Структура и содержание рабочей учебной программы дисциплины I. Цели и задачи изучения дисциплины


ПЛАН ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЙ ПО ВИРУСОЛОГИИ



жүктеу/скачать 4.06 Mb.
бет11/26
Дата23.07.2016
өлшемі4.06 Mb.
#216803
1   ...   7   8   9   10   11   12   13   14   ...   26

ПЛАН ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЙ ПО ВИРУСОЛОГИИ




Темы занятий
№ занятия

  1. Общая вирусология

  2. Респираторные и энтеровирусы

  3. Дермотропные и нейротропные вирусы

  4. Вирусы кори, паротита и краснухи. Вирусы, поражающие печень

  5. Лимфотропные и онкогенные вирусы, вирусы СПИДа. Итоговое занятие.

1-3

4

5



6
7



РАЗДЕЛ 1. Общая вирусология.

Вирусологический метод лабораторной диагностики (Занятия №1-3)
Актуальность: 80% всех инфекций обусловлены вирусами. Вирусы оказывают тератогенное действие на плод и участвуют в развитии онкозаболеваний.
Мотивация. Знание материала по данной теме является базовой основой для изучения частной вирусологии. Освоение студентами основных методов лабораторной диагностики вирусных заболеваний необходимо для правильной интерпретации полученных результатов исследования.
Цели занятий

  1. Освоить методику приготовления первично-трипсинизированной культуры клеток.

  2. Овладеть техникой заражения культур клеток.

  3. Сформировать знания и освоить методику индикации и идентификации вирусов на культурах клеток.


Студент должен знать:

  • морфологию вирусов, строение и химический состав

  • принципы классификации вирусов

  • механизм взаимодействия вируса и клетки

  • методы культивирования вирусов

  • методы индикации вирусов

  • методы идентификации вирусов

  • методы серологической и экспресс-диагностики вирусных инфекций


Студент должен уметь:

  • приготовить первично-трипсинизированную культуру клеток

  • заражать культуры клеток вирусосодержащим материалом

  • проводить индикацию вирусов на культуре клеток (цветная проба, ЦПД, реакция гемадсорбции).

  • проводить идентификацию вирусов (РТГА, РСК, РН на культуре клеток)

  • проводить лабораторную диагностику вирусных инфекций серологическим методом и интерпретировать полученные результаты.


Алгоритм подготовки к занятиям
Задания для самоподготовки:

Учебный материал по теме: «Общая вирусология».



Основные вопросы, разбираемые на занятиях:

Занятие № 1.

  1. Химический состав, ультраструктура, морфология вирусов.

  2. Принципы классификации.

  3. Характеристика вирусного генома.

  4. Взаимодействие вируса и клетки.

  5. Методика получения тканевых культур: типы культур клеток

Занятие № 2 .

  1. Вирусологический метод лабораторной диагностики. Методы культивирования вирусов на культурах клеток, куриных эмбрионах и экспериментальных животных.

  2. Методы индикации вирусов на культуре клеток. ЦПД, включения, цветная проба, реакция гемадсорбции).

  3. Методы индикации вирусов на куриных эмбрионах (ЦПД, реакция гемагглютинации. гибель, отставание в развитии, кровоизлияния).

  4. Методы индикации вирусов на экспериментальных животных (гибель, клиническая симптоматика, РГА, обнаружение включений).

Занятие № 3 .

  1. Идентификация вирусов по антигенной структуре. Постановка реакций торможения, гемагглютинации (РТГА), нейтрализации (РН), связывания комплемента (РСК), преципитации (РП).

  2. Экспресс-диагностика вирусных инфекций (реакции иммуно-флюоресценции, преципитации в капилляре).

  3. Современные методы: иммуно-ферментный анализ (ИФА), радиоиммунный анализ (РИА).


Строение вирусов:

Вирусы мельчайшие внеклеточные микроорганизмы, способны размножаться только в живой клетке, абсолютные паразиты. Все вирусы существуют в двух формах: внеклеточной (вирион) и внутриклеточной (вирус). Любая вирусная частица содержит:


Рисунок

Название

Функция




  1. Нуклеиновая кислота




  1. Капсид




  1. суперкапсид (пеплас)




  1. нуклеокапсид




  1. экзоферменты




  1. углеводистые рецепторы




  1. липиды




  1. гемагглютинин




Химический состав вирусов:
Нуклеиновая кислота 2-50%

Белки 10-70%

Жиры 0-24%

углеводы 1-2%



Минеральные соли 1%

Воды вирусы не содержат ни свободной, ни связанной.
Антигенная структура вирусной частицы:




  • поверхностные V - антигены (H - гемагглютинин и фермент N - нейроминидаза, способствующие развитию иммунных реакций);




  • экзоферменты (чаще белкового происхождения, разрушающие клеточную стенку).



Форма вирусов:


Форма

Примеры































Размеры вирусов: Вирусы увидеть невозможно в световом микроскопе, кроме вируса натуральной оспы, самый крупный вирус 500нм или 500мкм. Большинство вирусов от 8 нм до 500 нм.
Тип симметрии - .
Тропизм - .
ПРИНЦИПЫ КЛАССИФИКАЦИИ ВИРУСОВ:


принцип

группы

примеры


1. по форме:

1.




2.




3.




4.




2. типу симметрии

1.




2.




3. чувствительности

к эфиру

1.




2.




4. типу нуклеиновой кислоты:

1.




2.





5. тропизму:

1.




2.




3.




4.




6. наличию гемагглютинина

1.




2.






взаимодействие вируса и клетки.
Различают 3 вида взаимодействия вируса и клетки:


Название

Сущность

  1. Вирулентная вирусная инфекция.




  1. Персистирующая вирусная инфекция.




3. Опухолевая трансформация.





Этапы взаимодействия вируса и клетки





Этапы взаимодействия

Механизм

  1. Адсорбция




  1. Проникновение




  1. Синтез вирусных компонентов




  1. Выход вируса из клетки





Механизмы противовирусного иммунитета.

Механизм

Сущность

Неспецифические факторы защиты




Специфические механизмы иммунной защиты:

Гуморальный механизм противовирусного иммунитета



Клеточный иммунный ответ









МЕХАНИЗМ ПРОТИВОВИРУСНОГО ИММУНИТЕТА

Дж. Плейфэр Наглядная иммунология. - 1999г.- с.58.


Важнейшим фактором неспецифической резистентности организма человека является интерферон (год открытия 1957). Интерфероны (ифн) – это гликопротеиды, вырабатываемые всеми клетками организма. Важнейшие функции: антивирусная, противоопухолевая, иммуномодулирующая и радиопротективная. Различают три вида:  ИФН – синтезируют лейкоциты переферической крови,  ИФН – синтезируют фибробласты,  ИФН – продукт стимулированных Т-лимфоцитов, НК и макрофагов. По способу образования различают ИФН 1 типа – образуется в ответ на внедрение вируса, ИФН 2 типа – продуцируется лимфоцитами и макрофагами и действует как цитокин. ИФН видоспецивичны. Механизм противовирусного действия ИФН основан на угнетении трансляции вирусной мРНК, за счет активации клеточных протеинкиназ. ИФН активны лишь в отношении внутриклеточного вируса.





Названия лекарственных форм

Препараты ИФН

ИНФ лейкоцитарный человеческий

Лейкинферон

Локферон

Реаферон



Липинт

Кипферон


Интрон

Виферон Гриппферон

Инфагель


Индукторы ИФН

Тилорон

Неовир


Циклоферон

Полудан


Мегосин

Натрия рибонуклеат



ОБЩИЕ ПРИНЦИПЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ

ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ.


Название метода

Сущность метода

ВИРУСОСКОПИЯ.




ВИРУСОЛОГИЧЕСКИЙ.




СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД.




ЭКСПРЕСС ДИАГНОСТИКА.





Вирусологический метод лабораторной диагностики
Выделение и идентификация вируса на культурах клеток, куриных эмбрионах и лабораторных животных.

Перед культивированием материал больного (кроме крови и ликвора) центрифугируется (2000 оборотов в течение 10 мин). Берут надосадочную жидкость и обрабатывают антибиотиком широкого спектра действия (пенициллин) 500 тыс. ЕД на 1,0 мл. исследуемого материала для подавления бактериальной флоры.



1 этап – культивирование вируса.

На культурах клеток.

Культура клеток – это клетки, которые способные жить в пробирках на искусственных питательных средах (среда 199).



Разновидности культур клеток:


название

сущность

примеры

  1. первично-трипсинизированные







  1. перевиваемые







  1. полуперевиваемые








На куриных эмбрионах.

Заражают 7-10 дневные куриные эмбрионы с учетом тропизма:



тропизм

способ заражения

  1. дермотропные




  1. респираторные




  1. нейротропные




  1. энтеровирусы





На лабораторных животных.

Культивирование проводят на мышах сосунках (до 2-х дней жизни), лабораторных крысах, морских свинках, кроликах. Заражают в зависимости от тропизма вируса:




тропизм

способ заражения

  1. дермотропные




  1. респираторные




  1. нейротропные




  1. энтеровирусы





2этап - индикация вируса

(обнаружение вируса в материале больного).

На культурах клеток:

  • Цветная проба.

Если цвет индикатора (красный) питательной среды 199 не изменяется, это свидетельствует о наличии возбудителя в материале. Если клетки живые и выделяют продукты метаболизма, то происходит изменение цвета индикатора на желтый.

  • Цитопатическое действие (ЦПД) - .

Виды ЦПД:




название

сущность

рисунок

  1. Симпласт







  1. Очаговое







  1. Диффузное









  • Реакция гемадсорбции. Берем культуру клеток, зараженных вирусом, и вносим эритроциты. После некоторого времени контакта клетки промывают изотоническим раствором хлорида натрия. На поверхности клеток, пораженных гемагглютинирующим вирусом, остаются прилипшие эритроциты.


На куриных эмбрионах:

  • Гибель эмбриона

  • Отставание в развитии

  • Цитопатическое действие на оболочках эмбриона (некроз, кровоизлияния)

  • Гемагглютинация с жидкостями эмбриона.


На лабораторных животных:

  • Отставание животных в развитии

  • Развитие характерного симптомокомплекса заболевания.

  • Гибель животного (из органов готовят мазки-отпечатки и смотрят в них включения: ядерные и цитоплазматические).


3 этап - идентификация вируса по антигенной структуре:

По известной диагностической сыворотке определяем вид вируса в иммунной реакции.



Если вирус содержит гемагглютинин - ; вирус не содержащий гемагглютинин - , на культуре клеток или лабораторных животных.

РТГА – основана на том, что при взаимодействии вирусных антигенов (гемагглютининов) со специфическими антителами иммунной сыворотки происходит блокирование (нейтрализация) гемагглютинирующей способности вируса, т.е. торможение гемагглютинации. При положительной РТГА образуется плотный осадок из эритроцитов на дне лунки в виде пуговки. При отрицательном результате – образование «зонтика».

РСК – основана на том, что участвует комплемент и 2 системы: специфическая (антиген-антитело) и гемолитическая система (гемолитическая сыворотка и эритроциты). Реакцию считают положительной при полной задержке гемолиза, когда жидкость в пробирке мутная и эритроциты оседают на дно. Отрицательной – при полном лизисе эритроцитов, когда жидкость интенсивно окрашена и прозрачна («лаковая кровь»).

Реакция нейтрализации – основана на нейтрализации вируса противовирусной сывороткой. Оценивается по отрицательной цветной пробе и задержке ЦПД на культуре клеток или по отсутствию развития характерного симптомокомплекса у лабораторных животных, т.к. вирус нейрализован антивирусной сывороткой.
СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД лабораторной диагностики
Определение нарастания титра антител в сыворотке больного в динамике болезни. Диагноз подтверждается при достижении диагностического титра антител или при нарастании титра антител в 4 и более раза.


условие

Реакции, используемые для серодиагностики

Вирус содержит гемагглютинин




Вирус не содержит гемагглютинин





ЭКСПРЕСС ДИАГНОСТИКА


  • Используются реакции преципитации в капилляре (при бешенстве). Основана на образовании видимого преципитата при взаимодействии антигена с иммунной сывороткой.

  • Прямая и непрямая реакция Кунса (грипп, аденовирусные инфекции). Используется для выявления микробных антигенов в тканях или патологическом материале. Метку антител производят флюорохромами (флюоресцеин или родамин). При образовании комплекса, антиген-антитело флюоресцирующий компонент вызывает свечение комплекса (желто-зеленое окрашивание), что облегчает учет результатов реакции микроскопически.


жүктеу/скачать 4.06 Mb.

Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   7   8   9   10   11   12   13   14   ...   26



©dereksiz.org 2024
әкімшілігінің қараңыз
    Басты бет