Биохимия растений

106 
РАБОТА 30 
Разделение пигментов листа 
хроматографическим методом (по Цвету) 
Метод бумажной хроматографии широко применяется в насто-
ящее время для разделения (и последующей идентификации) смеси 
веществ (сахаров, аминокислот и др.) на отдельные компоненты. 
Разделение пигментов методом бумажной хроматографии было 
впервые предложено М.С. Цветом и обусловлено различной абсорб-
цией отдельных пигментов на бумаге. Раздельные пигменты могут 
быть в дальнейшем количественно определены с помощью фотоэлек-
трокалориметра или спектрофотометра. 
Цель работы: ознакомиться с методом одномерной бумажной 
хроматографии. 
Объект исследования: свежие или сухие листья крапивы (Urti-
ca dioica). 
Ход работы. Взять навеску 2-3 г листьев растений. Ножницами 
или специальными шаблонами нарезают листья так, чтобы средняя и 
крупные жилки не попадали в пробу. Навеску листьев растирают в 
фарфоровой ступке, прибавив предварительно на кончике скальпеля 
СаСОз (для нейтрализации кислот клеточного сока) и небольшое ко-
личество кварцевого песка (для лучшего размельчения листьев, раз-
рушения клеточных оболочек). Хорошо растѐртую массу заливают в 
ступке 95 %-ным ацетоном (5-10 мл.) и растирают снова. После не-
продолжительного отстаивания жидкость сливают по стеклянной па-
лочке (по возможности без осадка) в воронку со стеклянным пори-
стым фильтром, укреплѐнную в колбе Бунзена, и фильтруют с помо-
щью масляного насоса. Эту часть работы выполняет дежурный. К 
растѐртой массе снова прибавляют 3-5 мл ацетона, растирают в тече-
ние нескольких минут и фильтруют через ту же воронку. 

107 
Затем берут полоску хроматографической бумаги шириной 1,5-
2,0 см. и длиной 20 см и, держа еѐ вертикально, опускают на несколь-
ко секунд в бюкс. 
При кратковременном погружении вытяжка поднимается по бу-
маге на 1,0-1,5 см. Бумагу вынимают и высушивают. 
Эту операцию повторяют 5-7 раз до тех пор, пока на стартовой 
черте не образуется яркая полоса. После образования зелѐной полосы 
конец бумажной полоски опускают в чистый ацетон, чтобы все пиг-
менты поднять на 1,0-1,5 см. Таким образом, на хроматографической 
бумаге получают окрашенную зону, в которой сконцентрирована 
смесь пигментов, подлежащих разделению. Полоску бумаги хорошо 
высушивают в потоке воздуха (до исчезновения запаха ацетона). 
Полоску хроматографической бумаги в строго вертикальном 
положении помещают в цилиндр, на дно которого налит слой петро-
лейного эфира, чтобы растворитель касался неокрашенной зоны и, 
чтобы она не касалась стенок сосуда. Цилиндр закрывается хорошо 
притѐртым стеклом. Через 15-20 минут растворитель поднимается по
Каротин (желтый пигмент) 
Ксантофилл 
 
 
 
Хлорофилл – а (темно-зеленого цвета) 
Хлорофилл b – (светло-зеленого цвета) 
Стартовая полоса 

жүктеу/скачать 1.32 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: