Современные биотехнологические процессы и иммунологические методы при промышленном производстве ветеринарных препаратов 03. 00. 23 биотехнология

Таблица 12

	П. мультоцида	Pleuropneumoniae (РА)	Str. Suis (РА)
	А В Д	5870 ГУ-19	Касли
серия	1:120 1:512 1:120	1:320 1:320	1:300
ТУ	1:32 1:128 1:32	1:100 1:100	1:100

Таким образом, контроль сыворотки показал, что по показателям стерильности, безвредности, активности полученная опытная серия сыворотки соответствует ТУ на препарат.

В течение последних 7 лет по нашим разработкам во ВНИТИБП были изготовлены и выпущены диагностикумы, представленные в таблице 13.

Таблица 13

Объем выпуска диагностикумов за 2001-2007 гг.

Наименова-ние диагнос-тикумов	2001	2002	2003	2004	2005	2006	2007
1. Набор для диагностики бешенства в РДП	374	500	270	456	415	402	443
2. Глобулин флюоресцирующий	330	500	485	616	520	71	598
3. Набор для диагностики хламидиоза с/х ж-х	2150	3100	2400	2693	2000	649	2306
4. Набор для диагностики ИРТ КРС ИФА «Диарин-С»	200	229	230	408	120	120	120

Улучшение экологической обстановки происходило за счет уменьшения опасности распространения инфекционного материала с учетом усовершенствования промышленных технологий изготовления биопрепаратов и своевременной улучшенной диагностики, приводившей к более быстрому и точному диагнозу инфекций ИРТ, ПГ-3, бешенства, хламидиоза, и за счет проведения своевременных срочных ветеринарно-санитарных мероприятий, а также при лечении животных с использованием ассоциированной лечебной сыворотки против пастереллеза, гемофилеза и стрептококкоза.

1. 
   Усовершенствованы и разработаны с использованием современного оборудования и технических средств механизации и автоматизации биотехнологические процессы культивирования микроорганизмов, клеток животных и вирусов производства высокоэффективных диагностикумов в ИФА для нужд ветеринарии.
   
2. 
   Использование современных автоматизированных биореакторов и методов оптимизации позволило при суспензионном культивировании культур клеток ПТ-80 и ВНК-21/13 получать их в концентрации до 3 млн кл в мл, а при псевдосуспензионном на 1-2 порядка выше.
   
3. 
   Использование гибких и блочно-модульных систем культивирования позволяет получать в высоких концентрациях вирусы (бешенство – в титрах 10^8-9ТЦД₅₀, ИРТ - 10⁸ТЦД₅₀) и микроорганизмы (пастереллы, гемофилы и стрептококки до 20-40 млрд кл в мл).
   
4. 
   Использование высокоэффективных методов и аппаратов (жидкостных сепараторов и осадительно-фильтрующих центрифуг на бесприводной основе с высокими технико-экономическими показателям) для разделения, очистки и концентрирования вирусов и микроорганизмов методами сепарирования, центрифугирования, фильтрования и ультроцентрифугирования позволяет получать очищенные специфические антигены при промышленном производстве биопрепаратов (диагностикумы, лечебные сыворотки и др.).
   
5. 
   Разработан высокоэффективный способ оценки токсичности масляных адъювантов и других компонентов с использованием первичнотрипсинизированных и перевиваемых культур клеток в 10-100 раз по чувствительности выше, чем с использованием белых мышей, что позволило повысить эффективность биопрепаратов при их применении при промышленном производстве лечебных сывороток и диагностикумов (бешенство, ИРТ, хламидиоз, респираторно-синцитиальная инфекция, ящур, болезнь Марека и другие) в процессе изготовлении гипериммунных сывороток.
   
6. 
   Установлено, что наиболее сложным и определяющим является четвертый период сперматогенеза в культуральной системе. С целью создания трансгенных свиней к оптимизации параметров культивирования для получения живых клеток, включая сперматогонии, необходимы дальнейшие исследования.
   

8. 
   Разработаны методы очистки, инактивации и концентрирования вирусов бешенства и инфекционного ринотрахеита и изучены их биологические свойства, которые сохранялись при получении специфических антигенов, используемых для получения гипериммунных сывороток при промышленном производстве диагностикумов.
   
9. 
   Усовершенствованы способы получения и очистки специфических антител и моноклональных антител при промышленной технологии разработки и производства для практического применения диагностикумов.
   

1.Разработан способ оценки токсичности масляных адъювантов и других компонентов с использованием первичнотрипсинизированных и перевиваемых культур клеток (2002), утвержденный А.М. Смирновым в отделе ветеринарной медицины РАСХН.

2.За период с 2001 по 2007 гг. выпущены для практического применения в АПК России диагностикумы против вирусов ИРТ ИФА – 500, бешенства РДП – 3500, РИФ – 4000 и хламидиоза РСК – 15000 наборов.
3.Разработаны и утверждены:

- Инструкция по изготовлению диагностикума ИФА против вируса ИРТ (2007), утвержденная директором ВНИТИБП.

- Инструкция по изготовлению диагностикума РДП против вируса бешенства (2001), утвержденная директором ВНИТИБП.

- Дополнение к инструкции по изготовлению диагностикума РИФ против вируса бешенства (2004), утвержденная директором ВНИТИБП и согласованная с Руководителем Департамента ветеринарии и директором ВГНКИ.

- Инструкция по изготовлению набора для диагностики хламидиоза сельскохозяйственных животных в РСК и РДСК (2002), утвержденная директором ВНИТИБП.

- Инструкция по изготовлению ассоциированных лечебных сывороток против пастереллеза, гемофилеза и стрептококкоза свиней (2007), утвержденная директором ВНИТИБП.

1. 
   Эрнст Л.Н., Моисеева Н.А., Самуйленко С.А. Особенности иммунной системы у трансгенных свиней.// Международная конференция, посвященная 80-летию Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина. - Москва.-1999.-с.67.
   
2. 
   Эрнст Л.К., Самуйленко С.А., Соловьев Б.В., Самуйленко А.Я. Об использовании клеточных систем поддержания и культивирования сперматогониев in vitro.// Всероссийская научно-практическая конференция «Научные основы производства ветеринарных биопрепаратов», посвященная 30-летию Всероссийского научно-исследовательского и технологического института биологической промышленности. – Щелково.-2000.-с.118-119.
   
3. 
   Эрнст Л.К., Самуйленко С.А., Зиновьева Н.А. Оценка эффективности использования ретровирусных векторов для переноса генов у сельскохозяйственных животных in vivo.// Всероссийская научно-практическая конференция “Научные основы производства ветеринарных биопрепаратов”, посвященная 30-летию Всероссийского научно-исследовательского и технологического института биологической промышленности. – Щелково.-2000.-с.119-120.
   
4. 
   Самуйленко С.А. Достижения биотехнологии в области создания трансгенных животных.// Всероссийская научно-производственная конференция «Разработка и освоение производства нового поколения лекарственных средств для животных и их применение в ветеринарной практике» в Федеральном государственном унитарном предприятии «Ставропольской биофабрике». – Ставрополь.-2000.-с.63.
   
5. 
   Бобровская И.В., Самуйленко С.А. Перспективы использования полимеразной цепной реакции (ПЦР) для типирования вируса болезни Марека.// Международная научно-практическая конференция «Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными, экзотическими и зооантропонозными болезнями животных» во Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной вирусологии и микробиологии. – Покров.-2000.-с.221-224.
   
6. 
   Самуйленко А.Я., Рубан Е.А., Гунин М.А., Самуйленко С.А. Исследование гибели клеток в процессе аэрации при глубинном культивировании в биореакторе.// Международная научно-практическая конференция «Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными, экзотическими и зооантропонозными болезнями животных» во Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной вирусологии и микробиологии. – Покров.-2000.-с.199-203.
   
7. 
   Эрнст Л.К., Рубан Е.А., Самуйленко А.Я., Еремец В.И., Самуйленко С.А. Культуры микроорганизмов и клеток животных-продуцентов биологически активных веществ.// Международная научная конференция «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии» во Всероссийском научно-исследовательском институте сельскохозяйственной биотехнологии. – Москва.-2000.
   
8. 
   Рубан Е.А., Соловьев Б.В., Самуйленко С.А., Самуйленко А.Я., Клюкина В.И. Некоторые проблемы глубинного культивирования клеток животных в биореакторах.// Биологическая научно-практическая конференция ВГНКИ. – Москва. – 2000.
   
9. 
   Самуйленко А.Я., Самуйленко С.А., Клюкина В.И., Рубан Е.А. Технология производства генноинженерных вакцин.// Биологическая научно-практическая конференция ВГНКИ. – Москва. – 2000.
   
10. 
    Самуйленко А.Я., Еремец В.И., Скичко Н.Д.. Яковлев А.Е., Самуйленко С.А., Казаков М.А. Получение противоящурных гипериммунных сывороток на использованных морских свинках.// Науковий вiсник Национального аграрного унiверситету. – Киев.-2001.-с. 264-265.
    
11. 
    Кузнецов Д.П., Самуйленко А.Я., Белоусов В.И., Кузнецова С.В., Самуйленко С.А. Тест-система для ранней иммуноферментной диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.// Науковий вiсник Национального аграрного унiверситету. – Киев.-2001.-с.269-271.
    
12. 
    Самуйленко С.А., Кузнецов Д.П. Функция лимфоцитов и макрофагов в клеточноопосредованном иммунитете при инфекционном ринотрахеите КРС.// Материалы международной конференции молодых ученых. – Щелково.-2001.-с. 15-18.
    
13. 
    Самуйленко С.А., Бобровская И.В., Кузнецов Д.П. Очистка индивидуальных гликопротеинов вируса инфекционного ринотрахеита с помощью моноклональных антител.// Материалы международной конференции молодых ученых. – Щелково.-2001.-с. 35-37
    
14. 
    Романенко М.Н., Бирюков А.Г., Клюкина В.И., Самуйленко С.А. Современное состояние диагностики и типирования лиссавирусов.// Материалы международной конференции молодых ученых. – Щелково.-2001.-с. 174-176.
    
15. 
    Самуйленко С.А., Бобровская И.В., Кузнецов Д.П. Исследование иммуногенных свойств отдельных гликопротеинов вируса ИРТ КРС.// Материалы международной конференции молодых ученых. – Щелково.-2001.-с. 38-41.
    
16. 
    Романенко М.Н., Клюкина В.И., Бирюков А.Г., Самуйленко С.А. Получение и применение альбумин-родамина конъюгата в диагностике бешенства животных методом флюоресцирующих антител.// Материалы международной конференции молодых ученых. – Щелково.-2001.-с. 50-52.
    
17. 
    Яковлев А.Е., Самуйленко С.А., Еремец В.И., Самуйленко А.Я., Скичко Н.Д., Казаков М.А., Большакова М.В. Получение афтозного материала от морских свинок, зараженных вирусом ящура типов А, О и С.// Материалы международной конференции молодых ученых «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов». – Щелково.-2001.-с. 182-184.
    
18. 
    Тетеричев В.И., Самуйленко А.Я., Рубан Е.А., Белоусов В.И., Бирюков А.Г., Самуйленко С.А. Эпизоотическая ситуация по бешенству в Тульской области и смежных областях Российской Федерации.// Материалы международной научно-практической конференции «Нейроинфекции: бешенство, гупкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота, Крейтфелдта-Якоба и другие прионные болезни; листериоз, болезнь Ауески, болезнь Тешена». – Покров.-2001.-с. 10-14.
    
19. 
    Тетеричев В.И., Самуйленко А.Я., Белоусов В.И., Солодилов А.Н., Бирюков А.Г., Самуйленко С.А., Рубан Е.А., Иванов В.С. Современное состояние заболеваемости бешенством домашних и диких животных в Тульской области.// Материалы международной научно-практической конференции «Нейроинфекции: бешенство, гупкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота, Крейтфелдта-Якоба и другие прионные болезни; листериоз, болезнь Ауески, болезнь Тешена». – Покров.-2001.-с. 14-17.
    
20. 
    Самуйленко А.Я., Албулов А.И., Уша Б.В., Бирюков А.Г., Фролов Ю.Д., Моисеев А.В., Самуйленко С.А., Моисеева Н.А., Зацерковная Е.Б., Ершов П.Б., Шинкарев С.М. Разработка новых технологий и расширение сферы применения биологически активных препаратов (БАП) из гидробионтов.// Материалы шестой международной конференции «Новые перспективы применения хитозана и хитина». – Москва.-2001.-с. 56.
    
21. 
    Самуйленко С.А., Самуйленко А.Я., Еремец В.И., Рубан Е.А., Соловьев Б.В., Бирюков А.Г., Албулов А.И., Большакова М.В., Васенина Т.И., Дадасян А.Я. «Способ определения токсичности и реактогенности масляных адъювантов и их составляющих компонентов». Патент №2184568 от 10.07.2002г.
    
22. 
    Яковлев А.Е., Самуйленко С.А., Самуйленко А.Я., Еремец В.И., Скичко Н.Д., Казаков М.А. Активность и специфичность в РСК гипериммунных сывороток, полученных высокоэффективным способом.// Материалы международной научно-практической конференции «Биолого-экологические проблемы заразных болезней диких животных и их роль в патологии сельскохозяйственных животных и людей». – Покров.-2002.-с. 323-324.
    
23. 
    Яковлев А.Е., Бирюков А.Г., Фролов Ю.Д., Самуйленко С.А., Самуйленко А.Я., Еремец В.И., Скичко Н.Д., Казаков М.А. Оценка комплемент связывающей активности (РСК) вируса ящура типов А, О и С, репродуцированного в различных биологических системах, с использованием экспериментальных серий гипериммунной сыворотки.// Материалы второй научной конференции с международным участием «Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера». – Новосибирск.-2002.-с. 169.
    
24. 
    Самуйленко С.А., Кузнецова С.В., Кузнецов Д.П. Получение очищенных и концентрированных препаратов вируса бешенства.// Материалы международной конференции молодых ученых «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов. – Щелково.-2002.-с. 25-27.
    
25. 
    Самуйленко А.Я., Сюрин В.Н., Воронин Е.С., Ямникова С.С., Сапегина Е.П., Соловьев Б.В., Фомина Н.В., Белоусова Р.В., Белоусов В.И., Еремец В.И., Самуйленко С.А., Моисеев А.В., Фомин К.Ю. Инфекционная патология животных. Хламидиозы (том V). – Монография. – Москва.-2003.
    
26. 
    Кузнецов Д.П., Самуйленко А.Я., Белоусов В.И., Кузнецова С.В., Самуйленко С.А. «Набор для ранней иммуноферментной диагностики инфекционного ринотрахеита». Патент №2196336 от 10.01.2003г.
    
27. 
    Эрнст Л.К., Самуйленко А.Я., Рубан Е.А., Соловьев Б.В., Самуйленко С.А., Еремец В.И. «Способ размножения стромальных клеток тестикул (семенников), мужских половых зародышевых клеток, сперматогоний, сперматоцитов и сперматозоидов». Патент №2196820 от 20.01.2003г.
    
28. 
    Кузнецов Д.П., Самуйленко А.Я., Белоусов В.И., Кузнецова С.В., Самуйленко С.А. «Набор для ретроспективной иммуноферментной диагностики инфекционного ринотрахеита животных». Патент №2196609 от 20.01.2003г.
    
29. 
    Самуйленко С.А. Использование флюоресцирующих моноклональных антител для выявления вируса бешенства.// Материалы международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов». – Щелково.-2003.-с. 51-53.
    
30. 
    Самуйленко С.А., Яковлев А.Е., Самуйленко А.Я., Казаков М.А. Анализ эффективности противоящурных вакцин по дополнительному показателю с помощью ИФА.// Материалы международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов». – Щелково.-2003.-с. 56-58.
    
31. 
    Самуйленко С.А., Рубан Е.А., Самуйленко А.Я. Влияние концентрации парциального давления СО₂ на жизнедеятельность микроорганизмов и клеток животных.// Материалы Международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов». – Щелково.-2003.-с.80-85.
    
32. 
    Самуйленко А.Я., Рубан Е.А., Самуйленко С.А. Влияние растворенного кислорода на рост культур микроорганизмов и клеток животных.// Материалы Международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов». – Щелково.-2003.-с. 77-80.
    
33. 
    Истомина С.В., Кузнецова С.В., Сазанова Э.Я., Кузнецов Д.П., Маслов Е.В. Тест-система для индикации вируса бешенства и антирабических антител методом ИФА.// XI Московский международный ветеринарный конгресс.– Москва.-2003.-с.244-245.
    
34. 
    Истомина С.В., Сазанова Э.Я., Кузнецова С.В., Кузнецов Д.П. Гемагглютинин вируса бешенства.// XI Московский международный ветеринарный конгресс.– Москва.-2003.-с.245-246.
    
35. 
    Самуйленко С.А., Истомина С.В., Сазанова Э.Я., Кузнецова С.В., Кузнецов Д.П. Инактивирующее действие bete-пропиолактона на вирус бешенства.// XI Московский международный ветеринарный конгресс.– Москва.-2003.-с.247-2468.
    
36. 
    Самуйленко А.Я., Яковлев А.Е., Самуйленко С.А., Казаков М.А. Использованеи иммуноферментного анализа для изучения поствакцинального иммунитета при ящуре.// Статья в журнале «Ветеринарная патология», № 1(5).– Москва.-2003.-с. 96-97.
    
37. 
    Самуйленко С.А., Сазанова Э.Я., Кузнецова С.В., Кузнецов Д.П. Гликопротеин вируса бешенства и протеин Ф (Staphylococcus aureus) в титровании методом ИФА антирабических антител.// Статья из сборника научных трудов, посвященная 75-летию Научно-исследовательского института микробиологии Московской области Российской Федерации. – Киров.-2003.-с.113-114.
    
38. 
    Самуйленко С.А., Сазанова Э.Я., Кузнецова С.В., Кузнецов Д.П. Температура в инактивации вируса бешенства.// Статья в журнале «Вестник РАСХН», №1. – Москва.-2004.-с.61-63.
    
39. 
    Самуйленко С.А., Сазанова Э.Я., Кузнецова С.В., Кузнецов Д.П. Влияние фенола на биологические свойства вируса бешенства.// Статья в журнале «Вестник РАСХН», №4. – Москва.-2004.-с.78-80.
    
40. 
    Самуйленко С.А., Сазанова Э.Я., Кузнецова С.В., Кузнецов Д.П. Действие -пропиолактона на гемагглютинин и РНК вируса бешенства.// Статья в журнале «Вестник РАСХН», №6. – Москва.-2004.-с.68-70.
    
41. 
    Акиньшина Т.В., Сазанова Э.Я., Самуйленко С.А., Кузнецова С.В., Кузнецов Д.П. Некоторые аспекты инактивации вируса бешенства химическими агентами.// Статья в материалах Международной научно-практической конференции молодых ученых «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов». – Щелково.-2004.-с.6-11.
    
42. 
    Гринь С.А., Кузнецова С.В., Кузнецов Д.П., Сазанова Э.Я., Акиньшина Т.В. Гуморальный иммунитет при вакцинации культуральной антирабической вакциной.// Статья в журнале «Ветеринария и кормление», №5. – Москва.-2005.-с.14-15.
    
43. 
    Гринь С.А., Сазанова Э.Я., Кузнецов Д.П., Кузнецова С.В., Акиньшина Т.В. Клеточный иммунитет при культуральной антирабической вакцинации.// Статья в журнале «Вестник РАСХН», №2. – Москва.-2004.-с.76-78.
    
44. 
    Клюкина В.И., Кочетов А.И., Гринь С.А. Изучение фракционного состава антирабических ФИТЦ-конъюгатов методом хроматографии.// Статья в материалах Международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов». – Щелково.-2005.-с.92-94.
    
45. 
    Акиньшина Т.В., Гринь С.А., Кузнецов Д.П., Кузнецова С.В., Сазанова Э.Я. Поликлональные антиидиотипические антитела к антигенам культурального вируса бешенства.// Статья в материалах Международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов». – Щелково.-2005.-с.261-266.
    
46. 
    Матвеева И.Н., Гринь С.А., Кузнецов Д.П., Мальгин Ю.А., Мальгина Т.А., Попова В.М. Выделение биологически активного протеина А для использования в биологических исследованиях.// Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 35-летию института «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов». – Щелково. – 2005. - с. 421-423.
    
47. 
    Матвеева И.Н., Гринь С.А., Кузнецов Д.П., Мальгин Ю.А., Мальгина Т.А., Попова В.М. Получение биологически активного протеина А для золотистого стафилококка.// Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 35-летию института «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов». – Щелково. – 2005. - с. 423-425.
    
48. 
    Самуйленко А.Я., Рубан Е.А., Дадасян А.Я., Гринь С.А. Перспектива развития биотехнологии прозводства ветеринарных препаратов.// Статья в журнале «Ветеринария и кормление»-2005.- №2.-с. 12-13.
    

49. 
    Самуйленко А.Я., Соловьев Б.В., Непоклонов Е.А., Воронин Е.С., Фомина Н.В., Гринь С.А., Белоусов В.И., Мельник Н.В., Рубан Е.А., Еремец В.И., Сапегина Е.П., Ямникова С.С., Цыбанов С.Ж. Инфекционная патология животных. – Монография (I и II том). – Москва. – 2006.
    
50. 
    Матвеева И.Н., Кузнецов Д.П., Кочиш Т.Ю., Кочиш И.И., Гринь С.А. Изучение репродукции респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота.// Статья в материалах международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных». – Москва.-2006.-с.277-278.
    
    
    жүктеу/скачать 370 Kb.
    
    Достарыңызбен бөлісу: