Учебное пособие для студентов медицинских вузов


КЛАССИФИКАЦИЯ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ



жүктеу/скачать 0.49 Mb.
бет3/3
Дата01.07.2016
өлшемі0.49 Mb.
#171754
түріУчебное пособие
1   2   3

КЛАССИФИКАЦИЯ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ



2-х компонентные простые 3-х компонентные простые
1. Реакция агглютинации (РА) 1. Реакция бактериолиза

2. Реакция преципитации (РП) 2. Реакция гемолиза



Сложные (косвенные) Сложные


1. Реакция нейтрализации (РН) 1. Реакция связывания комплемента (РСК)
2. Реакция торможения гемагглю- 2. Реакция непрямой иммунофлюоресценции

тинации (РТГА)


3. Реакция непрямой гемагглютинации 3. Радиоиммунологичсский метод

(РНГА)
4. Реакция прямой иммунофлю- 4. Иммуноферментный метод (РЭМА, ELISA)

оресценции.
5. Использование электронного парамагнитного

и ядерномагнитного резонанса



ОСНОВНОЙ ОПЫТ РСК





ИНГРИДИЕНТЫ (мл)

№ пробирок

1

2

3

4

5

6

7

Испытуемая сыворотка в разведении 1:5

0,2

-------

-------

0,2

-------

-------

-------

Отрицательная сыворотка

-------

-------

0,2

-------

-------

-------

-------

Антиген

0,2

0,2

0,2

-------

0,2

-------

-------

Физиологический раствор

-------

-------

-------

0,2

0,2

0,4

0,6

Комплемент в рабочей дозе

0,2

0,2

0,2

0,2

0,2

0,2

-------

Положительная сыворотка

-------

0,2

-------

-------

-------

-------

-------


ТИТРОВАНИЕ КОМПЛЕМЕНТА





№

пробирки

1

2

3

4

5

К контр
К эрит

ингредиенты

1

3% взвесь эритроцитов барана

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

2

Комплемент

0,5

0,1

0,2

0,3

0,5

0,5

-------

3

Гемолитическая сыворотка

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

-------

0,5

4

Физиологический раствор

0,45

0,4

0,3

0,2

-------

0,5

0,5




результаты:

задержка

гемолиз

гемол. титр

гемолиз

задержка гемол.

Через 2 ч. в термостат


РЕАКЦИЯ ГЕМОЛИЗА (применяется для пост. РСК)


№

пробирки

1 (опытная)

2 к/антигена

3 к/сыворотка

ингредиенты

1

3% взвесь эритроцитов барана

0,5

0,5

0,5

2

Гемолитическая сыворотка

0,5

0,5

0,5

3

комплемент (титр. 0,3)

0,3

0,3

-------

4

Физиологический раствор

-------

0,5

0,3


РСК (РЕАКЦИЯ БОРДЕ-ЖАНГУ)


№

пробирки

1 (опытная)

2 к/антигена

3 к/сыворотка

ингредиенты

1

Исследуемая сыворотка 6-то

(ин активированная)
0,5




0,5

оZ.

Гонококковый антиген

0,5

0,5




3

Комплемент (титр 0.3)

0,3

0,3

0,3

4

Физиологический раствор

0,2

0,7

0,7

5

Гемолитическая система

1,0

1,0

1,0



РЕЗУЛЬТАТЫ
Задержка гемолиза

гемолиз

гемолиз

РЕАКЦИЯ ФЛОКУЛЯЦИИ


ИНГРЕДИЕНТЫ (мл)

№ пробирок

1

2

3

4

5

6

7

Токсин содержащий 20Lf в 1 мл

2

2

2

2

2

2

------

Исследуемая сыворотка

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

------

0,6

Результаты по инициальной флокуляции























РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ С БУАВЕНОВСКИМ АНТИГЕНОМ




ИНГРЕДИЕНТЫ (мл)

№ пробирок

1

2

3

4

Тифозная сыворотка

1,0

------

------

------

Дизентерийная антисыворотка

------

1,0

------

------

Нормальная сыворотка

------

------

1,0

------

Физиологический раствор

------

------

------

1,0

Тифозный антиген (по Буавену)

0,5

0,5

0,5

0,5

РЕЗУЛЬТАТЫ














ТЕСТИРОВАНИЕ ИММУННОЙ СЫВОРОТКИ


ИНГРЕДИЕНТЫ (мл)

№ пробирок

1

2

3

4

5

6

к/антигена
7 к/сыворотка

Физиологический раствор (мл)

1

1

1

1

1

1

1

Исследуемая сыворотка в разведении 1:50 (мл)

1

1

1

1

1

------

1

Полученное разведение сыворотки

1:100

1:200

1:400

1:800

1:1600







Взвесь бактерий (капли)

2

2

2

2

2

2

------

РЕЗУЛЬТАТЫ:























РЕАКЦИЯ БАКТЕРИОЛИЗА




ПРОБИРКИ

ИНГРЕДИЕНТЫ
1 (опытная)

2 к/антигена

3 к/сыворотка

Взвесь исследуемой культуры

0,5

0,5

0,5

Иммунная холерная сыворотка

0,5

------

0,5

Комплемент по титру (титр 0.3)

0,3

0,3

------

Физиологический раствор

------

0,5

0,3

Через 2 ч. посев на чашки Петри.



СХЕМА


1.СХЕМА РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ (развернутая)


Разведения сыворотки

1/50

1/100

1/200

1/400

1/800

Контр.

сыворотка
Контр.

антигена


Ингредиенты

Физиологический раствор

-------

1,0

1,0`I

1,0

1,0




1,0

Сыворотка больного 1/50

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

-------

Антиген (4 млрд м. т. в 1 мл.

2-3 к.

2-3 к.

2-3 к.

2-3 к.




-------

2-3 к.

УЧЕТ

2 часа при 37С, затем 18-20 часов при комнатн. тем-ре




++

++

++

++

------

------

------










++

++




Дез. раствор

2. ПОСТАНОВКА РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ НА СТЕКЛЕ (пластинчатая)


Агглютипирующая сыворотка

Физиологический раствор








Антиген


Антитело

А

В


А) наличие агглютинации




В) отсутствие агглютинации





Схема постановки реакций энзим-меченых антител




ТИТРЫ

-+КОМПОНЕНТЫ
1/2

1/4

1/8

1/16

1/32

К сыв-ки

К буф-го р-ра

К конью-гата

БУФЕРНЫЙ РАСТВОР

0,05

0,05

0,05

0,05

0,05

-------

0,05

-------

Сыворотка больного гепатитом (на HBS антиген

0,05

0,05

0,05

0,05

0,05

0,05

-------

-------


В дез. раствор


Сенсибилизация пластин в течении 18 часов сывороткой больного, 3-х кратное отмывание буферным раствором




1

2

3

4

5

6

7

8

Коньюгат Ат HBS + пероксидаза

0,05

0,05

0,05

0,05

0,05

-----

-----

0,05

Контакт в течении 1 часа при 37С0, 3-х кратное отмывание буферным раствором

Субстрат

(5-аминосалициловая кислота + Н2О2
0,05

0,05

0,05

0,05

0,05

0,05

0,05

0,05

Учет реакции

+

+

+

+

-----

-----

-----

-----

Примечание: при положительной реакции (+) исследуемый HBS-антиген в сыворотке больного вирусным гепатитом прочно связывается с коньюгатом (Ат HBS+ пероксидаза). А затем учитывается по окраске активность пероксидазы после добавления субстрата (5-аминосалициловая кислота + Н2О2).

При отрицательной реакции (-) окраска субстрата не происходит.











ЗАДАЧИ.
1. На внедрение микробов, чужеродных клеток и посторонних корпускулярных частиц организм реагирует ответной реакцией, которая выражается в поглощении, переваривании и тем самым обезвреживании вредного начала мезодермальными клетками, в первую очередь лейкоцитами. Как это называется?

2. Как называются неспецифические противовирусные вещества, содержащиеся в сыворотке, слюне, секретах эпителия дыхательного и пищеварительного трактов разных органов и тканей?

3. Из лейкоцитов выделено неспецифическое противовирусное вещество, препятствующее репродукции вируса. Как называется это вещество и на какой компонент вируса оно действует?

4. Как называется фагоцитоз, при котором микробы, находящиеся внутри фагоцитов, не только не погибают, а иногда даже размножаются? Для каких возбудителей он характерен?

5. Какие пять форм специфических реакций известны, из которых складывается собственно иммунологическая реактивность?

6. Для определения неполных резус - антител использована реакция. Как она называется по фамилии автора и на чём она основана?

7. Как называется иммуноглобулин, который не переходит через плаценту, молекулярная масса 950 000?

8. На фиксированный мазок - отпечаток вначале наносят специфическую сыворотку, а затем антивидовую, меченную ферментом сыворотку. Для обнаружения результатов на мазок наносят субстрат, разлагающийся ферментом. Как называется эта реакция?

9. На поверхность стекла или пластика наливают расплавленный агар, предварительно смешанный с высокоактивной сывороткой. В застывшем агаре делают лунку (обычно до мм в диаметре) и заполняют её точным количеством испытуемого антигена. Опыт проводят во влажной камере при постоянной температуре. Антиген диффундирует из лунок радиально в агаровый гель, смешанный с антителами, в результате образуются кольца преципитации. Диаметр этих колец прямо пропорционален концентрации
антигена. Как называется эта реакция? Для чего она применяется?

10.Реакцию ставят с целью выявления специфических антител в сыворотке больного. Человеческие эритроциты 0 группы, предварительно обработанные р-ром танина в разведении 1 : 20 000 и нагруженные антигеном, вносят в луночки плексигаловой панели, в которых приготовляют разведения сыворотки больного. Результаты учитывают через 2 часа инкубации при 370С. Как называется эта реакция? Как оцениваются её результаты.



ОТВЕТЫ

1. Фагоцитоз.

2. Ингибиторы

3. Интерферон. На нуклеиновую кислоту вируса.

4. Незавершённый. Возбудители туберкулёза, гонореи, сибирской язвы и т.д.

5. а) выработка антител, б) иммунологическая память, в) иммунологическая толерантность, г) гиперчувсвительность немедленного типа, д) гиперчувсвительность замедленного типа.

6. Реакция Кумбса (антиглобулиновый тест). Она основана на применении антиглобулиновой сыворотки, которая служит мостиком для соединения неполных антител, фиксированныхуна корпускулярных антигенах (эритроциты, бактерии).

7. Иммуноглобулин М.

8. Иммуноферментный метод (РИД). Используют для определения содержания растворимых антигенов, иммуноглобулинов всех классов, а также различных токсинов и ферментов.

9. Реакция радиальной иммунодиффузии по Манчини. Реакция широко применяется для количественного определения иммуноглобулинов.



10. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). Отрицательный результат гемагглютинации – эритроциты оседают в виде компактной точки. При положительном результате - эритроциты равномерно усеивают всё дно луночки в виде зонтика.
жүктеу/скачать 0.49 Mb.

Достарыңызбен бөлісу:
1   2   3



©dereksiz.org 2024
әкімшілігінің қараңыз
    Басты бет