- Гомогенді (EMIT-анализ)
- Гетерогенді
2. ингибиторлы 3.Сэндвич-талдау 4.иммуномерсентометриялық EMIT (enzyme multiplied immunoassay technique) – способ гомогенного ИФА, основанный на связи с ферментами. - В основе гомогенного ИФА лежит ингибирование активности фермента при его соединении с антигеном и восстановление ее в результате реакции антиген – антитело или же, наоборот, потеря активности фермента в результате реакции.
- Существенным достоинством гомогенного ИФА является экспрессность определения, которая составляет 2 – 5 минут.
- К недостаткам следует отнести меньшую чувствительность, чем в гетерогенном ИФА (~ 1 мкг/мл).
E
+
E
Прямой конкурентный метод. - К иммобилизованным антителам добавляют раствор, содержащий определяемое вещество и фиксированную концентрацию меченого антигена, инкубируют и после отмывки носителя от несвязавшихся компонентов регистрируют ферментативную активность образовавшихся на твердой фазе специфических иммунных комплексов.
- Величина детектируемого сигнала находится в обратной зависимости от концентрации антигена.
- Принцип - иммобилизованые на твердой фазе специфические антитела + меченый ферментом и немеченый антиген конкуриру-ют за связь с антителом.
ХОД РЕАКЦИИ
Ингибиторлы ИФТ
В ингибиторном ИФА на твердой фазе иммобилизуют антиген.
Растворимые антитела как реагент конъюгированы с ферментом.
Определяемый антиген в испытуемой пробе конкурирует с
иммобилизованным на твердой фазе антигеном за растворимые антитела.
В итоге ферментативная активность, измеряемая на твердой фазе, обратно
пропорциональна концентрации определяемого вещества в пробе.
Бәсекелес
Ингибиторлы
Примером неконкурентного ИФА является «сэндвич»-метод. - К носителю с иммобилизованными антителами добавляют раствор, содержащий анализируемый антиген. В процессе инкубации образуется комплекс антиген-антитело.
- Добавляют меченные ферментом специфические антитела.
- Ферментативная реакция –при добавлении субстрата
- Определяют ферментативную активность носителя, которая пропорциональна начальной концентрации исследуемого антигена.
Достарыңызбен бөлісу: |