Определение степени поражения различными болезнями ячменя и пшеницы на территории аккайынского района северо-казахстанской области

Жасушаларды өсіру. MDA-MB-435 жасушалары 10% FBS, 20 мМ L-глутамин, 100 бірлік/мл пенициллин/стрептомицин қосылған DMEM/F12 қоректік ортасында, 5% CO₂, 37 ^oC температурасы жағдайында өсірілді.

Жасушаларды субфракциялау. MDA-MB-435 жасушалары салқын PBS буферімен шайылғаннан кейін, шағын көлемдегі (жасушалар 90% өсірілген 150 мм ұлпа өсіру табақшасы үшін 0.3 мл) Б буферімен (40 мМ Hepes pH7.5, 160 мМ KCl, 2.5 мМ EGTA, 2.5 мМ EDTA, 0.5% глицерол, 0.5% NP-40) жыйнап алып, +4^oC температурада 30 минут шайқалды. Лизат +4^oC температурада, 500xg, 5 минут центрифугаланып, ядро тұнбаға түсіріліп алынды. Супернатант 16000xg, 10 минут центрифугаланып, оның супернатанты цитоплазмалық фракция (ЦИТО) ретінде сақталды. Алынған тұнба 0.1% NP-40 қосылған Б буферімен бір рет шайылып, 1000xg, 5 минут центрифугаланғаннан кейін, супернатанты алынып тасталды. Тұнбаға түскен ядроға 0.1M LiCl қосылған Б буфері құйылып, +4^oC температурада, 1 сағат шайқалғаннан кейін, +4^oC, 16000xg, 15 минут центрифугаланып бөлінді. Супернатант аз тұзды ТЭИФ фракциясы (ТЭИФ-АТ) ретінде сақталды. Ары қарай, алынған тұнба 0.2M LiCl қосылған Б буферімен +4^oC температурада 1 сағат инкубацияланып, 16000xg, 15 минут центрифугаланып бөлінді, супернатанты ТЭИФ фракциясы бөліп алынғаннан кейін, қалған тұнбаға түскен ядро фракциясы 8 М уреа буферінде, ультрадыбысты дезинтегратордың (XL2000, Microson) көмегімен дизентегратталып, +4^oC, 16000xg, 15 минут центрифугаланып, супернатанты қалдық ядро фракциясы (ҚИФ) ретінде алынды.

SDS-PAGE. Электрофорез жасалатын жасушаның субфракциялық үлгілері 4Х үлгіні өңдеу буферімен (50 мМ Tris-HCl pH6.8, 10% глицерин, 2% SDS, 100 мМ β-меркаптоетанол, 0.01% бромфенол көгі) 95 ^oC температурада 5 минут қыздырылып денатурализацияланғаннан кейін, олардың 20 мкг (иммунопреципитация үлгісінен 15 мкл) мөлшері және ақуыздардың молекулалық салмағы маркері электрофорез гельіне құйылды. Электрофорез Mini-PROTEAN Tetra Cell (Bio-Rad) камерасында, алғашқы 10 минутта 120 вольт, онан кейін аяқтағанға дейін 200 вольттік тоқпен жүргізілді.

Иммуноблоттинг. SDS-PAGE электрофорез гельінде бөлінген ақуыздарды 50 секунд этанолмен өңделген PVDF (Millipore) мембранасына трансферлеп алу үшін Trans Blot Cell (Bio-Rad) блоттинг камерасында CAPS буфері (10 мМ CAPS, 10% этанол, рН 11) қолданылды. Трансферлеу 0.45 А тоқпен 3 сағатта жүргізілді. Трансферлегеннен кейін PVDF мембранасына керекті антиденелерді қолдана отырып иммуноблоттинг талдауы жасалды.
Нәтиже және қорытынды

MDAMA-435 жасушасын цитоплазмалық және ядролық суб-фракциялауға изотондық буфер қолданылып, фракциялау барысында ядро қабығы бұзылмай, оның іші-сыртындағы осмотикалық баланс сақтала отырып, ядро тұтас күйінде бөліп алынды және ядро одан ары қарай субфракцияланды. Жасушаны субфракциялау барысы мұз үстінде немесе температурасы +4^oC салқын бөлмеде жүргізілді. Алдымен аз мөлшердегі детергентті лизис буферімен өңдеп, цитоплазмалық фракцияны бөліп алғаннан кейін, детергент қосылмаған ұқсас лизис буферімен бір рет жылдам жуып, ядроны цитоплазмалық фракцияның қалдықтарынан тазартып алдық. Ядроны субфракциялауға алдымен аз тұзды буфер (Б лизис буферіне 0.1 М LiCl қосылған) қолданылып экстракцияланғаннан кейін, центрифугаланып, экстракт бөліп алынды. Бұл фракция аз тұзбен экстрактталатын ядролық фракция (ТЭИФ-АТ) деп аталды. ТЭИФ-АТ фракциясы алынғаннан кейінгі тұнбаға (ядро) 0.2 М LiCl қосылған Б лизис буфері қосылып өңделген соң, центрифугаланып, супенатанты ТЭИФ ретінде жинап алынды. Жасалған тәжірибе цитоплазманы бөліп алғаннан кейінгі ядроның ақуыздарын екі рет тұзбен эктракциялаған соң да ядро қабығы бұзылмай, құрылымын сақтап тұратындығын, хромосоманың тұтас күйінде ядроның ішінде қалғандығын көрсетті (Сурет 1). Ядро қабығы нитерфазасының ақуыздарын және ядролық ақуыздарды тұзбен экстрактталғаннан кейінгі қалған ядроны 8 М уреа буферін қоса отырып ультрадыбысты дизентаграттау арқылы қалдық ядролық фракция (ҚИФ) алынды. Бұл алынған фракциялардың тазалығын, дәлдігін, яғни, олардың компоненттерінің бірінен біріне өтіп кетпегендігін SDS-PAGE электрофорезінен кейінгі иммуноблоттинг талдауы арқылы дәлелдедік.

mTOR протеинкиназасы жасушаның цитоплазмалық және ядролық фракцияларының барлығында табылды. Оның ең көп бөлігі цитоплазмада болып, ядроның ішіне қарай біртіндеп азайып отырады. Бұрынғы зерттеулерде mTORC1 және mTORC2 комплекстері негізінен жасушаның цитоплазмасына локализацияланады деп қаралып, олардың тек цитоплазмадағы функциясы зерттеліп келген. Алайда, біздің зерттеу нәтижеміз көрсеткендей, mTOR-дың бір үлкен бөлімі ядро қабығының интерфазаларына және ядроның ішінде локализацияланады. Демек mTOR протеинкиназасы ядро қабығының интерфазаларында немесе ядроның ішінде де комплекс түзіп, қандай да бір қызмет атқарады. Ал біздің бұл зерттеуіміздің нәтижесі mTOR-дың жасушаның субфракцияларындағы функцияларын және оның жаңа комплекстерін қарастыру мақсатындағы зерттеулерде, mTOR-дың осыған дейін ашылған mTORC1 және mTORC2 сынды екі комплекстерінің кедергісін азайтады.

2. Yip, C.K., Murata, K., et al. Structure of the human mTOR complex I and its implications for rapamycin inhibition. Molecular Cell (2010); 38: 768-774. 

3. Берсимбай Р.И., Булгакова О.В., Омаров Р.Т., Сарбасов Д. Роль mTOR сигнальной системы в регуляции клеточных функтций. Доклады НАН РК (2010); 5, c. 82-90.

4. Kim, D.H., Sarbassov, D.D., Ali, S.M., et al. GbL: a positive regulator of the rapamycin-sensitive pathway required for the nutrient-sensitive interaction between mTOR and raptor. Molecular Cell (2003); 11: 895-904.

5. Sarbassov, D.D., Guertin, D.A., Ali, S.M., and Sabatini, D.M. Phosphorylation and Regulation of Akt/PKB by the Rictor-mTOR complex.Science (2005); 307: 1098-1101.

6. Bulgakova O.V., Shaikenov T., Bersimbay R.I., Sarbassov D.D. Purification of the mTOR complexes by affinity chromathography. Reports of the international conference: III Humboldt-Kolleg, Astana, Kazakhstan (2010); 45-46.

7. Desai, B.N. et al. FKBP12-rapamycin-associated protein associates with mitochondria and senses osmotic stress via mitochondrial dysfunction. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. (2002); 99: 4319–4324

8. Sabatini, D.M., Barrow, R.K., Blackshaw, S., Burnett, P.E., Lai, M.L., Field, M.E., Bahr,B.A., Kirsch, J., Betz, H., Snyder, S.H. Interaction of RAFT1 with the Clustering Protein Gephyrin Required for Rapamycin-Sensitive Signaling. Science (1999); 284: 1161-1164.

9. Zhang, X., et al. Predominant nuclear localization of mammalian target of rapamycin in normal and malignant cells in culture. J. Biol. Chem. (2002); 277(31): 28127-28134.

0. Drenan, R.M., Liu, X., et al. FKBP12-rapamycin-associated protein or mammalian target of rapamycin (FRAP/mTOR) localization in the endoplasmic reticulum and the Golgi apparatus. Biol. Chem. (2004); 279: 772–778.

1. Withers, D.J., Ouwens, D.M., et al. Expression, enzyme activity and subcellular localisation of the mammalian target of rapamycin in insulin-responsive cells. Biochem. Biophys. Res. Commun. (1998); 241: 704–709.
Содержание

Секция «Биотехнология растений и животных»
	Раев Р.Б. , ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана – «Определение степени поражени различными болезнями ячменя и пшеницы на территории Аккайынского района Северо-Казахстанской области»	3
	Акбасова А.Ж., ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана - «Өсімдіктердің фитопатогендерге қарсы қорғаныс реакциялары»	6
	Дюсенбекова А.С., ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана – «Семей ядролық полигонының топырағындағы радионуклеотидтердің фиторемедиациясы»	9
	Жакупова А.С., Сарсенбаев К.Н.,ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана – «Особенности Cistanche Deserticola флоры Казахстана»	11
	Жумалин А.Х, Куйбагаров М.А., НИИ биотехнологии АО «Казахский агротехнический университет им. С. Сейфуллина» – «Получение и характеристика моноклональных антител к хлорамфениколу»	12
	Исхакова Д.Я., ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана –«Экспериментальный морфогенез в культуре ткани осины триплоидной(Populus Tremula L.)»	14
	Нурланова А.А., ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана - «Определение остаточных антибиотиков в продуктах животного происхождения»	17
	Секенова А.Е., Огай В.Б, Мукантаев К.Н., Бакирова Г.А., РГП НЦБ РК, ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана - «Получение поликлональных антител к транскрипционному фактору SOX2 плюрипотентных стволовых клеток человека»	20
	Тургимбаева А.М., ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана - «Тестирование рекомбинантного антигена p24 вируса лейкоза крупного рогатого скота методами иммуноферментного анализа»	23
Секция «Биотехнология микроорганизмов»
	Ахметова А.Е., ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана – «Современное состояние разработки технологии кисломолочных продуктов функционального значения»	26
	Турмагамбетова А.С., РГП «Институт микробиологии и вирусологии» КН МОН РК, Алматы - «Сравнение инфекционной активности парамиксовирусов птиц при различных условиях хранения аллантоисного материала»	30
	Ултанбекова Г.Д., Айткельдиева С.А., Хасенова А.Х., Шакиев С.Ш., Треножникова Л.П., РГП «Институт микробиологии и вирусологии» КН МОН РК, Алматы – «Выделение и изучение антагонистических свойств экстремофильных микроорганизмов из солончаковых почв Южного Казахстана»	31
Секция «Медицинская биотехнология и генетика»
	Берсимбай Р.И., Акпарова А.Ю., Ещжанов Т.Е., ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана - «Полиморфные варианты генов IL-4, ТNF–α и продукты их экспрессии у больных бронхиальной астмой в казахской популяции»	33
	Аубакирова Д.С., Укбаева Т.Д., ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана - «Гистосәйкелестіліктің басты комплексі»	36
	Ахметова А.Ж., Ибраева А.Р., РГП НЦБ РК, ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана – «Қазақстан территориясында таралған М.TUBERCULOSIS клиникалық изоляттарының молекулалық - генетикалық сипаттамасы»	39
	Далина А.Д., Нургалиева А.Н., Бекболсынов Д., Огай В.Б., РГП НЦБ РК, ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана - «Получение и характеристика мезенхимальных стволовых клеток компактной кости»	40
	Есетова А.А., Ұқбаева Т.Д., Мукантаев Қ,Н., РГП НЦБ РК , ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана - «Ірі қара мал лейкозы диагностикасында рекомбинанттық p24 антигені негізінде иммундық - ферменттік талдауды жүргізу тиімділігі»	41
	Иманбекова М.К., Кулмамбетова Г.Н., Кусаинова Г.К., Миллер Р.В., РГП НЦБ РК, ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана – «Выявление ассоциации полиморфизмов генов IL-1B и IL-RN с развитием гастрита»	44
	Исабекова Т.М., РГП НЦБ РК, ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана – «Полиморфизм гена интерлейкина-1 у больных язвенной болезнью и хроническим гастритом, ассоциированными с HELICOBACTER PYLORI »	46
	Кравченко А.П., Шевцов А.Б., Киянбекова Л.С., ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, РГП НЦБ РК, РГКП «Центр санитарно-эпидемиологической экспертизы г. Астана» – «Анализ мутаций лекарственной резистентности к противовирусным препаратам вируса гепатита В у пациентов с хроническим гепатитом В на территории г. Астана»	48
	Мухамедьярова М.Б., ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана – «Методы анализа на выявление токсоплазмоза у человека»	51
	Нұрбекова Ж. А., Укбаева Т.Д., ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана – «Хемокиндердің жіктелуі, сипаттамасы және олардың қызметі»	54
	Соколова Н.С., РГП «Институт микробиологии и вирусологии» КН МОН РК, Алматы – «Влияние противовирусных растительных препаратов на сорбционную активность вируса»	56
	Тарлыков П.В., Огрызько В.В., ЕНУ им. Л.Н. Гумилева (Астана), Institut Gustave Roussy (Villejuif, France) – «Протеомные исследования белок-белковых взаимодействий апуриновой/амиримидиновой эндонуклеазы 1 человека»	57
	Тасбулатова А.Т., Ұқбаева Т.Д., ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана – «Бағаналық жасушалардың медицинада қолданылуы»	59
Секция «Биоразнообразие и рациональное использование биоресурсов»
	Ашикбаева М.А., Спанбаев А.Д., Асилханова Р.З., Әбиев С.Ә., ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана - «Қарқаралы мемлекеттік ұлттық табиғи паркінде таралған агарика саңырауқұлақтарының түрлік құрамы»	61
	Даниленко А.В., Павлодарский государственный педагогический институт, Павлодар – «Флора прилегающей территории озера Биржанколь Баянаульского государственного национального природного парка»	63
	Карабалаева А.Б., ПГУ им. С. Торайгырова, г. Павлодар - «Влияние антропогенных факторов на состояние реки Иртыш в пределах Павлодарской области»	66
	Мухамадиева А., Жумадина Ш.М., Калиева С.К., Семей мемлекеттік педагогикалық институты, қ.Семей – «Микрогравитация жағдайында төменгі сатыдағы омыртқалы жануарлардың күретамырының қысқартылу активтілігі»	68
	Окасова Д., Шакаримов А., Восточно-Казахстанский государственный технический университет им.Д.Серикбаева, Усть-Каменогорск – «Нерациональное использование водных ресурсов Казахстана. Меры по регулированию потребления воды»	70
	Сарсенова М.А., ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана - «Обоснование и разработка безотходной технологии очистки и использования загрязненных вод»	72
	Яхновец К. В, Бекеева С.А., ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана – «Гнездовая биология кречетки Vanellus Gregarius, выживаемость гнезд и причина их гибели»	74
Секция «Современные аспекты молекулярной биологии»
	Бабенко О.Н., ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана - «Молибдоферменты и их биологическая роль в растениях»	77
	Бердыкенов А.М., РГП «Национальный центр биотехнологии Республики Казахстан» КН МОН РК – «Получение рекомбинантного белка репарации ДНК hNEIL1»	82
	Бейсенова С.Р., ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана – «GAGEA SALISB. туысын молекулалық деңгейде зерттеуіне шолу»	84
	Киян В.С., ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана – «Функциональные особенности TOR системы у эукариот»	88
	Манат Е., Берсимбай Р.И., Бекманов Б.О., Акпарова А.Ю., Ещжанов Т.Е., ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана – «Тыныс демікпесімен аурған науқастардағы репарация гендерінің полиморфизмі»	92
	Жакупова А.С., Сарсенбаев К.Н., ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана - «Некоторые особенности цистанхе пустынной (Cistanche deserticola)	94
	Дубек Қазыкен, ЕНУ им. Л.Н. Гумилева, Астана - «mTOR комплекстерін бөліп алу мақсатында жасушаларды субфракциялаудың жаңа әдісі»	96