планшет крышкой и инкубировать 1 час при 37-38ОС во влажных условиях (влажная камера). Влажной камерой может служить чистый полиэтиленовый пакет, в который вложен смоченный водой кусок фильтровальной бумаги или ткани. Не уменьшайте рекомендуемое время инкубирования.

  7. Отмывание планшета.

  • Автоматическим вошером. Выполняйте 5 циклов, используя отмывающий буфер. Убедитесь, чтобы:

    1. объем наполнения составлял 500 мкл на лунку при использовании вошеров, поставляемых Мюрекс. При использовании других вошеров убедитесь, что лунки полностью заполнены;

    2. положение заполняющих игл было такое, чтобы полностью заполнить лунки не приводя к переливу;

    3. время, необходимое для полного выполнения одного цикла отмывки (аспирация/отмывка/замачивание) составляло примерно 30 сек;

    4. следите, чтобы в лунке не оставалось жидкости (с помощью этапа двойного осушения на конечном этапе, если это возможно).

  • Отмывание вручную.

  1. аспирируйте жидкость из первого ряда полностью;

  2. полностью заполните лунки этого ряда отмывающим буфером;

  3. повторите эту процедуру для каждого ряда лунок;

  4. убедитесь, чтобы каждый ряд лунок оставался в заполненном состоянии в течение 30 сек;

  5. повторить пункты а-d еще четыре раза;

  6. аспирировать содержимое лунок. Рекомендуется лунки перевернуть и отстучать насухо о бумежное полотенце или ткань после последней отмывки.

Примечание: Не позволять лункам пересыхать в процессе постановки анализа. Вошеры следует промыть дистиллированной или деионизированной водой в конце анализа для избежания закупорки игл и коррозии.

  1. Добавить в каждую лунку по 100 мкл рабочего раствора конъюгата. Избегать касания или забрызгивания ободка лунки конъюгатом. Не выдувайте остатки раствора конъюгата из наконечника. Рекомендуется обратное пипетирование. Избегать перекрестного загрязнения реагентов. Рекомендуется использование отдельной пипетки для внесения раствора конъюгата, которая должна быть маркирована соответствующим образом.

  2. Закрыть планшет крышкой и инкубировать во влажных условиях 30 мин при 37-38ОС (см. п.6).

  3. Отмыть планшет (см. п.7).

  4. Внести в каждую лунку по 100 мкл раствора субстрата. Рекомендуется использование отдельной пипетки для внесения рабочего раствора субстрата, которая должна быть маркирована соответствующим образом.

  5. Закрыть планшет крышкой и инкубировать 30 мин при 37-38ОС. В лунках с реактивными образцами появляется синее окрашивание.

  6. Добавить в каждую лунку по 50 мкл стоп-реагента. При этом цвет лунок с положительными образцами переходит в оранжевый, а цвет лунок с отрицательными образцами остается розовым.

УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ

    1. В течение 15 мин измерить с помощью ридера оптическую плотность (ОП) в каждой лунке при длине волны 450 нм, используя волну из диапазона 620 нм / 690 нм в качестве референсной. Прибор бланкировать по воздуху. Подсчитать среднюю величину ОП для лунок с отрицательным контролем. Подсчитать критическую величину: добавить 0,600 к среднему значению ОП отрицательного контроля.

ОП крит. = ср ОП(К-) + 0.600

    1. Среднее значение ОП(К-) -должно быть меньше 0.250
      ОП(К+) должна быть больше значения ОП(К-) на 0.800

Если ОП(К-) и ОП(К+) не удовлетворяют этим показателям, результаты учитывать нельзя и анализ необходимо повторить.

3. Образцы, ОП450 которых превышает значение ОПкрит, рассматриваются как первоначально положительные. Такие образцы должны быть перетестированы в двух повторах с использованием исходного материала. Образцы, которые остаются положительными, по крайней мере, в одном из двух повторов, рассматривают как повторно положительные и считают, что они содержат антитела к антигенам HCV.

Рекомендуется классифицировать образцы со значением ОП450 >ОП(К-) + 0.300, но < ОПкрит. или < ОП(К-) + 0.600 (серая зона), как погранично положительные. Погранично положительные образцы должны быть перетестированы повторно. Если погранично реактивные результаты повторяются, или если получены противоречивые результаты, необходимо тестировать образцы с использованием тест-системы другого производителя или в подтверждающем тесте:


  • если получен положительный результат при использовании тест-системы другого производителя или в подтверждающем тесте, то считается, что сыворотка содержит антитела к HCV антигенам;

  • если значение ОП450 образца остается в серой зоне, или, если получены противоречивые результаты, то донор или больной, чья кровь исследовалась, в дальнейшем нуждается в наблюдении врача.

Если значение ОП450 образца < ОП(К-) + 0.300 образец считается нереактивным (отрицательным.

Рекомендации:

  • Перед началом анализа все реактивы и пробы выдержать некоторое время при комнатной температуре 18-25 ОС.

  • Если планшет не используется полностью в одном опыте, оставшиеся стрипы следует хранить в прилагаемом полиэтиленовом пакете с защелкой при температуре 2-8 ОС.

  • Очень важно обеспечить тщательное смешивание в лунках контрольных и исследуемых проб с буфером. Адекватное смешивание достигается с помощью автоматической пипетки путем насасывания и выпускания жидкости не менее 4 раз или с помощью шейкера.

  • Нельзя допускать подсыхания лунок в процессе работы.

ФОРМА ВЫПУСКА

Тест-система выпускается в виде упакованного в коробку комплекта, рассчитанного на проведение 480 анализов.



СРОК ГОДНОСТИ, УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ

Срок годности тест-системы 12 месяцев. Набор с истекшим сроком годности хранению не подлежит.

Тест-систему хранят при температуре 2 – 8 ОС и относительной влажности не более 60%. Транспортирование осуществляют всеми видами крытого транспорта при температуре не выше 10ОС в условиях, исключающих замораживание.
Рекламации на препарат направлять

в адрес Фирмы Мюрекс Биотех Лтд: Центр роуд,Темпл хилл, Дартфорд, Кент, Англия ДА1 5ЛР, тел. 01322 277711, факс 01322 273288


К. 7.14.3.01., 7.14.3.02 В.231007.
Каталог: upload -> files
files -> Жеке және заңды тұлғаларға көрсетілетін мемлекеттік қызметтердің тізілімін бекіту туралы
files -> Жаңақорған ауданы мәдениет саласының 2012 жылы атқарған жұмыстары жайлы мәлімет
files -> І. Балалардың құқықтарын қорғау саласындағы нормативтік құжаттар
files -> 2013 жылғы облыстық бюджеттің атқарылуы туралы есеп
files -> «Алматы қаласы Жер қатынастары басқармасы»
files -> Қазақстан Республикасы Президенттігіне кандидаттардың үгіттік баспа материалдарын орналастыратын орындар мен сайлаушылармен кездесу үшін берілетін үй-жайларды белгілеу туралы
files -> 2013 жылдың 1 қыркүйегіне Жаңақорған ауданы бойынша кәсіпкерлік және өнеркәсіп саласында атқарылған жұмыстар туралы мәлімет


Достарыңызбен бөлісу:




©dereksiz.org 2020
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет