Инструкция 10-15-21-2006 микробиологические методы выделения и идентификации возбудителей

VIBRIO PARAHAEMOLYTICUS

Vibrio parahaemolyticus - галофильный вибрион, вызывающий острые диареи. Вызванные им поражения часто регистрируются в странах Юго-Восточной Азии, Африки и Латинской Америки (до 20% всех диарей). Основные факторы передачи возбудителя инфекции – блюда из морских продуктов, длительно хранившихся в теплом месте и приготовленные с нарушениями технологического процесса. Реже наблюдаются поражения вызванные употреблением сырых моллюсков и рыбы. Возбудитель синтезирует энтеротоксин (гемолизин), вызывающий энтерит. Клинические проявления наблюдаются у 50% инфицированных лиц - характерны сильные боли в животе и водянистая обильная диарея, развивающаяся в течение 24 часов после инфицирования.

Заболевания наступают только при обильном обсеменении (более 10⁶ клеток в 1 грамме) пищи живыми клетками V. parahaemolyticus.

Энтеропатогенные штаммы V.parahaemolyticus, обнаруженные в выделениях больных, обладают гемолитическими свойствами, в то время как штаммы, выделенные из рыбы, послужившей причиной заболевания и из морской воды, не обладают этими свойствами. Этот феномен получил название по имени автора, его описавшего «Kanagawа»-феномен.

Vibrio parahaemolyticus – прмые или изогнутые грамотрицательные палочки (0,5-0,8х1,4-2,4мкм), полиморфные, подвижные, факультативно- анаэробные. Вибрион хорошо растет на обычных питательных средах, содержащих 2-3% NaCl. Оптимальная температура роста 30-37⁰С, оптимальный рН 7,5-8,8. Основные дифференциальные признаки V.parahaemolyticus и других галофилов согласно приложению 25 к настоящей Инструкции.

V.parahaemolyticus имеет три антигена О-, К-, Н-. Серологическая классификация основана на учете О- и К-антигенов, т.к. Н-антигены идентичны. О-антиген соматический, термостабильный, K-антиген капсульный и при 100⁰С разрушается. По структуре О-антигена бактерии разделеляют на 14 серогрупп, внутри их разделяют на 61 серовар по структуре К-антигенов. Серологическая идентификация с помощью реакции агглютинации проводится в соответствии с «Инструкцией по применению агглютинирующих сывороток».

Критериями диагностики заболеваний, вызванных V. parahaemolyticus, является обнаружение их в подозреваемом продукте в количестве 10⁶ и более клеток в 1 г (см³), с одновременным обнаружением того же типа возбудителя в кале пострадавших.

Бактериологические исследования.

Первый день. Из подготовленных к исследованию образцов (продук­ты и испражнения) готовят ряд десятикратных разведений в 3% пептонно-солевом бульоне, высевают по 0,1 мл на поверхность дифференциально-диагностической среды (висмут-сульфит агар с феноловым красным, тиосульфат-цитрат-желчно-сахарозный агар (ТСВS-агар.)). Засеянный материал тщательно втирают шпателем. Производят посев 1 мл неразведенного материала в 10 мл среды обогащения (висмут-сульфит солевой бульон). Посевы инкубируют при 37⁰С 18-24 часа.

Второй день. Просматривают чашки с первичными посевами. Типичные колонии V. parahaemolyticus на висмут-сульфит агаре с феноловым красным бесцветны, т.к. не ферментируют сахарозу, микроорганизмы, ферментирующие сахарозу, имеют темно-коричневый цвет, бактерии группы кишечной палочки на висмут-сульфит агаре с феноловым красным не растут, на ТСВS-агаре образуют оливково-зеленые колонии, на этой среде так же выявляют способность V. рarahaemolyticus утилизировать орнитин, в отличии от V. сholerae. Производят микроскопию в окрашенных по Граму препаратах и подсчет с последующим пересчетом на 1 г (см³) продукта, по общепринятой методике, 10 типичных колоний высевают на скошенный 2-3% солевой агар для дальнейшей идентификации.

Производят пересев со среды обогащения на висмут-сульфит агар с феноловым красным, или на ТСВS-агар так, чтобы получить рост изолированных колоний.

Третий день. Проверяют чистоту выделенных культур при микроскопии окрашенных по Граму препаратов. Пересевают чистые культуры со скошенного агара на: пептонный бульон без соли; пептонные солевые бульоны, содержание 6%, 8% и 10% NaCl; полужидкий агар для определения подвижности. Все посевы инкубируют при 37⁰С в течение 18-24 часов.

Четвертый день. Сравнивают рост культур на средах: пептонный бульон без соли и пептонно-солевые бульоны. V.рarahaemolyticus хорошо растет в солевом бульоне с 6-8% NaCl и не растет или растет очень слабо в бульонах без соли и с 10% NaCl. Определяют подвижность культур по характеру роста на полужидком агаре. Засевают 24-часовые агаровые культуры на среды Гисса, содержащие сахарозу и арабинозу, посевы инкубируют при 37⁰С в течение 18-24 ч, бульон с глюкозой для определения образования ацетилметилкарбинола, посевы инкубируют при 25-27⁰С в течение 48 часов.

Для определения энтеропатогенности выделенных галофилов по их гемолитическим свойствам производят пересев культур из солевого бульона по секторам на хорошо подсушенную чашку с кровяным солевым агаром (среда Wagatsuma). Инкубируют при 35⁰С 18-20 часов.

Пятый и шестой дни. Учет результатов ферментации углеводов. V.parahaemolyticus, как правило, не ферментирует сахарозу и ферментирует арабинозу.

Постановка реакции на ацетилметилкарбинол. К 1 мл бульонной культуры добавляют 0,6 мл 5% альфа-нафтола и после смешивания 0,2 мл 40% водного раствора щелочи (КОН). Розовое окрашивание, наступившее через 2-24 часа, указывает на наличие ацетилметилкарбинола.

Учет результатов наличия гемолиза определяют по зонам просветления среды вокруг колоний. V. parahaemolyticus, обладающий энтеропатогенными свойствами, вызывает гемолиз эритроцитов.

ГЛАВА 8

В.cereus почвенный микроорганизм широко распространенный во внешней среде - воде, воздухе и пыли помещений, на оборудовании предприятий пищевой промышленности и общественного питания. В.cereus обнаруживается в продуктах питания, где при благоприятных условиях размножается до количеств 10⁶-10⁷ в 1 г (см³) и может вызывать пищевые токсикоинфекции.

Низкая требовательность к условиям, необходимым для роста, приводит к тому, что В.cereus.может размножаться на любом продукте питания и любой продукт при его массивном обсеменении может привести к возникновению заболевания. В связи с В.cereus описаны отравления, вызванные мясными и рыбными продуктами, кондитерскими изделиями, растительными и молочными продуктами.

В мазках, окрашенных по Граму, В. cereus имеет вид крупных, грамположительных палочек, размером 0,5-2,5х1,2-10 мкм с слегка закругленными концами, лежащих в виде цепочек или штакетообразных скоплений, реже - отдельно друг от друга. Аэробы или факультативные анаэробы. В висячей капле подвижен, встречаются штаммы со слабо выраженной подвижностью и вовсе лишенные подвижности. На поверхности МПА образует крупные распластанные колонии белого цвета со слегка изрезанными краями. На средах с желтком колонии окружены широкой зоной глубокого равномерного беломатового коагулята (положительная реакция на лецитиназу). На полимиксиновых средах с ТТХ (2, 3, 5 трифенилтетразолий хлорид) колонии В. cereus зернистые, матовые, ярко рубинового цвета на фоне зоны белого коагулята. На кровяном агаре колонии В. cereus сероватой окраски, зернистые в отраженном свете, с перламутровым отливом в проходящем свете, окружены зоной гемолиза разной интенсивности. На столбике скошенного агара В. cereus дает сплошной белый рост, иногда мучнистого вида. На жидких питательных средах рост сопровождается помутнением бульона, образованием хлопьевидного осадка белого цвета (25-30% штаммов) и нежной белой пленки на поверхности среды. Все штаммы В. cereus створаживают молоко, частично пептонизируя его на 6-10 сутки. Около 85% штаммов разжижают желатин в течение 1-4 суток. Все без исключения штаммы В.cereus дают положительную реакцию на лецитиназу и ацетилметилкарбинол (р-ция Фогес-Проскауэра), расщепляют до кислоты глюкозу и мальтозу.

Оптимум роста для В.cereus 30⁰С, споры могут прорастать при широком интервале температур от 3-5⁰С до 70⁰С и давать рост при 6-55⁰С (около 4%), а при температуре 12-39⁰С достаточно интенсивный рост дают все штаммы данного микроорганизма. В. cereus способен давать рост в широком интервале рН от 4 до 12,5 и наиболее интенсивно от 7 до 9,5. Достаточно устойчив он к действию поваренной соли, сахара, поваренная соль задерживает размножение этого микроорганизма лишь при 10-15% содержании.

В. cereus легко и быстро образует споры. Содержание спор уже в 2-суточной культуре составляет до 50% от общего числа клеток. При этом споры В. cereus обладают достаточно высокой температурной устойчивостью и могут выживать не только при обычных методах технологической обработки пищи (варка, обжаривание, кипячение), но и при стерилизации молока и консервов.

Критериями диагностики заболеваний, вызываемых В. cereus, являются: обнаружение В. cereus в подозреваемом продукте питания в количестве не менее 10⁵ в 1 г (см³); обнаружение В. cereus в кале и рвотных массах или промывных водах желудка в количестве 10²-10³ в 1 г/мл; обнаружение В. cereus в кале большинства пострадавших при расследуемой вспышке пищевого отравления; обнаружение В. cereus при спорадических заболеваниях в кале пострадавшего только в острый период заболевания с последующим исчезновением к моменту выздоровления.

Бактериологические исследования клинического материала.

Первый день. Готовят исходные и ряд десятикратных разведений материала на ИХН. Производят посев разведений на поверхность солевого полимиксинового агара с 2,3,5-ТТХ или среду Никодемуса. Внесенный в чашки Петри посевной материал равномерно распределяют по поверхности питательной среды при помощи шпателя, после чего инкубируют при температуре 30-37⁰С от 24 до 96 часов. Посев производят согласно приложению 26 к настоящей Инструкции.

Второй день. Изучают морфологию выросших колоний, микроскопируют мазки, окрашенные по Граму, подсчитывают типичные колонии. Штаммы В. cereus на среде Никодемуса образуют крупные белые распластанные колонии со слегка изрезанными краями, окруженные широкой зоной глубокого белого равномерного матового коагулята или двойной зоной-коагулят и просветление. На солевом полимиксиновом агаре с 2,3,5-ТТХ они образуют ярко рубиновые колонии на фоне широкой зоны глубокого равномерного белого коагулята; колонии в первые часы роста - округлые, выпуклые, в дальнейшем (24-48 часов) распластанные на поверхности агара с изрезанными краями.

Для определения количества В. cereus, количество выросших типичных колоний на чашках умножают на соответствующее разведение и выражают в пересчете на 1 г/мл исследуемого материала.

Пересевают 3-5 колоний на скошенный агар. Инкубируют при 30-37⁰С 18-24 часа.

Третий день. Изучают характер роста на скошенном агаре, морфологию выросших культур в окрашенных по Граму препаратах и проверяют чистоту культуры. Проводят микроскопию висячей или раздавленной капли для установления подвижности культуры. В. cereus в отличие от В. аnthracis обладает подвижностью. Культуру засевают на «пестрый ряд», включающий глюкозу и маннит и на кровяной агар.

Для доказательства анаэробной ферментации глюкозы культуру со скошенного агара высевают уколом в питательную среду с индикатором бромкрезоловым пурпуровым и глюкозой.

Для определения способности ферментировать маннит культуру со скошенного агара пересевают на питательную среду с индикатором бромкрезоловым пурпуровым и маннитом. Посевы инкубируют при 30-37⁰С в течение 24 ч.

Культуру со скошенного агара пересевают на глюкозо-пептонный бульон рН 7,0 (для последующей постановки реакции на ацетилметилкарбинол). Посевы инкубируют при 30⁰С в течение 24 ч.

Четвертый день. Идентификация выделенных культур по «пестрому ряду» и кровяному агару. В. сereus ферментирует глюкозу и не ферментирует маннит. Для постановки реакции на ацетилметилкарбинол к 1 мл 24-часовой культуры на глюкозо-пептонном бульоне прибавляется 0,2 мл 40% водного раствора КОН и 0,6 мл раствора α-нафтола (α-нафтола 5 г, абсолютного этилового спирта 100 мл, раствор должен быть свежеприготовленным). Положительная реакция отмечается в виде розового окрашивания через 2-24 часа инкубации при 37⁰С.

Если при изучении культуральных морфологических и биохимических свойств микроорганизмов обнаружены подвижные, грамположительные, спорообразующие палочки, обладающие гемолитической активностью, образующие ацетилметилкарбинол, ферментирующие в анаэробных условиях глюкозу и не способные ферментировать маннит, то дают заключение об обнаружении В. сereus.

Пищевые продукты. С целью определения количества В. cereus в 1 г (см³) исследуемого продукта пробу продукта, или его разведения в объеме 0,1-0,2 см³ высевают поверхностным методом в две чашки Петри с солевым полимиксиновым агаром с 2,3,5-ТТХ. Посевы инкубируют при 30⁰С в течение 24-48 ч.

Через 24 ч посевы просматривают и выбирают чашки Петри, на которых выросло от 15 до 150 колоний, характерных для В. сereus, характеристика колоний В. сereus приведена выше.

Через 48 ч уточняют число обнаруженных колоний. Корректировку подсчета количества В. сereus проводят после изучения морфологических и биохимических особенностей микроорганизмов из колоний характерных для В. сereus.

Подтверждают принадлежность характерных колонной к В. сereus. Для этого микроорганизмы из 5 колоний пересевают на скошенный мясо-пептонный агар и термостатируют при 30⁰С в течение 18-24 ч. Идентификацию проводят по тестам, описанным выше при исследовании клинического материала. При подсчете В. сereus, если в 80 % случаях, т. е. не менее чем в 4 из 5 колоний подтвержден рост В. сereus, то считают, что все характерные колонии, выросшие в чашке принадлежат к В. сereus. В остальных случаях количество В. сereus определяют исходя из процентного отношения подтвержденных колоний к общему количеству характерных колоний, взятых для изучения морфологических и биохимических свойств. Результаты испытаний пересчитывют на 1 г (см³) продукта.

ГЛАВА 9

STAPHYLOCOCCUS AUREUS

Стафилококки хорошо переносят высушивание, сохраняя вирулентность. Погибают при прямом воздействии солнечного света в течение 10-12 часов, устойчивы к нагреванию - при 70-80°С погибают за 20-30 мин, при 150⁰С за 10 мин, сухой жар убивает их за 2 часа. Стафилококки очень устойчивы по отношению к находящемуся в продуктах хлористому натрию, при концентрации NaCl равной 7-10% еще наблюдается их размножение. Сахар не препятствует размножению стафилококков, концентрация его более 60% является задерживающим фактором их роста.

Одним из факторов патогенности стафилококков является наличие фермента коагулазы. По наличию коагулазы все стафилококки разделяют на две группы: коагулазоположительные и коагулазоотрицательные. Среди коагулазоположительных стафилококков поражение у человека вызывает S.аureus (золотистый стафилококк), который чаще всего может быть причиной пищевого отравления. Коагулазный тест надежный и широко применяемый для предсказания энтеротоксигенности стафилококка, при этом необходимо учитывать, что коагулазоотрицательные стафилококки так же могут продуцировать энтеротоксины и вызывать пищевые отравления.

Факторами патогенности стафилококков, являются энтеротоксины А, В, С_1-2, Д, Е - термостабильные низкомолекулярные белки. Основные продуценты бактерии III фагогруппы. Именно эти токсины ответственны за развитие пищевых отравлений. Наиболее часто регистрируют интоксикации, вызванные энтеротоксинами А и Д. Энтеротоксины выдерживают автоклавирование при 120°С в течение 20 минут. Снижение терморезистентности энтеротоксина связано с рН среды. Так, при рН 4,5, нагревание на кипящей бане в течение 40 минут снижает активность энтеротоксина в 10 раз, а при рН 3,0 энтеротоксин полностью разрушается.

Стафилококковые пищевые отравления проявляются рвотой, болями в животе и водянистой диареей, уже через 2-6 часов после употребления в пищу контаминированных продуктов. Любой вид пищевого продукта может быть причиной этих отравлений, обычно это кондитерские изделия с кремом, мясные и овощные салаты. Стафилококковые отравления часто связаны с консервами (овощными, мясными, рыбными), в них стафилококки обычно попадают с контаминированным сырьем или растительным маслом. При наличии стафилококка в количестве 10⁶ и более в 1г продукта энтеротоксин накапливается за 4-8ч, причем без внешних изменений банок.

Пищевые продукты, вызвавшие пищевые отравления, обычно бывают значительно обсеменены патогенными стафилококками (10⁵-10⁶г (см³)).

Критерии диагностики. Для оценки результатов исследования на стафилококки при пищевых отравлениях имеет значение количественное обсеменение ими пищевых продуктов, обнаружение возбудителя в рвотных массах, промывных водах, испражнениях.

При обнаружении возбудителя в пищевых продуктах количественный учет служит косвенным показателем наличия энтеротоксина, этот показатель следует использовать, учитывая в каждом конкретном случае определенный пищевой продукт, технологию его приготовления, способ и время хранения.

Бактериологические исследования клинического материала.

Первый день. Рвотные массы, промывные воды, испражнения, высевают в количестве 2 капель на поверхность молочно-солевого или желточно-солевого агара (далее ЖСА). Посевной материал равномерно распределяют по поверхности агара стерильным шпателем и втирают досуха. Посевы инкубируют при 37⁰С в течение 24-48 часов.

На второй день просматривают посевы на чашках с молочно-солевым агаром и ЖСА. На молочно-солевом агаре колонии S.аureus круглые, слегка возвышающиеся над поверхностью агара, с ровными краями, диаметром 2-2,5 мм, окрашены в желтый, золотистый, лимонно-желтый, кремовый, палевый или белый цвет. На ЖСА колонии окружены зоной лецитиназной активности (золотистый стафилококк в 60-70% случаев обладет лецитиназной активностью).

Для накопления культуры на скошенный агар отсевают не менее 2-х колоний, подозрительных на стафилококк, и, прежде всего, колонии, дающие положительную лецитовителлазную реакцию. Посевы инкубируют при 37⁰С 18-24 ч.

Третий день. У выделенных штаммов проверяют морфологические и тинкториальные свойства (окраска по Граму) и наличие плазмокоагулирующей активности. При микроскопии, окрашенные по Граму стафилококки имеют вид фиолетово - синих кокков, располагающихся гроздьями или небольшими скоплениями («кружево»). Плазмокоагулирующую активность определяют в реакции коагуляции плазмы (далее - РКП).

С учетом результатов РКП и лецитовителлазной активности, может быть подтверждена принадлежность выделенного штамма к виду золотистого стафилококка. Если культура обладает только плазмокоагулирующей или только лецитовителлазной активностью, то для окончательного ответа требуется определение ферментации маннита в анаэробных условиях. Ответ выдают в зависимости от результатов, полученных при определении признаков согласно приложению 27 к настоящей Инструкции.

Тест ферментации маннита в анаэробных условиях. Суточную агаровую культуру засевают уколом в столбик полужидкой среды Гисса с маннитом, на поверхность среды наливают 1,5 мл стерильного вазелинового масла для создания анаэробных условий. Посевы инкубируют при 37⁰С, в течении 5 суток, ежедневно просматривают и ведут учет. Положительной считается реакция изменения цвета среды.

Реакция плазмокоагуляции ставится в соответствии с «Инструкцией по применению плазмы кроличьей цитратной сухой», выпускаемой предприятиями по производству бактерийных препаратов. Количественный учет стафилококков выросших при посеве клинического материала не проводят.

Пищевые продукты.

Количество S.аureus в 1 г (см³) продукта определяют методом посева на агаризованные селективно-диагностические среды. Из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведений. 0,1 или 0,2 см³ продукта, или его разведения наносят на поверхность одной из селективно-диагностических сред (Байрд-Паркер агар, молочно-солевой агар, желточно-солевой агар). Преимущественно используют Байрд-Паркер агар. Для посева продукта или каждого его разведения используют две параллельные чашки Петри со средой.

Одновременно производят посев навески продукта или его эквивалентного разведения в среды обогащения (6,0 % солевой бульон и 1 % сахарный бульон). Соотношение между количеством высеваемого продукта или его эквивалентным разведением и питательной средой 1:6 или 1:7. При анализе пищевых продуктов с большим содержанием соли проводят посев продука или его разведения в сахарный бульон, во всех других случаях для посева используют солевой бульон. Посевы на агаризованных и жидких средах инкубируют при 37⁰С в течение 48 ч.

Для подтверждения роста микроорганизмов в жидких средах из них после инкубирования делают пересевы на поверхность одной из селективно-диагностических сред (Байрд-Паркер агар, молочно-солевой агар, желточно-солевой агар). Посевы инкубируют при 37⁰С в течение 24-48 ч.

Просматривают посевы на агаризованных средах и отмечают характер роста. На Байрд-Паркер агаре колонии S.аureus выглядят черными, блестящими, 1,5-2,5 мм в диаметре, окружены зоной лецитиназной активности. Для подсчета количества выросших колоний отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 характерных колоний. Отмечают рост характерных колоний, отсеянных со сред обогащения, без подсчета их количества.

Для подтверждения принадлежности характерных колоний к St. аureus отбирают не менее 5 колоний и пересевают на поверхность скошенной питательной среды (мясо-пептонного агара). Посевы инкубируют при 37⁰С в течение 24 ч. У выросших микроорганизмов определяют отношение к окраске по Граму, плазмокоагулирующую активность, ферментацию маннита в анаэробных условиях. Для определения S.аureus в 1 г (см³) продукта подсчет числа характерных колоний подлежит корректировке, в зависимости от результатов подтверждения принадлежности этих колоний к S.аureus. При подтверждении характерных колоний в 80 % случаев, т. е. не менее чем в 4 из 5 колоний подтвержден рост S.аureus, то считают, что все характерные колонии принадлежат к S.аureus. В остальных случаях количество S.аureus определяют исходя из процентного отношения подтвержденных колоний к общему количеству характерных колоний, взятых для подтверждения. Пересчитывют количество S. аureus на 1 г (см³) продукта.

Биологические исследования.

Биологические исследования производят: для изучения способности выделенных стафилококков образовывать энтеротоксин на питательных средах; для выявления наличия стафилококкового энтеротоксина в продукте. В качестве экспериментальных животных могут быть использованы котята (1,5-2-месячные) и взрослые кошки.

Биопроба на котятах. Исследуемый продукт или пятисуточную молочную культуру выделенного стафилококка (15- 20 мл) скармливают котятам натощак. Если котята не едят данный продукт, следует приготовить взвесь продукта в дистиллированной воде (1:1), хорошо гомогенизировать и споить его по 15-20 мл каждому котенку при помощи пипетки или ложки. В опыте должно быть 2-3 котенка. Положительной реакцией считают рвоту, наступившую через 30-60 минут, иногда наблюдается понос и общая прострация. Рвота, появляющаяся через 5-10 минут, неспецифична. Наблюдение за котятами ведут в течение 4-5 часов. Если за этот период котята не реагируют, биологическая проба считается отрицательной.

Биопроба на кошках. Энтеротоксичность определяют путем внутривенного введения материала взрослым кошкам. Этот метод достаточно чувствителен. Недостатком метода является ограниченность его применения для обнаружения энтеротоксина непосредственно в продуктах. Для обнаружения энтеротоксичности культур пользуются 0,75% агаром на бульоне Хоттингера с 0,25% глюкозы рН 7,4. Чашки, засеянные культурами стафилококков, помещают в эксикатор с 20% углекислотой и инкубируют 48 часов при 37⁰С.

Чтобы получить в эксикаторе 20% углекислоты, насыпают на дно двууглекислую соду из расчета 1 г соды на каждый литр объема эксикатора, загружают его чашками и, немного приоткрыв крышку, наливают 10% соляную кислоту непосредственно на соду (на 1 г соды - 8-9 мл кислоты). После добавления кислоты крышку эксикатора быстро закрывают и притирают.

После инкубации чашки вынимают и на поверхность агара наливают 10 мл физиологического раствора, агар измельчают до равномерной кашицеобразной консистенции и оставляют при комнатной температуре на 2 часа. Экстракт центрифугируют до получения прозрачного слоя, который отсасывают, прогревают в кипящей водяной бане в течение 30 минут и вводят кошкам в количестве 0,5 мл на 1 кг веса тела в вену уха или бедренную вену.

Наличие рвоты и поноса или только рвоты, наступившей в сроки от 30 минут до 3 часов указывает на присутствие энтеротоксина. Каждую кошку можно использовать для этих целей 3-4 раза. При получении отрицательных результатов у кошки, которая ранее была использована для аналогичных определений, необходима проверка на кошке, не бывшей в опыте.

При помощи метода внутривенного введения кошкам решать вопрос о наличии энтеротоксина в пищевом продукте нужно с большой осторожностью. Из продукта, исследуемого на наличие энтеротоксина, готовят взвесь в стерильном физиологическом растворе таким образом, чтобы при последующем центрифугировании получить достаточное количество надосадочной жидкости для постановки биологической пробы. В качестве контроля необходимо получить отрицательный результат у кошки, предназначенной для опыта, при введении надосадочной жидкости, полученной из доброкачественного тождественного продукта, подготовленного тем же способом, что и опытный образец.