Управление биологической активностью почв

В племенном хозяйстве «Манзор» осеменено 63 овцематки породы гемпшир, из которых объягнилось 26 голов или 41,3 %, получено 27 помесных ягнят породы суффольк от барана № 937, в том числе 10 баранчиков и 17 ярок. В племенном хозяйстве «Мадина» на овцах породы казахская тонкорунная осеменено 39 овцематок, из которых объягнились 22, или 56,4 %, получено 22 помесных ягненка породы рамбулье от барана № 1169, в том числе 8 баранчиков и 14 ярок. В племенном хозяйстве «Бултбек» на овцах породы казахская тонкорунная осеменено 24 овцематки, из которых объягнилось 10 голов, или 41,7 % и получено 10 помесных ягненка породы рамбулье от барана № 1169, в том числе 3 баранчика и 7 ярок. В племенном хозяйстве «Антиген» на овцах породы казахская тонкорунная осеменено 39 овцематок, из которых объягнилось 13 голов, или 33,3 %, получено 15 помесных ягненка породы рамбулье от барана № 1169, в том числе 7 баранчиков и 8 ярок. В племенном хозяйстве «Тау Самал» осеменено 30 овцематок, из которых объягнилось 14 голов, или 46,7 % и получено 16 помесных ягнят породы авасси от барана № 1058, в том числе 7 баранчиков и 9 ярок. Всего в 5 хозяйствах осеменено 195 овцематок, из которых объягнилось 85 голов, или 43,6 %, оплодотворяемость составила от 33,3 % до 56,4 %, получено 90 помесных ягнят, в том числе 35 баранчиков и 55 ярок.

ТОО «КазНИИ животноводства и кормопроизводства»

В настоящее время химическая промышленность специально для криобиологии выпускает полипропиленовые пробирки, которые выдерживают многократное замораживание-оттаивание. В 2006 году мы начали исследования по разработке способа криоконсервации спермы в полипропиленовых пробирках объемом 2,0 и 5,0 мл с закручивающимися крышками.

В 70-е годы Касымов К. Т., Ашимов Ж., (1975) проводили замораживание спермы барана в полиэтиленовых пробирках объемом 1,5-2,0 мл с закрывающимися пробками. Для этого пробирки помещали на металлическую сетку и погружали в жидкий азот на 5-7 секунд, вынимали и выдерживали над поверхностью жидкого азота в течение 1-2 минут, затем их пересыпали в марлевый мешок и опускали в жидкий азот на хранение. Замороженную сперму оттаивали в водяной бане при температуре 40-45 °С в течение минуты. Однако в то время этот способ не нашел широкого применения, в основном, по двум причинам: 1) пластмассовая пробка вылетала из пробирки при оттаивании, если в пробирке имелся воздух, 2) подвижность оттаянной спермы была на 1-2 балла ниже подвижности спермы, замороженной на фторопластовой пластине в форме гранул.

Криоконсервация спермы в полипропиленовых пробирках по сравнению с соломинками объемом 0,25 мл или гранулами объемом 0,15-0,20 мл имеет следующие преимущества:

• 
  пробирки удобно маркировать, складировать и хранить;
  
• 
  пробирки объемом 2 и 5 мл позволяют значительно сократить затраты труда и времени при технологической обработке семени;
  
• 
  объем 2 и 5 мл удобен для цервикального ИО овец в больших отарах (10 и 25 доз соответственно);
  
• 
  такие пробирки можно использовать многократно;
  
• 
  в пробирках объемом 5 мл можно замораживать цельные эякуляты;
  
• 
  замораживание спермы непосредственно в сосуде Дьюара значительно экономит расход жидкого азота;
  
• 
  большие объемы замороженной спермы (2 и 5 мл) меньше травмируются при изменениях температуры, которые возникают во время сортировки, инвентаризации и других технологических процессов.
  

1) замораживание пробирок непосредственно в сосуде Дьюара для экономии жидкого азота;

2) двухэтапное оттаивание замороженной спермы для повышения ее подвижности.

В ВИЖе и нашем научно-исследовательском институте овцеводства для оттаивания гранул замороженной спермы используется трубчатый алюминиевый оттаиватель. Оттаиватель спермы состоит из верхней и нижней частей, соединенных друг с другом узкой щелью шириной 1 мм. В верхней части льдообразная масса замороженного семени оттаивает, получая тепло от стенок оттаивателя, и через щель стекает в нижнюю часть. Поскольку оттаявшая часть сразу же отделяется, она не служит переносчиком тепла от стенок оттаивателя к неоттаявшей сперме и не подвергается повторному охлаждению, которое происходило бы при контакте теплой оттаявшей спермы с льдообразной неоттаявшей массой.

Изучение динамики температуры при оттаивании спермы, замороженной в пробирках объемом 2 мл, в водяной бане при температуре 75 °С (n = 3) показало, что сперма достигала температуры 37,4 °С в среднем через 1 мин. 45 сек., или со скоростью 133,4 °С/мин. Через 45 сек. после начала оттаивания температура спермы достигала – 4,3 °С. На этом временном участке происходило превращение льда в жидкость.

Был сделан вывод, что сперму барана, замороженную в пробирке объемом 2 мл, необходимо оттаивать в горячей водяной бане с температурой 75 °С в течение 45-50 сек. и затем перекладывать ее в металлический оттаиватель, находящийся в водяной бане с температурой 38-40 °С.

Оттаивание спермы в пробирках объемом 5мл проводится аналогично, только на первом этапе время увеличивается до 1 минуты.

С помощью термометра Barnant 100 мы определили температурный режим замораживания семени в криогенных пробирках объемом 5 мл в сосуде Дьюара. Температура спермы на начальном этапе замораживания в течение первых 3-х минут понижалась медленно со скоростью примерно 5,1 ºС/мин. Затем температура понижалась быстрее примерно со скоростью 19,6 ºС/мин., через 5 мин. 45 сек. замораживания температура спермы достигла – 81,6 ºС, через 10 мин. она опустилась до –146,9 ºС. Был сделан вывод, что криогенные пробирки объемом 5 мл в сосуде Дьюара MVE 20/20 необходимо замораживать в течение 6 мин. и затем опускать их в жидкий азот.

Осенью 2007 года проведен опыт по изучению оплодотворяющей способности замороженно-оттаяной спермы в пробирках объемом 5 мл. В данном опыте сперму разбавляли сахарозо-комплексонатной средой патент № 5183 (С. А. Аузбаев, 1997 г.).

По результатам этого эксперимента был проведен опыт по изучению оплодотворяющей способности спермы, замороженной с указанными антибиотиками. При этом было сформировано 2 группы животных по 12 голов в каждой. Осеменение проводили цервикальным методом дозой 0,2 мл и замороженно-оттаянной спермы. В первой группе из осемененных 12-ти овцематок в срок объягнилось 5, получено 5 ягнят, оплодотворяемость спермы по ягнению составила 41,7 %, при плодовитости 100 ягнят на сто маток. Во второй группе, при осеменении 12 овец заморожено-оттаяной спермой объягнилось 8 овцематок, что составило 66,7 %. Получено 9 ягнят при плодовитости 113 %.

Таким образом, доказана возможность замораживания спермы в пробирках объемом 2,0 и 5,0 мл, а также получены приемлемые результаты ягнения овец, разбавленной сахарозо-комплексонатной средой.

Эффективность данной научной работы заключается в том, что разработана технология замораживания и оттаивания спермы баранов в полипропиленовых пробирках объемом 2,0 и 5,0 мл, которая обеспечивает до 70 % выживаемости сперматозоидов. Кроме того, пробирки удобно маркировать, сперма в них защищена от микробного загрязнения окружающей. Расход жидкого азота для замораживания 81 дозы в среднем 3 эякулята спермы, размещаемой на поверхности фторопластовой пластины составляет 2 литра, цена одного литра составляет 400 тенге, затраты на 2 литра 800 тенге. При замораживании 81 пайеты (соломинки) затраты жидкого азота составляют 2 г × 81 = 162 г жидкого азота, то есть снижаются в 12,3 раза. Стоимость 1 пайеты составляет 67 тенге, а 81 – 5427 тенге, тогда как при замораживании в пробирках расходуется 3 пробирки на 3 эякулята по цене 20 тенге, или же 60 тенге на 3 пробирки то есть снижаются в 90,5 раз, кроме того пробирки используются многократно.

УДК: 636.3.082.4

ТОО «КазНИИ животноводства и кормопроизводства»

Сотрудниками лаборатории получено полноценное потомство от неполовозрелых ярок путем прямой пересадки аспирированных яйцеклеток от донора реципиенту. В наших исследованиях аспирация фолликулов проводилась с помощью лапароскопа и вакуумного насоса из яичников непосредственно на овцах и ярках, а не из ампутированных яичников. В данном случае, овцы и ярки используются многократно в качестве доноров яйцеклеток без потери репродуктивной способности.

Вторым отличием наших исследований является то, что яйцеклетки на стадии метафаза II получали незадолго до овуляции, поэтому их не культивировали, а сразу же подсаживали овце-реципиенту, которую параллельно осеменяли внутриматочно. То есть мы исключили использования промежуточного реципиента. При таком подходе реципиент продуцировал собственную яйцеклетку, которая оплодотворялась вместе с подсаженной.

С целью стимуляции суперовуляции пременен препарат фоллимаг российского производства. Для этого 6 ярок 6-7 месячного возраста были синхронизированы с помощью влагалищных пессариев и обработаны препаратом фоллимаг в чистом виде и в сочетании с прогестероном (таблица 1).

В первой группе у 3 ярок в возрасте 6-7 месяцев обработанных, с использованием прогестерона, обнаружено 18 крупных фолликулов, в среднем по 6,0 фолликулов на донора, которые аспирированы с помощью вакуумного насоса.

После морфологической оценки пять яйцеклеток были пересажены 2 маткам реципиентам казахской курдючной породы, из которых 1 перегуляла, а одна объягнилась в срок и принесла одного ягненка, который на ¾ был породы авасси, так как ярка- донор была помесью с породой авасси, а реципиент был осеменен спермой чистопородного барана авасси.

Во второй группе у 3 ярок в возрасте 6-7 месяцев обработанных, без прогестерона, обнаружено 13 крупных фолликулов, в среднем по 4,3 фолликула на донора, которые аспирированы с помощью вакуумного насоса.

После морфологической оценки четыре яйцеклетки были пересажены 2 маткам реципиентам казахской курдючной породы, из которых 1 перегуляла, а одна объягнилась в срок и принесла одного ягненка, который на ¾ был породы авасси, так как ярка-донор была помесью с породой авасси, а реципиент был осеменен спермой чистопородного барана авасси.

Доказано, что инъекция 25 мг прогестерона в сочетании с обработкой ФСГ в дозе 25 ед. увеличивает количество овуляций на донора до 10,5.

Данная научная разработка обеспечивает сокращение интервала между поколениями от года до полутора лет.

Выяснено, что использование клеток гонад, как вектора, в биотехнологии рассматривается в качестве перспективного приема получения трансгенных животных, вследствие природной способности сперматозоидов поглощать чужеродную ДНК и переносить ее в яйцеклетку посредством оплодотворения. Культивирование спермы с ДНК не снижает оплодотворяемость, а полученный приплод имеет в полнее нормальные рост и развитие. Из 18 осемененных маток объягнились 15 и получено 15 ягнят, тогда как суягность реципиентов от пересадки микроинъецированных зигот составила 10,0 % (1/10), а приживляемость микроинъецированных зигот – 5,0 % (1/20).

Разработаны технологические элементы замораживания и оттаивания спермы баранов в полипропиленовых пробирках объемом 2,0 и 5,0 мл, которые снижают затраты труда и обеспечивают до 70 % выживаемости сперматозоидов.

Получена приемлемая оплодотворяемость овцематок и козоматок после лапароскопического осеменения импортным замороженным семенем баранов суффольк, рамбулье, авасси, полипэй и ост-фриз и замороженным семенем козлов шотландской кашмирской породы, которая в среднем составила 47,2-48,2 % и 65,0-75,0 % соответственно.

В селекционно-генетическом центре по овцеводству замороженным семенем баранов пород ост-фриз и полипэй с помощью лапароскопа было осеменено соответственно 20 и 19 овцематок многоплодного типа мясошерстной казахской породы. Весной 2007 года в срок объягнились 18 голов, или 46,2 %, и было получено 23 ягненка. Сперма баранов ост-фризской породы применялась для повышения молочности, а породы полипэй для сохранения многоплодия овец многоплодного типа мясошерстной казахской породы.

В крестьянском хозяйстве “Мадина” Панфиловского района Алматинской области замороженным семенем импортных баранов осеменено 49 овцематок. По результатам учета ягнения объягнилось 17 голов, что составило 34,7 %. Получено 23 ягненка, в том числе 12 баранчиков и 11 ярок. Плодовитость составила 135,3 %.

Совместно с сотрудниками отдела полутонкорунного овцеводства, проведено изучение роста и развития данных ягнят, отобранных в воспроизводящую группу. Живая масса 5 баранчиков в среднем составила – 58,0 кг (от 48 до 64 кг), а 4 ярок – 43,5 кг (от 38 до 49 кг).

Исследовано положительное влияние санирующего препарата цефазолин для хранения замороженной спермы. В эксперименте изучено влияние антибиотика отечественного производства на оплодотворяемость замороженно-оттаянной спермы, так как ранее применяемый препарат спермосан-3 снят с производства. Аналогом послужили исследования Н. М. Решетниковой, Т. А. Мороз, Т. И. Турко (ВНИИплем, 1997 г.), показавшие что наиболее оптимальными концентрациями, при которых не снижается показатель переживаемости спермиев, является 25 мкг/мл гентамицина и 100 ЕД / мл пенициллина.

Наилучшие показатели переживаемости спермы получены при санации спермы пенициллином с гентамицином 167,0 ± 25,47 и цефазолином в концентрации 1мг на 100мл среды – 214,0 ± 25,13.

По результатам этого эксперимента был проведен опыт по изучению оплодотворяющей способности спермы, замороженной с указанными антибиотиками. При этом было сформировано 2 группы животных по 12 голов в каждой. Осеменение проводили цервикальным методом дозой 0,2 мл и замороженно-оттаянной спермы. Результаты осеменения приведены в таблице 2.

№ п/п	Показатели	Антибиотики
		пенициллин с гентамицином	цефазолин
1.	Осеменено, овец	12	12
2.	Объягнилось, овец	5	8
3.	Ягнение, %	41,67	66,67
4.	Получено ягнят, гол.	5	9
5.	Плодовитость, %	100	113

жүктеу/скачать 12.89 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: