За 2-3 недели до занятия крысу сенсибилизируют лошадиной сывороткой по 1 мл в течение 3-х дней (2 инъекции подкожно, 3-я - внутривенно). На занятии сенсибилизированной крысе в брюшную полость вводят 5 мл подогретого до 37°С 0,7% раствора хлористого натрия и 1,5% лимоннокислого натрия для смывания тучных клеток с серозных оболочек. Затем животное наркотизируют эфиром, мягко массируют брюшную стенку 1-2 минуты и спустя 3 мин после введения раствора вскрывают брюшную полость. Пастеровской пипеткой набирают перитонеальную жидкость, содержащую взвесь тучных клеток, и переносят ее по капле на 2 предметных стекла. На одно стекло к капле перитонеальной жидкости добавляют каплю лошадиной сыворотки (специфический аллерген) и осторожно перемешивают стеклянной палочкой, на другое - каплю сыворотки крови человека (неспецифический аллерген) - контроль. После 5-10 мин инкубации (в термостате, 37°С) делают толстые мазки, фиксируют их в смеси спирта и эфира (1:1) и красят спиртовым раствором толуидинового синего в течении 2-5 мин. Затем мазки промывают водой, обсушивают фильтровальной бумагой и рассматривают под микроскопом (об. X 40). В каждом мазке подсчитывают 50 тучных клеток и вычисляют в процентах количество дегранулированных клеток. Полученные результаты заносят в таблицу, сравнивают и делают выводы. Таблица
Инкубируемая смесь
|
Число аегрянулированных тучных клеток
|
Взвесь тучных клеток + лошадиная сыворотка (опыт)
|
|
Взвесь тучных клеток + сыворотка кровь человека (контроль)
|
|
Достарыңызбен бөлісу: |
