β-Галактозидаза (субстраты - дериваты β-галактозида, например 4-метилумбелиферил-β-D-галактозин). Щелочная фосфатаза (субстраты: 5-бромо-4-хлоро-3-индолил фосфат в комбинации с голубым тетразолиевым, продукт голубой, нерастворимый; р-нитрофенил фосфат, продукт желтый, растворимый, поглощает при 405 нм). Уреаза (субстрат - мочевина в комбинации с бромкрезолом пурпурным, продукт образуется очень быстро, пурпурного цвета, растворимый, поглощает при 590 нм).
Лизатные
смесь нативных антигенов
(лизированный или обработанный
ультразвуком возбудитель инфекции,
полученный в культуре)
Рекомбинантные —
полученные генно-инженерным способом
белки-аналоги белковых антигенов возбудителя;
Пептидные
— использующие химически
синтезированные фрагменты белков.
Общее направление развития ИФА-диагностикумов —
это направление от лизатных
тест-систем, которые принято называть
тест-системами первого поколения,
к рекомбинантным и пептидным.
«авидинбиотиновое» взаимодействие - Если по тем или иным биохимическим причинам заданный антиген или интересующее антитело не удается конъюгировать с меткой без существенных потерь в аффинности их связывания, то в конструкцию тест-системы пробуют вводить дополнительные компоненты.
- Авидин - белок, выделяемый из «белка» куриных яиц, биотин - витамин Н (он же кофермент R). Авидин по своей природе с высокой аффинностью (Kd ~ 10-15 M) связывает биотин.
- Биотин легко конъюгируется с флюоресцеином. Кроме того, и против авидина, и против биотина получены высокоаффинные моноклональные антитела.
- Сходным по аффинности сродством к биотину обладает также белок стрептавидин, выделяемый из грибов Streptomyces avidinii.
Преимущества метода ИФА:
Достарыңызбен бөлісу: |
