Мусабеков айдос туменбаевич



бет9/11
Дата07.07.2016
өлшемі3.93 Mb.
#182486
түріДиссертация
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11

Таким образом из изученных тиоловых реагентов (цистеамин, цистеин и меркаптоэтанол) наиболее положительное влияние на сперматозоиды хряков оказал β-меркаптоэтанол. При добавлении этого реагента к консервирующей глюкозо-хелато-цитратно-желточно-калиевую среду у сперматозоидов после оттаивании, обнаружено достаточно высокая функциональную полноценность и пригодность к использованию для осеменении свиноматок.


Рисунок 7- Влияние β-меркаптоэтанола на качественные показатели спермы

3.3.2 Влияние унитиола на активность и абсолютную показатель живучести криоконсервированных сперматозоидов

Ранее нами указано, что (раздел 3.1.2), что унитиол в широком диапозоне концентрации увеличивает абсолютную показатель живучести сперматозоидов при кратковременном хранении спермы хряков. Реагент снижает число сперматозоидов с поврежденными акросомами, стабилизирует содержание сульфгидрильных групп гамет и плазмы спермы, сохранности активности тиоловых ферментов и увеличивает абсолютный показатель живучести и оплодотворяющую способность сперматозоидов.

На основании вышеуказанных положительных влиянии реагента ан сперму хряков нами принято решение об изучении влияние унитиола на сохранность функциональной полноценности заморожено-оттаянной спермы хряков.

Влияние унитиола на активность и время переживания сперматозоидов при замораживании исследовались в концентрациях 0,014%; 0,021%; 0,028% и 0,035%. Полученные результаты по влиянию унитиола на активность и абсолютную показатель живучести криоконсервированных сперматозоидов приведены в таблице 47. Результаты исследования показывают как в таблице 47, что активность сперматозоидов замороженного в среде с унитиолом, после оттаивания значительно выше, чем в контроле.

Таблица 47- Влияние унитиола, добавленного в среду ГХЦЖК на активность и абсолютную показатель живучести (АПЖ) сперматозоидов после их замораживания-оттаивания



Концент-рация унитиолоа в % в среде

Активность сперматозоидов

(А)


АПЖ (сохранение до 5% клеток)

АПЖ

(потеря подвижности)



в баллах

А0 - Ак

(D+md)


Р

в % к контрою

в часах

АПЖ0

- АПЖк

(D+md)


Р

в % к контрою

В часах

АПЖ0

- АПЖк

(D+md)


Р

в % к контрою

0 (контроль)

1,78

-

-

100,0

0,68

-

-

100,0

1,95

-

-

100,0

0,14

2,49

0,71±0,1

0,05

139,8

1,09

0,41±0,1

0,01

160,2

2,35

0,4±0,1

0,05

120,5

0,21

2,61

0,83±0,2

0,01

146,6

1,31

0,63±0,1

0,01

192,6

2,75

0,8±0,1

0,01

141,1

0,28

2,37

0,59±0,1

0,05

133,1

1,08

0,40±0,1

0,01

158,8

2,55

0,6±0,1

0,01

130,7

0,35

2,01

0,23±0,1

0,10

112,9

-

-

-

-

-

-

-

-

Достоверное увеличение активности сперматозоидов наблюдается под воздействием унитиола в концентрациях 0,014; 0,021; 0,028%. Наибольший процент подвижных сперматозоидов после замораживания-оттаивания спермы получено при использовании унитиола в концентрации - 0,021%.

Очень важным показателем жизнеспособности сперматозоидов является абсолютный показатель живучести, так как этот показатель высоко коррелирует с оплодотворяющей способностью половых клеток.

Абсолютный показатель живучести сперматозоидов, после замораживания-оттаивания в среде с унитиолом (при всех испытанных концентрациях), тоже выше времени переживания чем в контроле. Наибольшее увеличение абсолютного показателя живучести (138%) наблюдается при концентрации унитиола 0,021%. Еще большая разница между опытом и контролем обнаруживается при учете абсолютного показателя живучести сперматозоидов, до сохранения подвижности 5% половых клеток (табл. 48).

При концентрации унитиола 0,021% эта разница составляет 85,9%. Концентрация унитиола 0,014% хотя и увеличивает количество выживших после замораживания-оттаивания клеток, достоверного увеличения абсолютную показатель живучести гамет их (до потери подвижности) не вызывает. Действие же унитиола в концентрации 0,035% достоверно увеличивает только абсолютную показатель живучести гамет (рис. 8).
Таблица 48- Влияние унитиола, добавленного в среду ГХЦЖК на функциональную полноценность заморожено-оттаянной спермы хряков

Показатели



Варианты опыта

ГХЦЖК (контроль)

ГХЦЖК +

унитиол


(опыт)

Разница

±


в

%


Подвижность, баллов

3,0±0,02

3,2±0,02

+ 0,2

6,7

Скорость движения, мкМ/с

96,4±7,21

96,8±6,87

+ 0,4

0.4

Абсолютный показатель живучести, ч

2,6±0,01

3,7±0,03

+ 1,1

42,3

Время редукции метиленовой сини, мин

17,9±0,92

14,9±0,08

- 3,0

-20,1

Сохранность SН-групп, %

61,9±5,13

72,6±6,52

+ 10,7

17,3

Число поврежденных акросом, %

32,5±2,89

21,9±1,23

- 10,7

-48,4

Активность общих дегидролгеназ, мин

53,2±4,11

45,8±3,35

- 7,4

-16,1

Активность цитохромоксидазы, мин

5,8±0,06

17,6±0,07

+ 11,8

303,4


Рисунок 8- влияние различных разбавителей на сперму хряков
Анализ таблицы 48 показывает, что после криоконсервации активность сперматозоидов с унитиолом выше на 0,2 балла или 6,6%, соответственно абсолютный показатель живучести на 1,1 часа или 42,3%; сохранность сульфгидрильных групп у сперматозоидов больше на 10,7 %; число поврежденных акросом ниже на 10,6%. В среде с унитиолом активность общих дегидролгеназ равна 45,8±3,35 мин, следовательно у гамет обменные процессы протекает более замедленном режиме.

Таким образом, полученные данные в ходе исследования показывают, что тиоловое соединение - унитиол способен сохранять целостность структурных элементов половых клеток, от воздействия сверхнизких температур и вполне может быть использован при разработке новой среды для криоконсервации половых клеток хряков-производителей,


3.3.3 Изучение влияние дитиотреитола на функциональную полноценность заморожено-оттаянной спермы хряков

Экспериментальные работы по исследованию влияния тиоловых соединений на устойчивость сперматозоидов при замораживании-оттаивании спермы хряков-производителей проведены в широком диапазоне концентраций реагентов. Так в частности - цистеамин 10-2 -10-6М, цистеин 10-2 ... 10-7М и меркаптоэтанол - 10-2 - 3·10-4 М. Опыты проводили на расщепленных эякулятах: эякулят делили на несколько частей и разбавляли средой ГХЦЖКМ с добавлением тиолового соединение, в испытываемых концентрациях. Контролем служила та же среда без тиоловых соединений.

Как видно из таблицы 49, антиоксидант дитиотреитол при хранении половых клеток 37°С оказывает определенное защитное влияние на замороженно-оттаянной сперматозоиды хряков. Наиболее положительное криозащитное действие получено при внесении дитиотреитола в концентрации 1·10-5 М. При указанном концентрации активность заморожено-оттаянных сперматозоидов находились на уровне 5,0-5,1 баллов, у 70-71% сперматозоидов акросомы были неповрежденными, а абсолютный показатель живучести сперматозо­идов (при 37°С) достигло 80,2-81,3 усл. ед.
Таблица 49- Влияние дитиотреитола на абсолютный показатель живучести и сохранности акросом оттаянных сперматозоидов


Концентрация дитиотреитола,

в молях


Подвижность от­таянных сперма­тозоидов, %

Сперматозоиды с неповрежденной акросомой, %

Абсолютный показатель живучести сперматозо­идов при 37°С, усл. ед.

Контроль

(без добавки)



36+0,6

51+3,2

64+2,6

1·10-2

39+1,9

59+3,6

74+3,7

1·10-3

45+2,1 *

66+3,7 *

74+3,4

1·10-4

47+3,3 *

70+4,3 *

78+4,8 *

1·10-5

51+1 ,2*

71+2,8 *

81+3,5 *

1·10-6

44+2,1

68+4,2 *

77+3,9 *

1·10-7

41+2,8

69+3,7 *

75+3,4 *

*= Р<0,05

Влияние дитиотреитола на активность и абсолюную показатель живучести (АПЖ) сперматозоидов после их замораживания-оттаивания при хранении в условиях +18°С представлены в таблице 50. Все иученные концентрации реагента (1·10-2 -1·10-7 М) оказали положительное влияние на криоконсервированной сперме хряков. Но особо криустойчивость половым клеткам оказали концентрация дитиотреитола 1·10-4 -1·10-5 М. При этих дозах реагента активность и абсолюную показатель живучести (АПЖ) сперматозоидов после их замораживания-оттаивания повышаются на 25,1 – 27,3%.

В следующей серии экспериментов, таблица 51, изучено совместимость дитиотреитола со средой ГХЦЖК. После добавления дитиотреитола (в концентрации 1·10-5 М) в среду ГХЦЖК скорость движения сперматозоидов составила в среднем 96,2 мкМ/с или примерно на уровне контрольной группой.

Дитиотреитол заметно улучшает абсолютный показатель живучести гамет. Так в частности в опытных образцах на в среднем составила 3,4 ч. или выше на 36.0%.


Таблица 50-. Влияние дитиотреитола на активность и абсолюную показатель живучести (АПЖ) сперматозоидов

после их замораживания-оттаивания

Концентрация дитиотреитола, М



Активность через



Абсолютный показатель

живучести



0,5 часа



2 часа

в часах


(М±m)

%

Р


М±m

Р

М±m

Р

ГХЦЖК –контроль


33,9±2,2

-

12,8±1,6

-

5,01±0,4

100,0

-


1·10-2

34,3±2,1

0,05

13,2±1,5

0,05

5,26±0,5

104,9

0,05

1·10-3

39,0±2,7

0,05

20,4±1,3

0,05

6,05±0,3

120,7

0,05

1·10-4

40,3±2,8

0,01

23,1±1,1

0,01

6,27±0,8

125,1

0,01

1·10-5

42,8±2,4

0,01

24,9±1,7

0,01

6,38±0,9

127.3

0,01

1·10-6

38,7±2,1

0,05

21,7±1,8

0,05

5,68±0,8

113,4

0,02

1·10-7

33,9±2,4

0,05

13,2±1,2

0,05

5,12±0,6

102,2

0,05

Таблица 51- Влияние дитиотреитола (1·10-5 М), добавленного в среду ГХЦЖК на функциональную полноценность заморожено-оттаянной спермы хряков



Показатели



Варианты опыта

ГХЦЖК (контроль)

ГХЦЖК +

дитиотре-итол

(опыт)


Разница

±



В

%






Подвижность, баллов

3,0±0,02

3,1±0,01

+ 0,1

3,4




Скорость движения, мкМ/с

95,8±8,05

96,2±7,64

+ 0,4

0.4




Абсолютный показатель живучести, ч

2,5±0,01

3,4±0,02

+ 0,9

36,0




Время редукции метиленовой сини, мин

16,7±0,45

14,5±2,03

- 2,2

-15,2




Сохранность SН-групп, %

62,2±5,13

70,4±6,52

+ 8,2

13,2




Число поврежденных акросом, %

31,8±3,04

23,7±1,86

- 8,1

-34,2




Активность общих дегидролгеназ, мин

54,4±6,06

48,7±4,63

- 5,7

-11,2




Активность цитохромоксидазы, мин

6,8±0,16

14,4±0,09

+ 7,6

211,7



Обнаружено также, что при добавлении дитиотреитола достаточно на высоком уровне сохраняются и внутриклеточных сульфгидрильных групп (70,4%). С дитиотреитолом активность общих дегидролгеназ особо не изменются, в то же время активность цитохромоксидазы увеличивается более чем в 2 раза.

Таким образом, добавленние дитиотреитола в среду ГХЦЖК положительно влияют на сохранения функциональной полноценности спермы хряков, следовательно. реагента можно использовать при разработке новой среды для криоконсервации эякулятов в качестве одного из криопротекторов.

3.3.4 Исследования совместного действия мочевины и унитиола на функциональную полноценность заморожено-оттаянной спермы хряков

Учитывая, что предедующих исследованиях у оттаянных сперматозоидов наибольшее увеличение подвижности было получено при введение в среду мочевины, а увеличение абсолютного показателя живучести - под воздействием унитиола, принято решение по изучению совместного влияния этих веществ на половые гаметы хряков.

Эксперименты проведены в двух вариантах: первый - на эякулятах разбавленных средой с унитиолом и мочевиной в отношении 1:1 и второй - на сперматозоидах отделенных от плазмы с полной заменой ее средой с унитиолом и мочевиной (ГХЦЖКУМ). Результаты опытов представлены в таблице 52.

Как следует из этой таблицы, все концентрации мочевины в сочетании с унитиолом дают достоверное повышение активности и абсолютный показатель живучести сперматозоидов. Однако, наиболее высокие результаты по времени переживания сперматозоидов при температуре +37 С после замораживания-оттаивания наблюдается при концентрациях мочевины 0,30%. Отделение плазмы благоприятно сказывается на активности и времени переживания сперматозоидов после оттаивания. Процент подвижных клеток также выше в сперме, замороженной после удаления плазмы и замены ее разбавителем, чем в разбавленной 1:1. Так, при сочетании унитиола в концентрации 0,014% и мочевины 0,30% в сперме, замороженной без отделения плазмы, количество перенесших замораживание сперматозоидов составляет 29% (2,9 балла) против 20% (2,0 балла) в контроле без мочевины и унитиола; ВП сперматозоидов увеличивается от 1,7 часа в контроле до 2,3 часа в опыте или на 35%.

При замораживании в этой же среде сперматозоидов, отделенных от плазмы, процент подвижных клеток достигает 44%, т.е. более чем в два раза превышает подвижность сперматозоидов в контрольной среде (ГХЦЖК) с плазмой.

Абсолютный показатель живучести клеток при этом увеличивается до 5,06 часа против 1,7 часа в контроле, что составляет 197,6%. При сравнении с контрольным вариантом, где сперматозоиды также отделены от плазмы, увеличение абсолютного показателя живучести составляет 156%.

При сочетании концентраций мочевины: 0,15; 0,30; 0,45% с 0,028% унитиола результаты опытов с разбавленной спермой достоверно не отличается от результатов при сочетании 0,014% унитиола с вышеназванными концентрациями мочевины. Однако в опытах со сперматозоидами, отделенными от плазмы (с заменой ее на среду), при концентрациях 0,028% унитиола и 0,30% мочевины, время переживания клеток выше чем в среде с концентрацией унитиола 0,014% и мочевины 0,30% и составляет 6 часов, что более чем в 3,5 раза превышает абсолютный показатель живучести контрольных сперматозоидов, не отделенных от плазмы, и на 87% выше, чем в контроле с отделенной плазмой. Активность сперматозоидов после оттаивания при этом составляет 4,8 балла (48%) против 2,0 балла (20%) в первом контроле и 2,6 балла (26%) - во втором (табл. 53).

Если учитывать абсолютный показатель живучести сперматозоидов по сохранению подвижности 5% клеток, то видно, что в данном случае концентрация мочевины 0,30% в сочетании с 0,028% унитиола дает наилучший эффект увеличение абсолютного показателя живучести равный 3,6 часа, что выше времени переживания, учитываемого по полному прекращению подвижности в контрольных вариантах.

Изучено влияние совместного введение унитиола и мочевины в среду ГЦХЖК на функциональную полноценность заморожено-оттаянной спермы хряков (табл.54). По сравнению с контролем при совместном ведении реагентов абсолютный показатель живучести увеличиваются на 36,0%, сохранности сульфгидрильных групп на 13,2 %, число поврежденных акросом уменшаются на 34,2% и активность цитохромоксидазы повышаются на 111,7% (рис 9).




Рисунок 9- Влияние совместного введение унитиола и мочевины в среду ГЦХЖК на функциональную полноценность заморожено-оттаянной спермы хряков

Таблица 52 Совместное влияение унитиола и мочевины в среде ГЦХЖК при замораживании спермы хряка на активность и абсолютный показатель живучести сперматозоидов после оттаивания





Вещество

Сперма разбавленная 1:1

Замена плазмы средой

Унитиол

в %


Мочеви-на в %

Активность

Абсолютный показатель живучести

Активность

Абсолютный показатель живучести

в баллах

А0к

D±md



Р

в часах

D±md

%

Р

в баллах

А0к

D±md



Р

в часах

D±md

%

Р

0

контроль


0

контроль


2,0

-

-

1,7

-

100




2,6







3,2

-

100




0,014

0,15

2,8

0,8±0,4

0,1

1,9

0,2±0,1

111

>0,1

4,0

1,4±0,7

>0,1

5,2

2,0±0,3

158

<0,01

0,30

2,9

0,9±0,2

0,05

2,3

0,6±0,2

1,5

<0,05

4,4

1,8±0,6

<0,05

5,1

1,9±0,3

155

<0,01

0,45

2,5

0,5±0,3

0,1

2,1

0,4±0,2

124

>0,1

4,0

1,4±0,6

>0,05

4,8

1,6±0,4

150

<0,01

0,028

0,15

2,9

0,9±0,3

0,05

2,2

0,5±0,1

129

>0,01

4,6

2,0±0,7

<0,05

5,8

2,6±0,3

181

<0,01

0,30

2,8

0,8±0,3

0,05

2,3

0,6±0,2

135

<0,05

4,8

2,2±0,6

<0,01

6,0

2,8±0,9

187

<0,05

0,45

2,6

0,6±0,3

0,1

2,2

0,5±0,2

127

>0,05

3,6

1,0±0,3

<0,05

5,4

2,2±0,8

164

>0,05

Таблица 53- Абсолютный показатель живучести сперматозоидов (по сохранению 5% подвижности) в среде с унитиолом и мочевиной без плазмы после замораживания –оттаивания



Концентрация унитиола (%)


Концентрация

мочевины (%)


Абсолютный показатель живучести, в часах

Р


Абсолютный показтель

живучести (%)


М

D±md


0

(контроль)



0

1,7

-

-

100

0,014


0,15

3,4

1,7±0,22

<0,01

200

0,30

3,1

1,4±0,40

<0,05

182

0,45

3,0

1,3±0,23

<0,01

176

0,028


0,15

3,5

1,8±0,39

<0,01

206

0,30

3,6

1,9±0,21

<0,01

211

0,45

3,2

1,5±0,29

<0,01

188

Таблица 54- Влияние совместного введение унитиола и мочевины в среду ГЦХЖК на функциональную полноценность заморожено-оттаянной спермы хряков



Показатели



Варианты опыта

ГХЦЖК (контроль)

ГХЦЖК +

унитиол+мочевины

(опыт)

Разница


±



в %




Подвижность, баллов

3,0±0,02

3,1±0,01

+ 0,1

3,3

Скорость движения, мкМ/с

95,8±8,05

96,2±7,64

+ 0,4

0,4

Абсолютный показатель живучести, ч

2,5±0,01

3,4±0,02

+ 0,9

36,0

Время редукции метиленовой сини, мин

16,7±0,45

14,5±2,03

- 2,2

-15,2

Сохранность SН-групп, %

62,2±5,13

70,4±6,52

+ 8,2

13,2

Число поврежденных акросом, %

31,8±3,04

23,7±1,86

- 8,1

-34,2

Активность общих дегидролгеназ, мин

54,4±6,06

48,7±4,63

- 5,7

-11,2

Активность цитохромоксидазы, мин

6,8±0,16

14,4±0,09

+ 7,6

211,7

Таким образом изменение состава среды введением унитиола в концентрации 0,028% и мочевины 0,30% позволяет повысить процент подвижных клеток и абсолютный показатель живучести после замораживания-оттаивания. Улучшение функциональную полноценность заморожено-оттаянной спермы хряков дали нам основание включить этих веществ, в состав разрабатываемой новой среды для криокнсервации спермы хряков.

3.3.5 Исследование влияния тиоловых соедиенеий на некоторые структурно-метаболические показатели заморожено-оттаянной сперматозоидов

Для выяснения механизма действия тиоловых соединений на криоустойчивость сперматозоидов и определения направления для дальнейшего совершенствования технологии замораживания было исследовано влияние тиоловых соедиенеий на структурно-метаболические показатели гамет хряков. После замораживания-оттаивания у сперматозоидов оценивали сохранность акросом, ферментов лактатдегидрогеназы и цитохромоксидазы.

Наряду с этим также определяли интенсивность дыхания и состояние дыхательной цепи. Как видно из таблицы 55 унитиол, дитиотреитол и меркаптоэтанол достоверно снижает долю сперматозоидов с поврежденной акросомой.


Таблица 55- Влияние тиоловых соедиений на сохранность акросом после замораживания и оттаивания спермы

Вариант опыта



Число сперматозоидов с поврежденными акросомами, %

M+m

lim

Р

ГХЦЖКМ -контроль

28,42±3,12

10,7 - 35,6

-

ГХЦЖКМ -унитиол

20,76±2,56

12,9 - 26,8

0,05

ГХЦЖКМ- меркаптоэтанол

18,12±3,23



5,8 – 25,6

0,01

ГХЦЖКМ-цистеин

30,48±4,02

13,6 – 40,3

0,02

ГХЦЖКМ-дитиотреитол

20,78±3,56

11,9 – 26,6

0,01

При добавлении в среду дитиотреитола и унитиола сохранность акросом сперматозоидов находится на уровне 79,12-79,14%, что выше чес в контроле на 7,8-8,0% (табл. 55).

Анализ полученных результатов (рис. 10) показал, что цистеин не защищает акросому сперматозоидов хряка от повреждающего действия замораживания-оттаивания. Кроме того цистеина не оказывает защитного влияния и на сохранность в сперматозоидах фермента лактатдегидрогеназы (табл. 56). Не отличалась активность лактатдегидрогеназы от контроля и в пробах замороженных с меркантоэтанолом.

Обнаружено также, что по сравнению с контролем унитиол и дитиотреитол достоверно увеличивает сохранность фермента сперматозоидов. Исследование активности цитохромоксидазы измеряемой по времени развития окраски показало, что все тиоловые препараты уменьшают активность данного фермента, участвующего в терминальном участке дыхательной цепи. Наибольшее снижение активности, более 10 раз, наблюдалось в пробах замороженных с меркаптоэтанолом (табл. 56).

Повидимому такое снижение активности (ингибирования) цитохромоксидазы связано с переключением дыхания преимущественно на аэробный гликолиз.

В контрольном опыте было установлено, что используемые в опытах тиоловые соединения обладают гипоксическим действием. Скорость поглощения кислорода из среды унитиолом, дитиотреитолом и меркаптоэтанолом составляет 2...4 натомов О2 в мин.




Рисунок 10- Влияние тиоловых соедиений на сохранность акросом

Таблица 56- Активность лактатдегидрогеназы и цитохромоксидазы в замороженно-оттаянной сперме хряков

с тиоловыми соединениями


Вариант опыта

Актиность ЛДГ в мкМ пирувата на 109 сперматозоидов

Активность цитохромоксидазы, мин

М

D±md

Р

М

D±md

Р

ГХЦЖКМ -контроль

6,9

-

-

5,1

-

-

ГХЦЖКМ -унитиол

7,7

0,32±0,1

0,02

15,9

10,3±0,9

0,05

ГХЦЖКМ- меркаптоэтанол

6,8

0,48±0,1

0,01

54,6

48,3±4,1

0,01

ГХЦЖКМ-цистеин

7,5

0,19±0,1

0,02

10,9

5,8±0,7

0,05

ГХЦЖКМ-дитиотреитол

7,6

0,31±0,1

0,02

15,2

9,8±0,8

0,01

3.3.6 Влияние тиоловых соединений на показатель энергетического обмена в сперме хряков на разных этапах замораживания

Энергетические основы подвижности сперматозоидов были раз­работаны советскими и иностранными учеными (Маnn Т.[34], Энгельгардт В., Яровая Г.А. [167]). Исследователи показали, что цен­тральная роль в энергетике принадлежит аденозинтрифосфату.

Содержание АТФ является важным фактором в регуляции дви­жения сперматозоидов. По данным Л.Г. Мороз и др. [90], содержание АТФ в сперме быка и барана 8,7 и 8,6 мг в 100мл, а в сперме хряка - 3,3 мг. Показан параллелизм между содер­жанием АТФ и подвижностью спермиев. Количество АТФ, бы­стро расходуемого в процессе движения сперматозоидов, поддер­живается на постоянном уровне с помощью двух взаимосвязан­ных процессов - гликолиза и дыхания. Следует напомнить, что гликолитический процесс слагается из ряда последовательных ферментативных реакций, в результате которых глюкоза ока­зывается расщепленной на две молекулы молочной кислоты.

Определение АТФ в образцах сперматозоидов. Эксперименты проведены на сперме хряков крупной белой породы. В связи с отсутствием АТФ в семенной плазме, предварительное отделение сперматозоидов от плазмы не проводилось.

Экстрагирование АТФ из сперматозоидов проводилось по методу Л.Г. Мороз с соавторами [233]. Для этого из каждого образца спермы отбирали пробу объёмом 0,05 мл и добавляли в неё 0,45 мл диметилсульфоксида. После 20 минутной экстракции при комнатной температуре определяли содержание АТФ биолюминисцентным методом с помощью портативной люминометра ЕМILIТЕ-1003А. Для проведения анализа в кювету люминометра помещали 0,5 мл АТФ реагента, содержащей иммобилизированную люциферазу светляков, люцеферин, соль магния, компоненты буферной смеси и стабилизаторы, и регистрировали фоновое свечение. Затем в кювету вводили экстрагированный образец спермы в объеме 0,1 мл и регистрировали приращение интенсивности свечения (I обр.). Для проведения внутренней калибровки, в ту же кювету вводили 0,1-0,2 мл стандартного раствора АТФ и регистрировали приращение сигнала.

Расчет концентрации АТФ в образце проводили по формуле:
АТФ обр. = Vcт • Jст / Jст • АТФ ст

где: Vст. и Vобр.- объём соответственно стандарта АТФ и образца, АТФ ст.- концентрация АТФ в стандарте.

Содержание АТФ в сперматозоидах животных напрямую коррелирует с их подвижностью и оплодотворяющей способностью (Ерохин А.С. и др [55], Foulkes J.А. [75], Кichev G. [76], Wilmut I. е.а. [86]).

В связи с совершенствованием методов криоконсервации спермы хряков представляет несомненный практический интерес изучение динамики содержания АТФ в сперматозоидах под влиянием глубокого замораживания в зависимости от методов криоконсервации.

Результаты эксперимента по изучению содержания АТФ в сперматозоидах хряков представлены в табл. 57. Из этой таблицы видно, что в процессе замораживания-оттаивания происходит резкое снижение уровня АТФ в сперматозоидах хряков. Через 5 минут после оттаивания уровень АТФ снизился на 37,7% по сравнению с нативными образцами.
Таблица 57- Влияние глубокого замораживания на содержание АТФ в сперматозоидах хряка


Время исследования

Подвижность сперматозои­дов, %

Число сперматозоидов с неповрежденной акросомой, %

Содержание АТФ в сперматозоидах, нмоль/108кл

До замораживания

81±5,3

93±4,2

26,8±0,6

Через 5 мин. после оттаивания

37±1,9Х

56±2,8ХХ

16,7±1,3

Через 60 мин. после оттаивания

21±1,3Х

43+2,9 хх

7,1±0,3ХХ

Через 120 мин. после оттаивания

18±0,4ХХ

37±1,9ХХ

5,2±0,2ХХ

х-Р<0,05; ХХ-Р<0,01

Наряду с этим также уменьшилось на 54,4% подвижность сперматозоидов и 39,8% число сперматозоидов с поврежденной акросомой. Дальнейшая инкубация оттаянных образцов при 37°С способствовала значительному снижению подвижности и содержания АТФ в сперматозоидах. Через 2 часа после оттаивания содержание АТФ в сперматозоидах снизилось в 5,15 раза по сравнению с начальным уровнем (Р<0,01). Следовательно, в процессе замораживания-оттаивания в сперматозоидах хряков происходят значительные деструктивные изменения мембранных структур, в результате чего происходит быстрый гидролиз АТФ под действием ферментов, которые содержатся в клетках и семенной плазме.

Нами, изучено влияния на уровень АТФ в сперматозоидах в различных способах разбавления спермы хряков перед замораживанием, представлено в таблице 58.

Анализ таблицы 58 показывают, что способ разбавления спермы перед замораживанием оказывает определенное влияние на содержание АТФ в сперматозоидах после замораживания-оттаивания и на их подвижность. Так, сразу после разбавления содержание АТФ в пробах с диализной обработки была выше контроля на 6,5 нмоль/108кл (или выше на 12,5%). Более лучшая сохранность АТФ при диализной обработке наблюдается и после криоконсервации-оттаивания спермы хряков.

Таблица 58- Влияние способа разбавления спермы перед замораживанием на содержание АТФ в сперматозоидах


Время исследования АТФ

Общепринятое разбавление спермы

Диализная обработка

подвижность сперматозоидов, %

содержание АТФ, нмоль/108кл

подвижность сперматозоидов, %

содержание АТФ, нмоль/108кл

Перед замо­раживанием

82,3±5,9 х

26,3±2,1

82,3±5,9

32,8±2,2 ХХ

Через 5 мин. после оттаивания

31,6±2,7

15,8±1,9 х

33,8±2,3

19,2±0,9 ХХ

Через 60 мин. после оттаивания

19,4±1,1

5,2±0,6

22,3±1,6

7,0±0,3

Через 120 мин. после оттаивания

14,6±1,6

4,6±0,2

19,8±0,9

6,2±0,5

х-Р<0,05; ХХ-Р<0,01

Разница по содержанию АТФ между общепринятым методом разбавление спермы и диализной обработкой составила через 5 мин. после оттаивания - 3,4 нмоль/108кл (или выше на 12,1%), Эт разницы наблюдается до двух часов после оттаивания спермы хряков. В частности через 60 мин. - 1,8 и через 120 мин. – 1,6 нмоль/108кл (или выше на 13,5%). Таким образом, при диализной обработке выявлено более высокое удержание АТФ по сравнению с общепринятым способом разбавления. В диализной группе также отмечено менее резкое снижение подвижности оттаянных сперматозоидов.

Поученные данные свидетельствуют о том, что диализный метод разбавления спермы хряков способствует более эффективной защите сперматозоидов в процессе их криоконсервации. Вероятно, это объясняется лучшими условиями стабилизации мембранных структур сперматозоидов в процессе эквилибрации. Кроме того, при этом из состава спермы могут удаляться низкомолекулярные компоненты, оказывающие биодеструктивное влияние на мембраны сперматозоидов.

Таким образом, проведенные лабораторные и производственные эксперименты в свиноводческих хозяйствах Южного Казахстана свидетельствуют, что диализный метод разбавления спермы хряков перед замораживанием оказывает больший криозащитный эффект на половые гаметы в сравнении с общепринятым методом разбавления эякулятов.

Влияние тиоловых соединений на показатель энергетического обмена в сперме хряков на разных этапах замораживания представлены в таблице 59.

Таблица 59- Влияние тиоловых соединений на показатель энергетического обмена в сперме хряков на разных

этапах замораживания

Вариант опыта



Свежеразбавленная сперма


Сперма после эквилибрации

Замороженно-оттаяная сперма

Vэнд





Vэнд





Vэнд





ГХЦЖКМ -контроль

78,7±8,1

1,09

2,87

93,4±8,4

1,29

2,88

73±5,7

1,23

1,68*

ГХЦЖКМ -унитиол

63,7±5,2

1,18

3,16

97,2±7,3

1,24

3,01

55,1±4,4

1,55

1,79*

ГХЦЖКМ- меркаптоэтанол

77,8±8,4

1,08

3,39

98,2±7,5

1,01

2,66

62,4±5,1

1,52

1,46*



ГХЦЖКМ-цистеин

-

-

2,28

-

-

-

59,7±6,2

1,31

1,47*

ГХЦЖКМ-

дитиотреитол


61,6±5,3

1,15

3,02

94,2±7,7

1,22

2,84

52,7±6,2

1,52

1,72*



    ПРИМЕЧАНИЕ: *Р<0,05 – достоверна по отношению к контролю

    Vэнд – скорость эндогенного дыхания

    Vсц – скорость дыхания с суцинатом


Vднф – скорость дыхания с динитрофенолом

Анализ таблицы 59 показывают, что в целом тиоловые соединение способствуют сохранению более высокой степени АТФ в сперме.

Другой причиной снижения активности цитохромоксидазы в пробах с меркаптоэтанолом является усиление свободного окисления не связанного с синтезом АТФ, что видно по низкой величине стимуляции дыхания с ДНФ, VДНФ/ Vсукц =1,47 против 1,7 в контроле. Доля свободного окисления в пробах спермы разбавленной средой содержащей меркаптоэтанол возрастает уже при охлаждении спермы до +40С перед ее замораживанием.

Величина стимуляции дыхания ДНФ после эквилибрации по сравнению со стимуляцией дыхания свежеразбавленных сперматозоидов падает от 3,40 до 2,70. В то же время унитиол оказал значительное защитное действие на сохранность сопряженности дыхания с фосфорилированием. Как видно из таблицы 59 величина стимуляции дыхания сперматозоидов с ДНФ - (VДНФ/Vсукц) в сперме разбавленной средой с унитиолом выше контроля и после эквилибрации 3,01 против 2,90, и после замораживания-оттаивания - 1,78 против 1,69.


3.3.7 Влияние унитиола на общую активность и изоферментный спектр лактатдегидрогеназы

Полученные ранее данные показали что, введение унитиола в среду ГХЦЖК при замораживании спермы хряков увеличивает абсолютный показатель живучести сперматозоидов и обеспечивает сохранность лактатдегидрогеназы сперматозоидов хряка после их замораживания-оттаивания лучше, чем другие тиоловые соединения. Поэтому в следующей серии экспериментов поставлена задача - изучение влияние унитиола на активность лактатдегидрогеназы и ее изоферменты.

Опыты были поставлены в конце февраля и начале марта на хряках крупной белой породы. Эякуляты семени от опыта к опыту сильно отличались друг от друга по объему и концентрации сперматозоидов. В связи с этим к каждому варианту опыта ставили свой контроль.

Результаты опытов по изменению общей активности лактатдегидрогеназы и ее изоферментного спектра при разбавлении спермы средой, после эквилибрации и замораживания-оттаивания представлены в таблице 60.

Анализ таблицы показывают, что при разбавлении спермы средой с унитиолом (0,028%) - ГХЦЖКУ (опыт) происходит увеличение активности фермента как в сперматозоидах так и плазме. В частности активность ЛДГ в сперматозоидах после разбавления спермы средой ГХЦЖК (контроль) равна 6,74 мкМ пировиноградной кислоты на 109 клеток. Унитиол (среда ГХЦЖКУ) увеличивает активность фермента в сперматозоидах до 7,99 мкМ, что на 18,5% выше активности, чем в контроле (P<0,01). В плазме спермы опытной группы активность лактатдегидрогеназы составило - 2,85 мкМ, а контроле - 4,81 мкМ. Достоверность полученных результатов Р=0,01.

После эквилибрации спермы при температуре +5 С в течение трех часов происходит значительное снижение активности фермента в сперматозоидах: в среде ГХЦЖК до 5,44 мкМ и в среде ГХЦЖКУ (опыт) до 5,70 мкМ.

После замораживания-оттаивания спермы активность лактатдегидрогеназы сперматозоидов в контроле снижается до 3,71 мкМ. Это составляет - 55% от активности фермента после разбавления спермы. Значительное (на 33%) снижение активности лактатдегидрогеназы после замораживания наблюдается и в опытном варианте. Но разница активности между опытным и контрольным вариантами в этом случае больше 38% по сравнению с разницей в свежеразбавленной сперме (19%). Это свидетельствует, что выход фермента из сперматозоидов и ее инактивация в среде с унитиолом (ГХЦЖКУ) на 19% меньше чем в контрольной среде (ГХЦЖК).

Установлено что, активность лактатдегидрогеназы в плазме спермы после замораживания-оттаивания возрастает. Так это увеличение на 1 мл плазмы в контроле составило 3,3 мкМ и в опыте 3,4 мкМ.

Электрофоретическое разделение лактатдегидрогеназы на отдельные изоферменты показало, что активность ЛДГ4 и ЛДГ5 значительно превышает активность остальных изоферментов и в сперматозоидах и в плазме спермы. После разбавления спермы средой ГХЦЖК (контроль) активность ЛДГ4 и ЛДГ5 в сперматозоидах составило соответственно 33,4 и 44,9% от суммарной активности всех изоферментов лактатдегидрогеназы (табл. 28). Разбавление спермы средой с унитиолом (0,028%) вызывает некоторое изменение процентного соотношения изоферментов. При этом, по сравнению с контролем наблюдается увеличение активности изофермента ЛДГ2 в сперматозоидах. Активность ЛДГ1, ЛДГ3, ЛДГ4 и ЛДГ5 достоверно не меняются как в контроле, так и в опытных группах.

После эквилибрации процентное соотношение изоферментов в опытной среде ГХЦЖКУ, не отличается от соотношения в контрольной среде.

Замораживание-оттаивание вызывает уменьшение активности ЛДГ1 в среде ГХЦЖК, а в опыте наблюдается снижение соотношения изоферментов ЛДГ1 и ЛДГ3 сперматозоидов по сравнению с их активностью после разбавления семени. Активность ЛДГ4 и ЛДГ5 в среде с унитолом после замораживания достоверно не отличается от активности остальных групп.

В плазме спермы хряков соотношение активности изоферментов после разбавления, эквилибрации и замораживания достоверно не меняется.

Рассматривание активности изоферментов выраженную в мкМ пировиноградной кислоты от общей активности ЛДГ представлены в табл. 29. Анализ таблицы 61 показывают, что при разбавлении спермы средой ГХЦЖКУ наблюдается увеличение активности всех изоферментов лактатдегидрогеназы по сравнению с контролем. Увеличение ЛДГ1 составило на - 2,5%; ЛДГ2 - 46,7%; ЛДГ3 - 29,1%; ЛДГ4 - 18,2% и ЛДГ5 на 19,1%.
Таблица 60- Соотношение изоферментов ЛДГ в сперматозоидах хряков до и после замораживания в средах

ГХЦЖК (контроль) и ГХЦЖКУ (опыт)



Сперма



Вариант


Общая активность ЛДГ в мкМ на 109 клеток

Активность изоферментов в %





ЛДГ1


ЛДГ2


ЛДГ3


ЛДГ4


ЛДГ5



После разбавления

средой


Контроль

6,69±0,05

8,4±1,1

2,4±0,01

9,5±1,1

32,7±2,1

43,8±3,6

3,16

Опыт

787±0,09

7,8±1,3

2,8±0,01

9,8±1,2

31,8±1,9

44,4±3,1

3,16

Р

<0,01

>0,05

<0,01

>0,05

<0,01

>0,01



После эквилибрации

Контроль

5,36±0,02

6,2±0,8

3,0±0,02

8,4±0,9

33,2±2,7

45,2±3,5

3,53

Опыт

5,61±0,06

6,1±0,7

2,4±0,02

7,9±0,9

35,9±2,4

45,8±3,4

3,53

Р

<0,01

>0,05

<0,05

>0,01

<0,01

>0,05




Замороженно-оттаяная

Контроль

3,62±0,05

6,8±0,9

2,1±0,01

7,4±0,8

40,6±3,2

40,3±2,8

3,25

Опыт

5,02±0,04

5,1±0,8

3,0±0,02

6,8±0,8

39,5±3,2

42,9±3,6

3,37

Р

<0,05

>0,01

<0,01

>0,01

<0,01

>0,01



Наблюдается значительное снижение активность изоферментов после замораживания-оттаивания во всех группах (табл. 61). Однако следует заметить что, по сравнению с контрольной средой, в среде с унитиолом выше активность изоферментов сперматозоидов после замораживания-оттаивания. Так, активность изоферментов сперматозоидов ЛДГ1 на 8,7%; ЛДГ2 - 57,8%; ЛДГ3 - 24,2%; ЛДГ4 - 27,4% и ЛДГ5 на 49,3%. При сравнении этих разниц с разницами в активности изоферментов сперматозоидов после разбавления свежеполученной спермы можно обнаружить, что у криоконсервированной сперматозоидов значительно снижается некоторые изоферменты лактатдегидрогеназы. Эти разницы составляют по активности ЛДГ1 от 22,5% до 8,7%. В то же время у изоферменты лактатдегидрогеназы ЛДГ5 наблюдается увеличение этой разницы от 19,1% свежеполученного до 49,3% после замораживания-оттаивания. Это свидетельствует о том, что “анаэробный” изофермент ЛДГ5 при замораживании-оттаивании сперматозоидов в среде с унитиолом сохраняется лучше чем “аэробный” изофермент лактатдегидрогеназы ЛДГ1.

Несколько иная картина наблюдается с изоферментами плазмы спермы. После разбавления со средой ГХЦЖКУ в плазме спермы в опытных группах наблюдается увеличение активности изоферментов ЛДГ1, ЛДГ4 и ЛДГ5 Однако после замораживания-оттаивания сперматозоидов достоверной разницы между активностью изоферментов лактатдегидрогеназы между группами не наблюдается.
3.3.8 Исследование влияние совместного введения в среду унитиола и мочевины на активность лактатдегидрогеназы и ее изоферментов

Исследование влияние совместного введения в среду унитиола и мочевины на активность лактатдегидрогеназы и ее изоферментов проведены в весенние периоды. В среду добавляли унитиола концентрации 0,028%, а мочевину 0,30%. Результаты опытов представлены в таблицах 30 и 31. Замечено, что сезоны года в определенной степени влияют на активности лактатдегидрогеназы и ее изоферментов.

По сравнению с другими сезоанми года весенние периоды активность лактатдегидрогеназы и ее изоферментов ниже, особенно у изоферментов - ЛДГ1; ЛДГ2 и ЛДГ3 (табл. 61). Из анализа таблицы видно, что общая активность ЛДГ сперматозоидов и плазмы у свежеразбавленных в опытной среде значительно выше, по сравнению с контрольным вариантом. Активность ЛДГ сперматозоидов в опыте составляет 9,02 мкМ против 7,30 мкМ пировиноградной кислоты в контроле, а плазмы 2,34 мкМ против 0,94 мкМ. Разница между опытом и контролем статистически достоверна и составляет для сперматозоидов 23,5% (P<0,02) и плазмы 148,9% (P<0,01).

После замораживания-оттаивания активность лактатдегидрогеназы сперматозоидов в среда ГЦЖДУМ еще больше превосходит активность лактатдегидрогеназы сперматозоидов по сравнению с контрольной группой

Таблица 61- Изменение активности изоферментов ЛДГ сперматозоидов хряков при замораживании в среде

ГХЦЖК с добавлением (ГХЦЖКУ) n=6




Сперма

Показатель

Активность изоферментов ЛДГ в мкМ пировиноградной кислоты

ЛДГ1

ЛДГ2

ЛДГ3

ЛДГ4

ЛДГ5

После разбавления

Контроль*


0,563

0,180

0,623

2,291

2,976

опыт

069,

0,264

0,804

2,709

3,543

D+md

0,127±0,020

0,084±0,014

0,181±0,037

0,418±0,113

5,567±0,095

%

+22

+47

+29

+18

+19

Р

<0,01

<0,01

<0,01

<0,05

<0,01

После эквилибрации

Контроль*


0,361

0,163

0,456

1,888

2,569

опыт

0,386

0,152

0,448

2,109

2,610

D+md

0,025±0,045

-0,011± 0,012

-0,008±0,010

0,221±0,080

0,041±0,064

%

+7

-7

-1,7

+13

+2

Р

>0,01

>0,1

>0,1

>0,05

>0,1

После замораживания -оттаивания

Контроль*


0,263

0,102

0,306

1,569

1,473

опыт

0,286

0,161

0,380

1,999

2,197

D+md

0,023±0,005

0,059±0,010

0,074± 0,020

0,430±0,170

0,724±0,220

%

+9

+58

+24

+27

+49

Р

<0,05

<0,05

<0,02

0,05

<0,02

*- контроль среда ГХЦЖК:

**- D+md – разница между опытом и контролем



Так, активность лактатдегидрогеназы в контроле 3,88 мкМ против 5,12 мкМ в опыте, т.е. выше на 32%. Поученные незначительные разницы между группами по активности лактатдегидрогеназы в плазме спермы после замораживания и после эквилибрации были не достоверными.

Исследование изоферментов лактатдегидрогеназы показывает, что разбавление спермы средой ГЦЖДУМ хотя и увеличивает активность изоферментов в 1-2 мк Молях пировиноградной кислоты, но не влияет на их процентное соотношение, наблюдаемое в среде ГХЦЖК.

Процентное соотношение активности изоферментов ЛДГ1 - ЛДГ5 в среде с унитиолом и мочевиной не изменяется и после замораживания-оттаивания сперматозоидов. В то время как в контрольном варианте (среда ГХЦЖК) после замораживания-оттаивания активность ЛДГ1 достоверно снижается.

Соотношение изоферментов лактатдегидрогеназы в плазме после эквилибрации и замораживания достоверно не изменяется.

Поученные данные, в которой активность изоферментов лактатдегидрогеназы выражена в мкМ пировиноградной кислоты, показывают, что при разбавлении спермы средой с унитиолом и мочевиной (ГЦЖДУМ) наблюдается значительное увеличение активности изоферментов сперматозоидов по сравнению с их активностью в среде ГХЦЖК (контроль). Эти увеличение составили - ЛДГ1 на 56,1%; ЛДГ2 - 43,6; ЛДГ4 - 20,7 и ЛДГ5 на 21,8%. Наблюдаемое увеличение ЛДГ3 31,2% из-за большого разброса статистически не оправдано. Эквилибрация и замораживание-оттаивание в среде ГЦЖДУМ как и в контрольном варианте вызывает снижение активности изоферментов и сперматозоидах.

Разница между опытом и контролем для ЛДГ1 достигает до 177%, для ЛДГ2 - 96,8%, ЛДГ4 - 27,4% и ЛДГ5 - 44,7%. Достоверной разницы активности между опытом и контролем не обнаруживается только для изофермента ЛДГ3.

В плазме как и в сперматозоидах при разбавлении спермы средой ГЦЖДУМ происходит увеличение активности всех изоферментов. Однако после замораживания-оттаивания активность изоферментов в опытной среде выше чем в среде ГХЦЖК.

Таким образом можно отметить, что в среде с унитиолом (0,028%) и мочевиной (0,30) - среда ГЦЖДУМ, наряду с повышением общей активности всех изоферментов и их устойчивости в клетках к повреждающему действию охлаждения и замораживания-оттаивания наблюдается лучшее сохранение в сперматозоидах активности изоферментов ЛДГ1 и ЛДГ2, связанных с дыханием и сосредоточенных в митохондриях.
3.3.9 Изучение влияние унитиола и дитиотреитола на функциональное состояние заморожено-оттаянной спермы хряков

Предующие исследовании показали, что для стабилизации функциональной поноценности сохраняемой вне организма спермы хряков, наиболее эффективно влияют унитиол и дитиотреитол.

Эти тиоловые соедиенеия в широком диапозоне концентраций увеличивает подвижность и абсолютный показатель живучести сперматозоидов при кратковременном хранении, стабилизируют скорость движения и продлевает оплодотворяющей способности гамет хряков. Учитывая эти положительные стороны унитиола и дитиотреитола изучены их влияния на функциональное состояние заморожено-оттаянной спермы хряков. Полученые данные представлены в таблице 62.

Как видно из таблицы 62 лучшие результаты по всем качественным показателям спермы хряков и оплодотворяемость свиноматок были получены при введении в состав среды унитиола и дитиотреитола.


Таблица 62- Влияние унитиола и дитиотреитола в среде ГХЦЖКМ на функциональное состояние заморожено-оттаянной сперматозоидов хряков

Показатели



Варианты экспериментов (среда замораживания)

ГХЦЖКМ- контроль

ГХЦЖКМ+ унитиол

ГХЦЖКМ+ дитиотреитол

Подвижность, баллов

2,8±0,24

3,5±0,18

3,2±0,38

Скорость движения, мкМ/с

97,3±6,95


96,2±7,14


95,1±8,04



Абсолютный показатель живучести, ч

2,7±0,25

3,8±0,29

3,6±0,21


Время редукции метиленовой сини, мин

18,7±1,14


14,6±1,06


15,8±1,07



Сохранность SН-групп, %

63,2±4,62

72,9±5,01

69,6±4,25

Число поврежденных акросом, %

31,6±3,52


20,5±4,28


14,3±2,55



Активность общих дегидролгеназ, мин

52,4±4,35


46,2±5,76


48,9±6,29



Активность цитохромоксидазы, мин

5,6±0,61

18,9±0,48

13,4±0,62



Активность ЛДГ, мкМ пирувата на 1 млрд гамет

7,6±0,34

7,5±0,43

8,8±0,54


Оплодотворяющая способность, %

10,5±0,84


37,3±2,12


41,8±2,82



Сохранность поросят до

2-х месячного возраста, %


86,5±7,43


87,1±6,82


86,8±7,63


При этом абсолютный показатель живучести заморожено-оттаянных сперматозоидов, по сравнению с контролем увеличиваются на 33,3 – 40,7%, число поврежденных акросом уменшаются на – 11,1 – 17,3%, сохранность SН-групп увеличиваются на 6,4-9,7%, увеличиваются сохранности оплодотворяющая способности сперматозоидов хряков на 26,8-31,3%. Эти тиоловые соедиения не влияют на сохранности поросят до 2-х месячного возраста.

Таким образом установлено, что унитиол и дитиотреитол положительно влияют на функциональное состояние заморожено-оттаянной сперматозоидов хряков, следовательно их целесообразно включить в состав среды для замораживания спермы хряков.
3.3.10 Оплодотворяющая способность спермы хряков разбавленной новой средой ГЦДУМЖ

Результаты проведенных исследований по влиянию унитиола и мочевины на устойчивость сперматозоидов хряка к повреждающему действию низких температур позволили разработать среду для криоконсервации спермы хряков.

Новая среда, под условным названием глюкозо-цитрато-дитиотреитоло-унитиоло-мочевиновая-желточная (



Достарыңызбен бөлісу:
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11




©dereksiz.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет